Temos sintetizado um análogo romance de pancratistatin com atividade anti-câncer comparável como pancratistatin nativa; curiosamente, o tratamento com tamoxifeno combinatória rendeu uma drástica melhoria na indução de apoptose e autofagia por mitocôndria com efeito mínimo sobre os fibroblastos não cancerosos. Assim, JCTH-4 em combinação com o tamoxifen poderia proporcionar uma terapia anti-cancro segura.
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Artigo de método
Melhoramento de Indução apoptose e autofagia por um sintético C-1 Novel Analogue, de 7 de deoxypancratistatin em adenocarcinoma de mama humano e células de neuroblastoma com tamoxifeno
Neste artigo
Resumo
Resumo
O câncer de mama é um dos cânceres mais comuns entre as mulheres na América do Norte. Muitos dos atuais tratamentos anti-câncer, incluindo a radiação ionizante, através de induzir a apoptose danos ao DNA. Infelizmente, tais tratamentos são não-selectivos para as células cancerosas e produzir toxicidade semelhante em células normais. Relatamos indução selectiva da apoptose em células cancerosas pela pancratistatin composto natural (PST). Recentemente, um novo análogo de PST, um derivado de C-1 acetoximetil de 7-deoxypancratistatin (JCTH-4), foi produzido por síntese de novo e exibe actividade indutora comparável selectiva apoptose em diversas linhagens de células cancerosas. Recentemente, autofagia tem sido implicado em doenças malignas como tanto pró-sobrevivência e os mecanismos de pró-morte em resposta à quimioterapia. O tamoxifeno (TAM) tem demonstrado, invariavelmente, a indução de pró-sobrevivência autofagia em inúmeros cânceres. Neste estudo, a eficácia da JCTH-4 isoladamente e em combinação com a TAM para induzir a morte celular em significância da mama humanor (MCF7) e neuroblastoma (SH-SY5Y) células foi avaliada. TAM sozinho induzida autofagia, mas a morte de células insignificante enquanto JCTH-4 sozinho causou indução significativa da apoptose com alguma indução de autofagia. Curiosamente, o tratamento combinatória produziu um aumento drástico na indução de apoptose e autofágica. Foram monitoradas a dependentes do tempo alterações morfológicas em células MCF7 submetidos a TAM induzida por autofagia, JCTH-4-induzida apoptose e autofagia e morte celular acelerada com o tratamento combinatório usando microscopia de lapso de tempo. Nós demonstramos que estes compostos para induzir a apoptose / autofagia por direccionamento mitocondrial nestas células cancerosas. É importante ressaltar que estes tratamentos não afetaram a sobrevivência dos não cancerosos fibroblastos humanos. Assim, estes resultados indicam que JCTH-4 em combinação com a TAM poderia ser utilizado como uma forma segura e muito potente terapia anti-cancro contra o cancro da mama e células de neuroblastoma.
Protocolo
Introdução
A apoptose, ou do tipo I morte celular programada, é um processo fisiológico que pode operar extrinsecamente, via ligação de um ligando de morte a um receptor de morte, ou intrinsecamente. A via intrínseca da apoptose é iniciada pelo stress intracelular, tais como danos no ADN e disfunção mitocondrial, o que conduz finalmente ao permeabilização da dissipação, mitocôndrias do potencial da membrana mitocondrial (MMP), a libertação de factores apoptogénica a partir do espaço intermembranar mitocondrial, e posterior execução de apoptose 1.
Autofagia é um processo no qual uma célula pausas, degra....
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Discussão
Os compostos de PST e semelhantes têm sido demonstrado que têm propriedades anti-cancro 11-15,21. Nós apresentamos previamente PST natural para desestabilizar a mitocôndria seletivamente nas células cancerosas, que assim induz a apoptose pela liberação de fatores de apoptogénica 12,14. É mais provável que JCTH-4 actua através do mesmo mecanismo; JCTH-4 Fig. causada colapso MMP em células MCF7 como visto com coloração TMRM (Fig. 5a), e aumentou geração de ROS na mit.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelos Cavaleiros de Colombo Capítulo 9671 (Windsor, Ontário), e um CIHR Frederick Banting e Best Charles Canadá Bolsa de Pós-Graduação concedido a Dennis Ma. Obrigado a Robert Hodge e Elizabeth Fidalgo da Silva por sua ajuda com a microscopia de lapso de tempo. Obrigado a Katie Facecchia para editar os vídeos de lapso de tempo de microscopia. Gostaríamos também de agradecer Sudipa junho Chatterjee e Phillip Tremblay, pela revisão crítica deste manuscrito. Este trabalho é dedicado em memória de Kevin Couvillon que perdeu a batalha contra o câncer em 2010.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do material | Companhia | Número de catálogo | |
| SH-SY5Y linha celular | ATCC | CRL-2266 | |
| Modificação de Dulbecco Eagles Médio F-12 de HAM | Sigma-Aldrich | 51448C | |
| Soro fetal de bovino | Gibco BRL | 16000-044 | |
| MCF7 linha celular | ATCC | HTB-22 | |
| Meio RPMI-1640 | Sigma-Aldrich | R 0883 | |
| Aparentemente normal, linha celular humana fetal fibroblastos (NFF) | Coriell Institute for Medical Research | AG04431B | |
| Meio Dulbecco modificado por Eagle, médio de glucose elevada | Thermo Scientific | SH30022.01 | |
| Tamoxifen sal citrato | Sigma-Aldrich | T9262 | |
| 35 mm de vidro de cultura pratos de fundo | MatTek | P35G-014-C | |
| Leica DMI6000 microscópio invertido B | Leica Microsystems | N / A | |
| Hoechst 33342 corante | Molecular Probes | H3570 | |
| Leica DM IRB invertidos microscópio de fluorescência | Leica Microsystems | N / A | |
| A anexina V-488 AlexaFluor | Invitrogen | A13201 | |
| Trypan solução azul | Sigma-Aldrich | T8154-20ML | |
| Hemocitómetro | Fisher Scientific | 267110 | |
| WST-1 reagente | Roche Applied Science | 11644807001 | |
| Wallac Victor 3 1420 Multilabel Contador | PerkinElmer | 1420-011 | |
| Tetrametilrodamina metil éster (TMRM) | Gibco BRL | T-668 | |
| Moedor de tecido de vidro | Fisher Scientific | K8885300-0002 | |
| BioRad ensaio de proteína | Bio-Rad Laboratories | 500-0001Bottom da Forma | |
| Amplex Vermelho | Invitrogen | A12222 | |
| Peroxidase de rábano (HRP) | Sigma-Aldrich | P8125 | |
| Spectramax Gêmeos XPS | Molecular Devices | 3126666 | |
| Anti-LC3 anticorpo criado em coelhos | Novus Biologicals | NB100-2220 | |
| Anticorpo anti-rato conjugado com HRP secundária | Abcam | ab6728 | |
| Anticorpo anti-coelho conjugado com HRP secundária | Abcam | ab6802 | |
| Substrato de peroxidase de quimioluminescência | Sigma-Aldrich | CPS160 | |
| Monodansylcadaverine | Sigma-Aldrich | 30432 |
Referências
- Earnshaw, W. C. Apoptosis. A cellular poison cupboard. Nature. 397, 387-389 (1999).
- Kroemer, G., Mariño, G., Levine, B. Autophagy and the integrated stress response. Mol. Cell. 40, 280-293 (2010).
- Dalby, K. N., Tekedereli, I., Lopez-Berestein, G., Ozpolat, B.
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Reimpressões e permissões
