Artigo de método

Pressão Ventricular Esquerda de medição no final de Ratos embrionárias e Neonatal

DOI:

10.3791/3756

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23 de fevereiro de 2012

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1Department of Biomedical Engineering, Saint Louis University, 2Department of Internal Medicine, Washington University School of Medicine

Neste artigo

Resumo

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Medindo a pressão ventricular esquerda (LV) em ratinhos embrionárias e neonatal é descrito. A pressão é medida através da inserção de uma agulha ligada a um transdutor cheio de fluido para o VE sob a orientação de ultra-som. Cuidados devem ser tomados para manter a função cardíaca normal durante o protocolo experimental.

Resumo

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A pressão arterial aumenta significativamente durante o desenvolvimento embrionário e pós-natal em animais vertebrados. No rato, o fluxo sanguíneo é primeiro detectável por volta do dia embrionário (E) 8,5 1. Pressão sistólica do ventrículo esquerdo (LV) é de 2 mmHg em E9.5 e 11 mmHg na E14.5 2. Nessas fases mid-embrionárias, a LV é claramente visível através da parede torácica para medições de pressão invasiva, pois as costelas ea pele não estão totalmente desenvolvidos. Entre E14.5 e nascimento (aproximadamente E21) métodos de imagem deve ser usado para visualizar o LV. Após o nascimento, a média aumenta a pressão arterial de 30 a 70 mmHg desde o primeiro dia pós-natal (P) 2 - 35 3. Para além P20, a pressão arterial pode ser medida com cateteres de estado sólido (isto é, Millar ou Scisense). Antes de P20, estes cateteres são grandes demais para o desenvolvimento de artérias de rato e de pressão arterial deve ser medida com o costume puxado cateteres de plástico ligados a transdutores cheias de líquido de pressão ou 3 micropipetas de vidro attdoíam a servo-transdutores de pressão nulos 4.

O nosso trabalho recente demonstrou que o maior aumento na pressão sanguínea ocorre durante os embrionário tardios para período pós-natal precoce em ratinhos 5-7. Este grande aumento na pressão sanguínea pode influenciar o fenótipo da célula de músculo liso (SMC) em artérias em desenvolvimento e desencadear eventos mecanotransdução importantes. Na doença humana, onde as propriedades mecânicas das artérias desenvolvimento estão comprometidos por defeitos de proteínas da matriz extracelular (Síndrome ie Marfan 8 e estenose aórtica supravalvar 9) as mudanças rápidas na pressão sanguínea durante este período pode contribuir para o fenótipo e gravidade da doença através de alterações na mecanotransdução sinais. Portanto, é importante ser capaz de medir as alterações da pressão arterial durante embrionário tardias e períodos neonatais em modelos de ratos de doenças humanas.

Nós descrevemos um método para medir pressão do VE, no final deembrionário (E18) e pós-natal precoce (P1 - 20) camundongos. Uma agulha ligada a um transdutor de pressão cheio de fluido é inserido no ventrículo esquerdo sob a orientação de ultra-som. É tomado cuidado para manter a função cardíaca normal durante o protocolo experimental, especialmente para os ratos embrionários. Os dados representativos são apresentados e limitações do protocolo são discutidos.

Protocolo

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1. O ultra-som e sistema de pressão

  1. Iniciar o sistema de ultra-som de acordo com as instruções dos fabricantes (Vevo 770, Visualsonics). Preencha a sonda apropriado (idade E18 - P7 = modelo 708, idade> = P7 modelo 707B) com água destilada e se conectar ao sistema de ultra-som. Coloque a sonda no suporte ajustável na orientação aproximada necessária para obter uma vista LV longo do eixo para um rato montado na plataforma de imagem de modo que o vértice do VE é apontada para o braço de injecção.
  2. O sistema de pressão é constituído por um transdutor de pressão cheio de fluido, amplificador ponte, o sistema de aquisição de dados e de software de grava....

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Discussão

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O protocolo apresentado aqui fornece um método para medir a pressão no VE embrionário atrasado e cedo ratinhos neonatais. A principal limitação deste protocolo é a resolução temporal do sistema de pressão. O sinal de pressão é amortecido à medida que viaja a partir do VE, através da agulha para o transdutor, e apenas os valores médios de pressão pode ser gravado. O amortecimento pode ser minimizados através da utilização da maior agulha possível, mas a agulha deve caber dentro do lúmen do VE para diferentes ratinhos env.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Agradecimentos

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Este trabalho foi financiado, em parte, pelo NIH concede HL087653 e HL105314. Alguns dos métodos foram desenvolvidos no laboratório do Dr. Robert Mecham da Universidade de Washington School of Medicine.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Nome do reagente / equipamentos Companhia Número de catálogo Comentários
Sistema de ultra-sonografia de alta resolução Visualsonics Vevo 770 Ou outro sistema de ultra apropriado
Sondas de ultra-som de alta freqüência Visualsonics 708 e 707B
Plataforma de imagem e braço para injeções Visualsonics Imagem Station 2 Com ECG e controle de temperatura gabarito da plataforma
Transdutor de pressão Instrumentos AD MLT 844
Amplificador Ponte Instrumentos AD ML221
Dados do sistema de aquisição Instrumentos AD ML866
Dados software de gravação Instrumentos AD LabChart
Anel de pé e braçadeira Diversos fornecedores Para segurar transdutor de pressão durante as medições
Torneiras de 3 vias com conexões luer, bloqueio masculino Cole Parmer 30600-02
1/16 "Tubo Tygon ID Cole Parmer 06408
Luers masculino e feminino w espigão / 1/16 " Cole Parmer 45510-50 45510-00
24 tubo "com luer macho e fêmea em cada extremidade Cole Parmer 30600-60
3 e 10 mL seringas BD Biosciences
30 e 25G agulhas BD Biosciences 1,5 polegadas de comprimento
Big Ben manômetro Riester 1456-100
Salina Diversos fornecedores
Heparina Diversos fornecedores
Gel de ultra-som Parker Aquasonic 100
Loção removedor de pêlos Nair

Referências

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  1. Ji, R. P. Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper. Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).
  2. Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S.

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