O artigo descreve uma técnica simplificada de córnea especiais de consumo e eviscerar os tecidos da retina do globo ocular de humanos doadores cadavéricos. A técnica descrita aqui vai ajudar a impostos especiais de consumo tecidos de boa qualidade para ser utilizados para transplantação, cirúrgicos ou de pesquisa, sem danificar outros tecidos do globo ocular.
Enucleação é o processo de recuperação do globo ocular de um dador de cadáver deixando o resto do globo não perturbada. Excisão refere-se à recuperação de tecidos oculares, especialmente córnea, cortando-a separada a partir do globo ocular. Evisceração é o processo de remoção dos órgãos internos referidos aqui como retina. O globo ocular consiste na córnea, a esclerótica, o corpo vítreo, a lente, a íris, a retina, a coróide, etc músculos (Suppl. Figura 1). Quando um paciente está a sofrer de lesões da córnea, a córnea precisa de ser removido e um saudável deve ser transplantado por cirurgias keratoplastic. Doenças genéticas ou defeitos na função da retina pode comprometer a visão. Globos oculares humanos pode ser utilizado para vários procedimentos cirúrgicos, tais como bancos olho, o transplante da córnea humana ou esclerótica e investigação sobre os tecidos oculares. No entanto, há pouca informação disponível sobre a excisão da córnea e da retina humana, provavelmente devido ao lacessibilidade imited para os tecidos humanos. A maioria dos estudos que descrevem procedimentos semelhantes são realizados em modelos animais. Os cientistas da pesquisa depende da disponibilidade de tecidos oculares devidamente dissecadas e bem conservada, a fim de ampliar o conhecimento sobre a homeostase humana olho, desenvolvimento e função. Como recebemos grande quantidade de globos oculares, dos quais aproximadamente 40% (Tabela 1) deles são usados para fins de pesquisa, somos capazes de realizar grande quantidade de experiências sobre esses tecidos, definindo técnicas para consumo e preservá-los regularmente.
A córnea é um tecido avascular, que permite a transmissão de luz na retina e para este propósito deve sempre manter um bom grau de transparência. Dentro da córnea, a região limbo, que é um reservatório das células estaminais, ajuda a reconstrução de células epiteliais e restringe o crescimento excessivo da conjuntiva manter a transparência da córnea e de clareza. O tamanho e th ickness da córnea são críticos para a visão clara, como alterações em qualquer um deles pode levar a distraído visão, claro. A córnea compreende de 5 camadas, a) epitélio, b) camada de Bowman, c) estroma, d) membrana de Descemet ee) endotélio. Todas as camadas devem funcionar corretamente para garantir uma visão clara 4,5,6. A coróide é a túnica intermédia entre a esclerótica e da retina, delimitada no interior pela membrana de Bruch e é responsável para o fluxo de sangue no olho. A coróide também ajuda a regular a alimentação de temperatura e material para as camadas exteriores da retina 5,6. A retina é uma camada de tecido nervoso, que cobre a parte de trás do globo ocular (Suppl. Figura 1) e consiste de duas partes: uma parte fotorreceptor e uma parte não receptivo. A retina ajuda para receber a luz a partir da córnea e do cristalino e converte-os em a energia química, eventualmente, transmitido para o cérebro, com a ajuda do nervo óptico 5,6. ove_content "> O objetivo deste trabalho é fornecer um protocolo para a dissecção dos tecidos da córnea e da retina de globos oculares humanos. Evitar a contaminação cruzada com tecidos adjacentes e preservando a integridade do RNA é de fundamental importância como esses tecidos são indispensáveis para fins de pesquisa voltadas em (i) caracterizar o transcriptoma dos tecidos oculares, (ii) o isolamento de células-tronco para projetos de medicina regenerativa, e (iii) avaliar diferenças histológicas entre os tecidos normais de / afetados assuntos. Neste artigo descrevemos a técnica que usamos atualmente para remover a córnea, a coróide e tecidos da retina de um globo ocular. Aqui nós fornecemos um protocolo detalhado para a dissecção do globo ocular humano ea excisão dos tecidos da córnea e da retina. O vídeo que o acompanha vai ajudar os pesquisadores a aprender uma técnica adequada para a recuperação de preciosos tecidos humanos que são difíceis de encontrar regularmente.
1. Na excisão in situ da córnea de globos oculares
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Tanto a excisão, correta e boa conservação dos tecidos da córnea e da retina são críticos como defeitos menores, tais como lesão endotelial ou elevado número de dobras de Descemet pode levar à falência do enxerto da córnea enquanto que alterações de temperatura ou manuseio incorreto pode comprometer a integridade dos tecidos da retina. O objetivo deste trabalho é mostrar como os tecidos da córnea e da retina pode ser isolado da melhor maneira, sem induzir danos ou alterações que possam comprometer sua utilização para tr.......
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Os autores não têm conflito de interesse.
Este trabalho foi financiado em parte através de doações da Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 e Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Os autores agradecem o Dr. C. Griffoni para os dados de 2009/2010 de síntese sobre o uso de globos oculares humanos.
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Materiais para excisão da córnea e retina.
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Descrição do produto | Dimensões | Empresa / Instituto | |
| Guardado descartável bisturi | Tamanho de lâmina 15 | Swann-Morton | |
| Ataduras estéreis | 5 cm x 5 cm, 8 camadas, 5 unid | Artsana | |
| Toalha descartável estéril médica | 35 X 50 cm | U.Jet | |
| Tesoura estéril | Blades 24 mm / comprimento total. 95 mm curvo, sem corte | e.janach | |
| Pinças esterilizadas | Aço inoxidável de 11 mm -100 X 2 governado por 0,70 mm de dentes | e.janach | |
| Garra da córnea - dispositivo médico descartável | NIIOS (Hippocratech) | ||
| Preparativos | |||
| PBS | 100 ml de PBS [10x] em 900 ml d / w (água destilada) | Sigma-Aldrich | |
| Na-tiossulfato | 1 gm de Na-tiossulfato em 1 litro de PBS [1x] | Sigma-Aldrich | |
| I-PVP | 5 gm I-PVP em 1 litro d / w | Sigma-Aldrich |
Tabela 2. A tabela descreve os materiais utilizados para a excisão de córnea e da retina e da empresa que são recebidas a partir de.
Materiais para meio de armazenamento (2000 ml).
| Componentes | Fornecedor | Número de catálogo | Concentração | Quantidade |
|---|---|---|---|---|
| MEM(1X) líquido | Invitrogen | 32360-034 | 1900 ml | |
| Piruvato de sódio | Invitrogen | 11360-039 | 1 mM (10 ml / l) | 20 ml |
| L-glutamina | Invitrogen | 25030-032 | 2mM (10 ml / l) | 20 ml |
| Antibiótico / antimicótico | Sigma-Aldrich | A5955-20ML | 10 ml / l | 20 ml |
| De soro de vitelo recém-nascido | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml / l) | 40 ml |
Tabela 3. Materiais para meio de armazenamento.
Preparação de meio de armazenamento
Adicionar todos os ingredientes, usando as concentrações específicas como dadas acima em um frasco e misturar bem. Filtrá-losusando tamanho de poro de 0,2 micron de filtro (Millipore, Milão, Itália), com a ajuda de uma bomba peristáltica. Preservar o meio nas garrafas à RT.
Materiais para meio de transporte (2000 ml).
| Componentes | Fornecedor | Número de catálogo | Concentração | Quantidade |
|---|---|---|---|---|
| MEM líquido (1X) | Invitrogen | 32360-034 | 1800 ml | |
| Piruvato de sódio | Invitrogen | 11360-039 | 1 mM (10 ml / l) | 20ml |
| L-glutamina | Invitrogen | 25030-032 | 2mM (10 ml / l) | 20ml |
| De soro de vitelo recém-nascido | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml / l) | 40 ml |
| Dextran t500 | Pharmacosmos | 551005004007 | 6% (60 g / litro) | 120 g / l |
Tabela 4. Material para o meio de transporte.
Preparação de meio de transporte
Adicionar dextrano 6% em ~ 1,5 litros de MEM e deixe durante a noite. Adicionar o resto dos ingredientes nos meios de comunicação e filtrar através de filtro de 0,2 micron (Millipore, Milão, Itália), utilizando uma bomba de vácuo. Preservar o meio nas garrafas à RT.
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