Coleta de sangue para análise bioquímica em Zebrafish Adulto

Resumo

Este artigo apresenta uma técnica de coleta de sangue da aorta dorsal do peixe zebra. Ele também fornece instruções para a obtenção de soro para uso em análises bioquímicas, tais como testes para determinação dos níveis de colesterol e triglicérides.

Resumo

O peixe-zebra tem sido utilizado como um modelo animal para estudos de várias doenças humanas. Ela pode servir como uma plataforma poderosa pré-clínico para estudos de acontecimentos moleculares e estratégias terapêuticas, bem como para avaliar os mecanismos fisiológicos de cerca de ¹ patologias.

Há relativamente poucas publicações relacionadas à fisiologia do peixe-zebra adulto de órgãos e sistemas ^2, que podem levar os pesquisadores a concluir que as técnicas básicas necessárias para permitir a exploração de sistemas de zebrafish faltam ^3. Hematológicas valores bioquímicos do peixe-zebra foram relatados primeiramente em 2003 por Murtha e ⁴ colegas que empregou uma técnica de coleta de sangue primeiramente descrita por Jagadeeswaran e colegas em 1999. Resumidamente, o sangue foi recolhido através de uma ponta micropipeta através de uma incisão lateral, a aproximadamente 0,3 cm de comprimento, na região da aorta dorsal ^5. Devido às dimensões hora envolvidos, estaé uma técnica de alta precisão requerendo um praticante altamente qualificado. A mesma técnica foi utilizada pelo mesmo grupo em outra publicação no mesmo ano ^6. Em 2010, Eames e colegas avaliaram os níveis de glucose no sangue em zebrafish ^7. Ganharam acesso ao sangue através da realização de decapitações com a tesoura e depois inserir um tubo de colheita heparinizado microcapilar na articulação peitoral. Eles mencionam dificuldades com hemólise que foram resolvidos com uma temperatura de armazenamento adequado com base no trabalho Kilpatrick et al. ^8. Ao tentar usar a técnica Jagadeeswaran no nosso laboratório, verificou-se que era difícil de fazer a incisão no lugar precisamente a direita, como para não permitir que uma quantidade significativa de sangue a ser perdido antes da recolha pode ser iniciado.

Recentemente, Gupta et al. ⁹ descreveu como dissecar órgãos zebrafish adulto, nozinho et al ^10. Descrito como executar intraperitoninjeções EAL e Pugach et al. ¹¹ descrito como realizar retro-orbital injeções. No entanto, mais estudos são necessários para explorar mais técnicas básicas para a investigação em zebrafish.

O pequeno tamanho do zebrafish apresenta desafios para os pesquisadores que o utilizam como modelo experimental. Além disso, dado este pequenez de escala, é importante que as técnicas simples são desenvolvidos para permitir aos investigadores para explorar as vantagens do modelo de peixe-zebra.

Protocolo

1. Texto Protocolo

1. Antes de recolha de sangue do peixe-zebra, é necessário para preparar a água anestesiar. Verter ~ 200 ml de água de aquário em um recipiente com uma capacidade de 500 ml. Adicionar ~ 200 g de pedaços de gelo. A temperatura deve ser de cerca de 4 ° C. À medida que os pedaços de gelo derreter, será necessário adicionar mais fichas de gelo para manter uma temperatura constante próximo de 4 ° C.
2. Quando a água anestesiar está pronto, preparar os materiais necessários para a coleta de sangue. Coloque uma ponta de retenção baixa em uma pipeta P20 e deixar o pipetador onde ele pode ser facilmente acessado. Não permita que a ponta da pi....

Discussão

Este artigo apresenta uma técnica simples que permite que mais sangue e análise de soro em experimentos de zebrafish. Esta técnica tem o potencial de contribuir para estudos futuros zebrafish hematológicas que exigem dados de parâmetros sanguíneos. Deve também permitir para aplicações maiores do peixe-zebra como um modelo experimental.

Esta técnica não exige habilidades especiais ou de aplicação de uma técnica precisa. Além disso, permite-se o dobro da quantidade de sangue a ser recolhida em.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nome do reagente	Companhia	Número de catálogo	Comentários
Pontas de baixa retenção	Applied Biosystems	022493020
Eppendorf Centrífuga 5415D	Eppendorf	Descontinuado