Protocolo de Coleta para Pâncreas Humano

Summary

Este vídeo demonstra um processo para o processamento de dissecção pâncreas humano em formatos de armazenamento. Orientação anatómica é mantida ao longo das regiões pancreáticas para permitir a definição da composição de ilhotas regional e densidade.

Abstract

Esta dissecção e procedimento de amostragem foi desenvolvido para a Rede de Doadores de Órgãos do pâncreas com Diabetes programa (nPOD) para padronizar a preparação do pâncreas recuperado de doadores de órgãos cadáveres. O pâncreas é dividido em 3 regiões principais (cabeça, corpo, cauda), seguido por seriados transversais ao longo do eixo medial para lateral. Secções alternadas são utilizados para parafina fixo e blocos congelados frescos e amostras remanescentes são picados para encaixe preparações amostra congelada, com ou sem inibidores de RNAse, por DNA, RNA, ou o isolamento de proteínas. O objetivo geral do procedimento de dissecção pâncreas é para provar o pâncreas inteiro, mantendo a orientação anatômica.

Heterogeneidade endócrino célula em termos de composição ilhéu, tamanho e número é relatado para ilhotas humanos em comparação com ilhotas de roedores ^1. A maioria dos ilhéus humanos a partir da cabeça do pâncreas, regiões do corpo e da cauda são compostos de insulina containin-g beta-células seguido por proporções inferiores de glucagon contendo ct-células e somatostatina-ô-contendo células. Células pancreáticas polipeptídeo contendo PP e células que contêm grelina epsilon também estão presentes, mas em pequenas quantidades. Em contraste, a região uncinado contém ilhotas que são principalmente compostas por células pancreáticas polipéptido contendo ^{2 pp.} Essas variações regionais ilhotas surgem diferenças de desenvolvimento. O pâncreas desenvolve a partir das gemas pancreáticas ventral e dorsal no estômago e depois da rotação do estômago e do duodeno, os movimentos do lóbulo ventral e os fusíveis com o ³ dorsal. O lóbulo ventral forma a porção posterior da cabeça, incluindo o processo uncinado enquanto o lobo dorsal dá origem ao resto do órgão. Variação de pâncreas Regional também é relatado com a região da cauda com maior densidade de ilhota em comparação com outras regiões e os dorsais lobo derivados componentes submetidos a atrofia seletiva na diabetes tipo 1 Órgãos, tecidos e muitas vezes são recuperadas a partir dos doadores de órgãos e incluir nós pancreáticas linfáticos, baço e gânglios linfáticos não-pancreáticas. Estas amostras são recuperados com os formatos similares às utilizadas para o pâncreas com a adição de isolamento de células criopreservadas. Quando o duodeno proximal está incluído com o pâncreas, mucosa duodenal pode ser recolhida para parafina e congeladas blocos e preparações instantâneas picados congelados.

Protocol

1. Set-up

1. Cassetes de etiquetas para blocos de parafina manualmente com um lápis, ou automaticamente com uma impressora cassete. Incluir o identificador do doador (CaseID), tipo de amostra, o número de alíquota, e qualquer identificação adicional única (planilha Case, Anexo 1 ).
2. Rotular moldes Oct como para cassetes com um marcador permanente. Corte retângulos de 5-10 cm de papel alumínio.
3. Imprima ou manualmente etiqueta com o marcador permanente todos os frascos e tubos. Incluir frascos suficientes para amostras de encaixe picados congelados e tubos c....

Discussion

O objectivo deste procedimento é definir um processamento pâncreas padrão que pode ser harmonizadas entre os locais de recolha múltiplas e, assim, permitir a comparação dos resultados obtidos por diferentes grupos. O método de dissecção é baseada no padrão cirúrgicos práticas patologia com passos adicionais para anotação das regiões mais importantes do pâncreas seguido por intra-regionais subdivisões. Padronização de métodos de processamento biospecimen é necessário para facilitar a recolha de amostras de alta qualidade.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome do reagente	Companhia	Número de catálogo	Comentários
Instrumentos de dissecção incluindo bisturis com 22 lâminas	Vário	Vário
Tubos de centrífuga (15 e 50 ml)	Fisher Scientific	05-539-5, 430828	Estéril
Criotubos (1,8 ml)	VWR América do Norte	89004-300	Estéreis, códigos de barras opcionais
RNAlater	Ambion	AM7021
Tinta Patologia Cirúrgica
Cassetes	Mercedes Medical	CAS ECO109
10% formalina tamponada neutra	Fisher Scientific	23-245-685
Congelamento de mídia PTU	TissueTek	4583
Moldes	ThermoScientific	58952	Vários tamanhos
Isopentano	Fisher Scientific	O3551-4	Outubro banho frio
O gelo seco			Outubro banho frio
Nitrogênio líquido em frasco de Dewar			Encaixe criotubos de congelamento
Prato de cultura de células (100 mm)	Corning	430167	Estéril
Hyclone DMEF	ThermoScientific	SH30023.01	Loja, estéril refrigerado, glutamina incluído
Soro Fetal Bovino	Cellgro	35-010-CV	Estéreis, loja de alíquotas congeladas
Penicilina / estreptomicina / Antifungal	GIBCO	15240-062	Estéreis, loja de alíquotas congeladas
Digite 9 Parafina	Richard Allan-Científico	8337
D-PBS 1X	GIBCO	14190-144	Estéril
Paraformaldeído 16%	EM Sciences	15710	Faça loja fresco, refrigerado
Glutaraldeído 8%	EM Sciences	16019	Faça loja fresco, refrigerado
Nível de Biossegurança 2 capa	Vário
Ultra-baixo congelador	Vário
Printer Cassete Sakura	Sakura
Sakura VIP300	Sakura		Processador automático de parafina
Estação de Inclusão em Parafina	ThermoFisher