Artigo de método

Reparação de um modelo de defeito crítico porte calvária Usando derivadas de tecido adiposo células do estroma colhidas lipoaspirado

DOI:

10.3791/4221

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31 de outubro de 2012

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1Department of Surgery, Stanford University , 2Department of Surgery, Duke University , 3Department of Surgery, Saint Joseph Mercy Hospital, 4School of Medicine, University of California, San Francisco , 5School of Dentistry, University of California, Los Angeles

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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Este protocolo descreve o isolamento de derivadas de tecido adiposo a partir de células do estroma lipoaspirado e a criação de um defeito de 4 milímetros de tamanho crítico calvária em avaliar a regeneração óssea.

Resumo

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Reparação e regeneração do esqueleto craniofacial oferece a promessa de formação de tecido de novo através de uma abordagem com base em células, utilizando células estaminais. Derivadas de tecido adiposo células do estroma (ASC) têm provado ser uma fonte abundante de células estaminais multipotentes capazes de sofrer diferenciação osteogénica condrogénica, adipogênica e miogénica. Muitos estudos têm explorado o potencial osteogénico destas células in vivo com o uso de biomateriais de andaimes diferentes para entrega celular. Tem sido demonstrado que, utilizando um osteocondutor, hidroxiapatite revestido de poli (ácido láctico-co-glicólico) (PLGA-HA) scaffold semeado com ASCs, um defeito de tamanho crítico calvária, um defeito que é definido pela sua incapacidade de sofrer espontânea cura durante o tempo de vida do animal, podem ser eficazmente mostrar regeneração óssea robusta. Este modelo in vivo demonstra a base de abordagens de translação com vista a regenerar o tecido ósseo - o celularcomponente e matriz biológica. Este método serve como um modelo para a aplicação final clínico de uma célula progenitora para a reparação de um defeito do tecido específico.

Protocolo

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1. Isolamento de células e Expansão

  1. Todos consentimento do paciente e os protocolos experimentais foram analisados ​​e aprovados pela Universidade de Stanford Conselho de Revisão Institucional (Protocolo n º 2188 e n º 9999).
  2. Obtenção de tecido adiposo humano subcutânea de procedimentos lipoaspiração eletivas sob local / anestesia geral.
  3. Haverá duas camadas na lipoaspirado (Figura 1A). O sobrenadante contém a grande maioria do material processado celular. A camada inferior é geralmente injectado salino. Derivadas de tecido adiposo células estromais podem ser colhidas a partir de qualquer camada, mas o rendimento....

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Discussão

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Uma vez que o isolamento do derivado de tecido adiposo a partir de células do estroma 2 lipoaspirado, estas células foram diferenciadas em uma grande variedade de linhagens celulares. O tecido adiposo é de origem mesodérmica e, portanto, multipotentes derivadas de tecido adiposo células estromais serão provavelmente mais eficaz com a aplicação para uma linhagem mesodérmica. A capacidade de gerar tecido ósseo é especialmente crítico dada a escassez de área doadora de um autoenxerto e as limitações inerentes de.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Agradecimentos

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Gostaríamos de agradecer ao Dr. George Commons e Dr. Dean Vistnes por seu apoio e colaboração da nossa pesquisa. Este trabalho é apoiado pelo Instituto Nacional de Bolsas de pesquisa Dental e Craniofacial um R21 DE019274-01, R01EB009689 e RC2 DE020771-02, da Fundação Oak e Hagey Laboratório de Medicina Regenerativa de Pediatria para MTL Dr. Hyun é apoiado pela Saint Joseph Mercy Hospital GME .

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Nome do reagente: Companhia Número de catálogo Comentários (opcional)
Lipoaspirado Colheita
PBS Gibco 10010-023
Solução Salina Equilibrada de Hank Cellgro 21-023 CV-
Colagenase Sigma C6885-500mg
Célula de 100 um filtro BD Falcon 352360
Steri-top 500 ml 0,22 mM filtro Millipore SCGPT05RE
Defeito calvária
Z500 Brushless MicromotorsUM50C NSK NSKZ500
Circular Faca 4,0 milímetros Xemax Cirúrgica CK40

Referências

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  1. Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
  2. Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 42....

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