Apresentamos um modelo de transplante renal de ratos para não-invasiva avaliar a rejeição do enxerto aguda usando tomografia por emissão de pósitrons com 18F-fluorodeoxyglucose.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Imagem não invasivo de rejeição do enxerto aguda após Rat Transplante Renal Usando
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O número de pacientes com doença renal em estágio final, eo número de pacientes transplantados renais aumenta continuamente. Episódios de rejeição do enxerto celular aguda (AR) são um fator prognóstico negativo para a sobrevivência do enxerto a longo prazo, e seu diagnóstico atempado é fundamental para a função do enxerto 1. No momento, AR só pode ser definitivamente diagnosticada por biópsia por agulha, que, como um método invasivo, descobre risco significativo de lesões ou até mesmo a perda do enxerto. Além disso, as biópsias não são viáveis em pacientes que tomam medicamentos anticoagulantes e no site amostragem limitada desta técnica pode resultar em resultados falso-negativos se a AR é focal ou irregular. Como consequência, isto deu origem a uma busca permanente de novos métodos de detecção de AR, o que muitas vezes tem de ser feito em animais, incluindo a utilização de vários modelos de transplante.
Desde o início dos anos 60 rato transplante renal é um método experimental bem estabelecido para o exação e análise de AR 2. Nós aqui presente, além de pequenos animais tomografia por emissão de pósitrons (PET), utilizando 18 F-(FDG) para avaliar a AR em um modelo alogênico uninefrectomizados rato transplante renal e propor enxerto imagem FDG-PET como uma nova opção para a não-invasivo, específico e diagnóstico precoce de AR também para a situação humana 3. Além disso, este método pode ser aplicado para o follow-up para melhorar o monitoramento da rejeição do transplante 4.
Protocolo
1. Recuperação Organ Donor
- Configure o microscópio estereotáxica, peso registro da 8-10 semanas de idade rat (doador e receptor de peso corporal deve corresponder).
- Anestesiar o rato doador (Lewis Brown Noruega F1, LBN F1) usando oxigênio / inalação de isoflurano (isoflurano 4% / 2 L / min de oxigênio). Manutenção da anestesia através da redução de 2-2,5% de isoflurano.
- Colocar o rato anestesiado no bloco operatório. Fix extremidades do rato com fita adesiva sobre o bloco e aplicar pomada oftálmica (Bepanthen, Bayer) para os olhos do rato.
- Barbear e desinfectar o abdómen do rato e de uma incisão na linha mediana ventral a part....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Histologia
Durante AR leucócitos, isto é, principalmente os linfócitos T são recrutados para o transplante, ao passo que a severidade da rejeição é reflectido pelo grau de inflamação. Nas Periódica-Acid-Schiff (PAS) de coloração descrito aqui (Figura 1), o enxerto renal mostra sinais histológicos significativos de AR, a saber glomerulite, tubulite, endothelialitis e infiltração do enxerto (Figura 1, ATX POD4) (POD = dia pós-operatório) enquanto que os .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
FDG-PET imagem é uma nova opção para o diagnóstico de rejeição aguda. Devido à sua natureza não-invasivo e específico, FDG-PET é vantagens em comparação com os diagnósticos clássicos por biópsia de agulha. Em contraste com o tamanho de uma biópsia, a análise de FDG-PET, todo o enxerto amostra limitada. Além disso, pode-se aplicar a pacientes em terapia anticoagulante, e pode-se realizar medidas de PET repetitivamente por exemplo, para monitorizar a eficácia do tratamento 4. Além disso, já foi mostrad.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 656, Münster, Alemanha, projetos de C7 e C6) eo IZKF Münster (Core unidade SMAP). Os autores são gratos a Van Le Truc, Anne Kanzog, Ute Neugebauer, Wiebke Gottschlich e Roman Priebe para assistência técnica excelente e Daniel Burkert e Sven Fatum para a produção de radioisótopos.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Equipamento | |||
| Porta-agulha Mathieu - 14 cm | Fine Science Tools | 12010-14 | |
| Porta-agulha microcirúrgico Castroviejo - 9 cm | Fine Science Tools | 12061-01 | |
| Tesoura cirúrgica - Ponta fina/romba | Fine Science Tools | 14001-12 | |
| Tesoura de íris - ToughCut reta 11,5 cm | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Tesoura de Vannas com mola para estudantes | Fine Science Tools | 91500-09 | |
| Tesoura de Vannas com mola - Lâminas de 3 mm | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| Pinça para tecidos com dentes 1x2 - 12 cm | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Pinça Dumont SS-45 - Inox Medical | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| Aparador de clips Micro-Serrefine com trava | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Micro-Serrefine 6 mm x 1 mm | Fine Science Tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine 4 mm x 0,75 mm | Fine Science Tools | 18055-04 | |
| Reagente | |||
| Isoflurano (por exemplo Forene 100% v/v) | Abott | ||
| Antisséptico cutâneo (por exemplo Octeniderm) | Schülke | ||
| Iodo de povidona (por exemplo Betaisodona) | Mundipharma | ||
| Pomada oftálmica (por exemplo Bepanthen) | Bayer | ||
| Buprenorfina (por exemplo Temgesic) | RB Pharmaceuticals | ||
| Solução de perfusão HTK (por exemplo CUSTODIOL HTK) | Dr. Franz Köhler Chemie | ||
| Fio cirúrgico Mersilene 0 | Ethicon | EH6665E | |
| Fio cirúrgico Mersilene 4-0 | Ethicon | EH6732H | |
| Fio cirúrgico Prolene 6-0 | Ethicon | 8697H | |
| Fio cirúrgico Ethilon 9-0 | Ethicon | 2809G | |
| Seda cirúrgica 5-0 | Vömel | 14739 | |
| Canula (por exemplo Microlance 3, 27G ¾) | BD | 302200 |
Referências
- Wu, O., Levy, A. R., Briggs, A., Lewis, G., Jardine, A. Acute rejection and chronic nephropathy: a systematic review of the literature. Transplantation. 87, 1330-1339 (2009).
- Miller, B. F., Gonzales, E., Wilchins, L. J., Nathan, P. Kidney transplantation in the rat. Nature. 194
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
