Lapso de tempo de imagem de pré-neoplásicas primárias células epiteliais mamárias derivados de modelos de rato geneticamente modificado do cancro da mama

Rebecca E. Nakles; Sarah L. Millman; M. Carla Cabrera; Peter Johnson; Susette Mueller; Philipp S. Hoppe; Timm Schroeder; Priscilla A. Furth

doi:10.3791/50198

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Artigo de método

Lapso de tempo de imagem de pré-neoplásicas primárias células epiteliais mamárias derivados de modelos de rato geneticamente modificado do cancro da mama

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DOI:

10.3791/50198

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8 de fevereiro de 2013

Rebecca E. Nakles¹ , Sarah L. Millman¹ , M. Carla Cabrera¹ , Peter Johnson¹^,² , Susette Mueller¹^,² , Philipp S. Hoppe³ , Timm Schroeder³ , Priscilla A. Furth¹^,²^,⁴^,⁵

¹Department of Oncology, Georgetown University, ²Lombardi Comprehensive Cancer Center, Georgetown University, ³Stem Cell Dynamics, Helmholtz Zentrum München - German Research Center for Environmental Health, ⁴Department of Medicine, Georgetown University, ⁵Department of Nanobiomedical Science and WCU Research Center of Nanobiomedical Science, Dankook University

Neste artigo

Resumo

Lapso de tempo de imagem é utilizado para avaliar o comportamento dos principais pré-neoplásicas células epiteliais mamárias derivados de modelos de ratos geneticamente modificados de risco de câncer de mama para determinar se há correlação entre os parâmetros específicos de comportamento e distintas lesões genéticas.

Resumo

Lapso de tempo de imagem pode ser utilizada para comparar o comportamento de culturas primárias células epiteliais mamarias pré-neoplásicas derivadas de diferentes modelos de ratos geneticamente modificados de cancro da mama. Por exemplo, o tempo entre as divisões celulares (tempo de vida das células), os números de células apoptóticas, a evolução de alterações morfológicas, e mecanismo de formação de colónias pode ser quantificada e comparada em células portadoras de lesões genéticas específicas. Primários mamárias culturas de células epiteliais são gerados a partir de glândulas mamarias sem tumor palpável. Glândulas são cuidadosamente ressecada com clara separação de músculo adjacente, os nódulos linfáticos são removidas, e as suspensões de célula única de células epiteliais mamárias enriquecidos são gerados pelo tecido mamário trituração seguida por dissociação enzimática e filtração. Unicelulares suspensões são banhados e colocado diretamente sob um microscópio dentro de uma câmara incubadora para live-célula de imagem. Dezasseis 650 x 700 uM campos uM numa configuração 4x4 de cada well de uma placa de 6 poços são gravadas a cada 15 min, durante 5 dias. Lapso de tempo imagens são examinados diretamente para medir comportamentos celulares que podem incluir mecanismo ea freqüência de formação de colônias de células dentro da 24 hora antes de plaqueamento as células (agregação contra a proliferação de células), a incidência de apoptose, e faseamento de alterações morfológicas. De uma única célula de rastreamento é utilizada para gerar mapas de células destino para a medição de tempos de vida de células individuais e investigação de padrões de divisão celular. Os dados quantitativos foram analisados estatisticamente para determinar as diferenças significativas no comportamento correlacionados com lesões genéticas.

Introdução

Modelos de ratos geneticamente modificados são ferramentas para estudar e entender como diferentes lesões genéticas contribuem para o risco de desenvolver câncer de mama. Por exemplo, ratos geneticamente modificados demonstraram que a combinação de três factores: a perda da mama de comprimento completo cancro 1, o início precoce (BRCA1) gene em células epiteliais mamarias, a proteína p53 do tumor (TP53) da linha germinal haploinsuficiência, e epitelial mamaria célula alvo-regulada alfa do receptor de estrogénio (ERa) resultados de expressão no desenvolvimento de cancro da mama em 100% de BRCA1 ^{floxed (f) 11/f11/Mouse vírus do tumor mamário ....}