Artigo de método

Rato de curto e longo prazo da atividade locomotora analisados ​​pelo software Rastreamento Vídeo

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DOI:

10.3791/50252

20 de junho de 2013

Neste artigo

Resumo

Atividade locomotora (LMA) é uma medida simples e de fácil execução de comportamento em camundongos. O acoplamento do software de rastreamento de vídeo (VTS) e LMA permite a melhoria da especificidade e sensibilidade, especialmente quando comparado com o manual, o método de análise cruzando a linha de LMA. Além disso VTS permite o acompanhamento a longo prazo de rato LMA.

Resumo

Atividade locomotora (LMA) é uma medida simples e de fácil execução de comportamento em ratos e outros roedores. Melhorias no software de monitoramento de vídeo (VTS) ter permitido que ele seja acoplado a LMA testes, melhorando drasticamente a sensibilidade e especificidade quando comparado com o método de cruzamentos de linha com a pontuação manual. Além disso, o VTS permite a experimentação de alto rendimento. Embora semelhante ao controle de vídeo automatizado usado para o teste de campo aberto (OFT), LMA teste é o único que permite a ratos para permanecer em sua gaiola e não utiliza o estímulo ansiogênico de iluminação brilhante durante a fase ativa do claro-escuro ciclo. Tradicionalmente, o LMA tem sido usada durante curtos períodos de tempo (minutos), enquanto os estudos de circulação mais longos (HRS-dia), muitas vezes têm utilizado transmissores e biotelemetria implantado. Com a opção de rastreamento em tempo real, de longo, como testes de LMA de curto prazo, podem agora ser realizados utilizando videografia. LMA testes a longo prazo requer um especialista, Mas facilmente construído, de modo que a gaiola de comida e água (o que é normalmente posicionado na parte superior da gaiola) não obstrua videografia. Importante, videografia e VTS permite a quantificação de parâmetros, como caminho de movimento de mouse, que são difíceis ou inviáveis ​​para medir com a linha de cruzamento e / ou biotelemetria. Em resumo, o teste LMA acoplado a VTS proporciona uma descrição mais completa do movimento do rato e a capacidade de examinar locomoção ao longo de um período de tempo prolongado.

Protocolo

1. Curto prazo LMA Set Up and Procedure

  1. Curto prazo LMA gaiola configurar
    1. Teste LMA curto prazo dentro da gaiola de um rato alojados individualmente. Para facilitar a análise de imagens VTS-dependente, usar roupa de cama em alto contraste com a cor do mouse (ou seja, roupa de cama de cor escura para ratos brancos e luz de cama colorida para ratos pretos).
    2. Durante os testes de LMA de curto prazo, cobrir gaiolas com ¼ claro em acrílico com 11 x ¼ em furos de diâmetro para suportar a ventilação adequada.
  2. Curto prazo sala de testes LMA
    1. Teste ratinhos num ambiente limpo, ....

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Resultados

Um exemplo dos resultados de uma série de medidas repetidas, teste de LMA de curto prazo é mostrado na Figura 1. Esta figura mostra que, após administração de lipopolissacarídeo (LPS), ratos alojados em enjaular ventilado individualmente (IVC) recuperar a atividade locomotora de curto prazo mais rápido do que os ratos alojados em ambiente ambiente prendendo (AEC) 6. Enquanto a perda inicial de actividade locomotora é semelhante entre os grupos injectados com LPS, a recuperação de basal LMA é .......

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Discussão

Os sintomas da doença em camundongos incluem letargia, perda de interesse em ambientes sociais e ambientais, mal-estar e anorexia 2-3. Em ratos e outros roedores, LMA pode ser utilizado para avaliar a doença após a activação imunitária 4-5. Além disso, LMA longo prazo oferece a capacidade de acompanhar o movimento ao longo de 24 horas (ou mais) período, permitindo a análise de alterações induzidas pelo tratamento no comportamento circadiano ou distúrbios nos padrões de sono / vigília. LMA oferece v.......

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Divulgações

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Agradecimentos

Apoio: Esta pesquisa foi apoiada pelo National Institutes of Health (DK064862, NS058525 e AA019357 a GGF).

....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Câmera de vídeoSonyHDR-XR500VOutras câmeras de vídeo semelhantes também podem funcionar. O formato de armazenamento de arquivos (codec/contêiner) deve ser compatível com o VTS usado. Recomenda-se, ao estabelecer inicialmente um VTS, escolher primeiro o VTS e trabalhar com o fornecedor na escolha de uma câmera apropriada, especialmente no que diz respeito ao formato de arquivo e compatibilidade de resolução de vídeo.
Divisórias de gaiola opacasFabricado sob medida com base em dimensões específicas da gaiola. Para facilitar a análise das imagens, os divisores devem ser de cor semelhante à cama da gaiola. Divisores estruturalmente fixos são preferíveis porque aceleram a configuração entre experimentos com vários ratos, como aqueles que envolvem medições repetidas. Divisórias de gaiola transportáveis resistentes podem ser construídas em plástico opaco de 1/2 polegada e unidas por meio de uma série de voltas cruzadas.
Roupa de cama clara ou escura (oposta à cor da pelagem do rato)Disponível em vários distribuidores de suprimentos para animais de laboratório, dependendo da localização.
Tampos de gaiola de Plexiglas transparentesFabricado sob medida com base nas dimensões da gaiola.
Software de rastreamento de vídeo automatizado (EthoVision XT 7)Noldus Information TechnologyExistem vários fabricantes de VTS, o uso de outro software pode ser suficiente.
PCDell Inc.Consulte os requisitos mínimos do PC dos fornecedores de software VTS
Gerador de ruído brancoDohmDSUma variedade de geradores de ruído branco estão disponíveis, dependendo da necessidade.
Luzes de braçadeira de chocadeira com lâmpadas vermelhasVários tamanhos e estilos disponíveis. O número necessário depende do tamanho da sala/necessidades de iluminação. Não exceda 125 lúmens na sala de testes.
Bancada de laboratório ou papelO papel deve combinar ou ser muito semelhante em cor à roupa de cama da gaiola.
pardo

Referências

  1. Goulding, E. H., Schenk, A. K., Juneja, P., MacKay, A. W., Wade, J. M., Tecott, L. H. A robust automated system elucidates mouse home cage behavioral structure. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20575-20582 (2008).
  2. Kent, S., Bluthé, R. M., Kelley, K. W., Dantzer, R.

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Etiquetas

Testes na Gaiola DomiciliarLMA de Curto PrazoLMA de Longo PrazoAn lise do Movimento do CamundongoDist ncia PercorridaMedi o de VelocidadeRastreamento em Tempo RealModifica o da Gaiola

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