Macrófagos derivados de monócitos são importantes células do sistema imune inato. Aqui, descrevemos um fácil de usar In vitro Modelo para gerar essas células. Utilizando centrifugação de gradiente, o isolamento do grânulo negativo e condições de cultura de células específicas, os macrófagos derivados de monócitos pode ser gerado para estudos fenotípicas e funcionais.
Macrófagos derivados de monócitos representam um importante tipo de células do sistema imune inato. Modelos de rato estudar a biologia dos macrófagos sofrem das diferenças fenotípicas e funcionais entre os monócitos-macrófagos murinos e humanos. Portanto, estamos aqui descrever um modelo in vitro para gerar e estudar macrófagos humanos primários. Resumidamente, após a centrifugação do gradiente de densidade de sangue periférico retirados de uma veia do antebraço, os monócitos são isolados a partir de células mononucleares de sangue periférico usando o isolamento esfera magnética negativa. Estes monócitos são então cultivadas durante seis dias sob condições específicas para diferentes tipos de induzir a diferenciação de macrófagos ou de polarização. O modelo é fácil de usar e evita os problemas causados por diferenças entre espécies específicas de rato e de homem. Além disso, é mais próxima do que em condições in vivo, a utilização de linhas de células imortalizadas. Em conclusão, o modelo aqui descrito é adequado para estudar macrophage biologia, identificar mecanismos da doença e novos alvos terapêuticos. Embora não substitui completamente as experiências com animais ou tecidos humanos, obtidos post-mortem, o modelo aqui descrito permite a identificação e a validação dos mecanismos da doença e alvos terapêuticos que podem ser altamente relevante para várias doenças humanas.
Macrófagos derivados de monócitos representam um importante componente celular do sistema imune inato e contribuem para muitos processos inflamatórios agudos ou crónicos 1. Os macrófagos desempenham um papel importante em muitas doenças inflamatórias, como a aterosclerose ou cancro 2. Macrófagos apresentam um elevado grau de plasticidade e são capazes de assumir diferentes fenótipos micromilieu dependendo do local 3. Assim, estudar a diferenciação de macrófagos e heterogeneidade é essencial para aumentar o nosso conhecimento da fisiopatologia de muitas doenças e para permitir a identificação de novos alvos terapêuticos e desenvolvimen....
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1. Protocolo
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Usando o protocolo acima descrito, que rotineiramente obter 25,1 x 10 6 ± 2,2 x 10 6 monocytes/100 ml de sangue (média ± erro padrão a partir de 26 experiências independentes, a Figura 1A). Pureza de monócitos, conforme determinado por coloração por citometria de fluxo para CD14 é habitualmente superior a 95% (97,1 ± 0,4%, média ± erro padrão de 3 experiências independentes, Figura 1B). A viabilidade das células de monócitos isolados de fresco, como determinado por.......
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Macrófagos derivados de monócitos representam o tipo do sistema imune inato de células chave. Eles desempenham um papel importante em muitas doenças inflamatórias, incluindo aterosclerose ou cancro 2. Assim, estudando a biologia dos macrófagos é essencial para aumentar o nosso conhecimento sobre a fisiopatologia de muitas doenças e para permitir o desenvolvimento de novas terapias.
Muitos estudos aplicar modelos de rato com superexpressão ou falta certos genes de interesse. No cas.......
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Os autores não têm de divulgar qualquer conflito de interesses.
Agradecemos Nadine Wambsganss para uma excelente assistência técnica. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa da Deutsche Forschungsgemeinschaft (GL599/1-1) e em parte por uma doação do Fundo de Inovação FRONTIER (Universidade de Heidelberg) para CAG
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tubo de centrífuga de 50 ml (estéril) | Fisher | 055398 | |
| D-PBS (1X), líquido (sem cálcio ou magnésio) | Invitrogen | 14190-250 | |
| EDTA | Sigma | T9285 | |
| BSA | Sigma | A-8806 | |
| FCS | Invitrogen | ||
| EasySep Kit de enriquecimento de monócitos humanos | StemCell Technologies | 19059 | |
| EasySep Magnet | StemCell Technologies | 18000 | |
| tubos FACS | Fisher | 352008 | |
| Macrophage-SFM (1X) | Invitrogen | 12065-074 | |
| Penicilina-estreptomicina | Sigma | P-4458 | |
| Nutridoma-SP | Roche | 11011375001 | |
| humano M-CSF 10 μ g | Peprotech | 300-25 | |
| Placas de Cultura de Células 6-well | Fisher | 07-200-80 |
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