Determinação de ácidos graxos tolerável e Concentrações toxina da cólera Usando Humanos células epiteliais intestinais e BALB / c mouse macrófagos

Resumo

Partimos para determinar as concentrações toleráveis ​​de três ácidos graxos (ácidos oléico, linoléico e linolênico) e toxina da cólera que não significativamente e adversamente afetar a sobrevivência da célula por solubilização dos ácidos graxos e da toxina e usá-los em ensaios de sobrevivência celular.

Resumo

O papel positivo dos ácidos graxos na prevenção e combate de doenças não-humanos e humanos têm sido e continuam a ser amplamente documentado. Essas funções incluem influências sobre doenças infecciosas e não infecciosas, incluindo a prevenção da inflamação, bem como a imunidade da mucosa para doenças infecciosas. A cólera é uma doença intestinal aguda causada pela bactéria Vibrio cholerae. Ela ocorre em países em desenvolvimento e se não tratada, pode resultar em morte. Embora existam vacinas para a cólera, eles nem sempre são eficazes e são necessários outros métodos preventivos. Partimos para determinar as concentrações toleráveis ​​de três ácidos graxos (ácidos oléico, linoléico e linolênico) e toxina da cólera usando o mouse BALB / C macrófagos e células epiteliais intestinais humanas, respectivamente. Nós solubilizado os ácidos gordos superiores e os ensaios de proliferação de células utilizadas para determinar as gamas de concentração e concentrações específicas dos ácidos gordos que não estãot prejudiciais para a viabilidade da célula epitelial intestinal humana. Nós solubilizado a toxina da cólera e utilizado num ensaio para determinar as gamas de concentração e concentrações específicas de que a toxina da cólera não é estatisticamente diminuir a viabilidade celular em ratinhos BALB / C macrófagos.

Encontrámos as concentrações óptimas de ácidos gordos para estar entre 1-5 ng / mL, e que, para a toxina da cólera de ser <30 ng por tratamento. Estes dados podem ajudar estudos futuros que visem encontrar um papel mucosa protetora para os ácidos graxos na prevenção ou alívio de infecções de cólera.

Introdução

Os benefícios de saúde de ácidos graxos, como o oléico, linoléico e linolênico têm sido e continuam a ser documentado. Por exemplo, o ácido oleico ajuda a facilitar a penetração dos fármacos lipofílicos no ^1,2 corpo, a doença cardíaca coronária reduz em 24% quando substituídos por ácidos gordos saturados ^3, e é utilizada para o tratamento de doenças metabólicas como a adrenoleucodistrofia ⁴ que é um X-ligados distúrbio genético do metabolismo dos ácidos gordos. . Enquanto um precursor necessário para o ácido araquidónico em mamíferos, o ácido linoleico (ao contrário do ácido oleico) não é sintetizada pelo corpo e devem ser obtidos atr....

Protocolo

1. Cultura de Tecidos

1. Use Mus musculus macrófagos (BALB / c) para as determinações da toxina da cólera. Inicialmente cultura todos M. células musculus seguindo as instruções do fornecedor.
2. Propaga BALB / c células ratos em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco com L-glutamina completado com 10% de soro fetal bovino, e antibióticos / antimicóticos ou meio RPMI 1640 de base de 1% completado com 10% de soro fetal bovino, 5% de L-glutamina, e 1 % de reagente de antibiótico / antimicótico.
3. Cultivar células em 75 cm ² frascos corning com tampas com respiradouros, a 37 ° C, 95% de ar e 5% de CO _2.

Resultados

Determinação da concentração ótima de Ácidos Graxos

A concentração óptima de ácidos gordos é definida como a concentração máxima em que o crescimento celular é comparável ou superior à das células de controlo, com relativamente baixa variabilidade nos resultados. Para determinar a concentração óptima de oleico, células de ácidos linoleico e linolénico, foram inicialmente tratadas com várias concentrações de cada ácido gordo em grandes incrementos e depois com pequenos incrementos. Figur.......

Discussão

Sugestão de concentração de ácidos graxos e toxina da cólera

Embora o mecanismo exato de como ácidos graxos aumentar a imunidade da mucosa é desconhecida, vários estudos têm tentado investigar os seus efeitos benéficos. Este estudo tem como objectivo proporcionar o método para determinar a concentração máxima de ácidos gordos que as células podem tolerar bem como a concentração máxima de toxina da cólera que as células podem tolerar sem uma influência significativa sobre a sobrevivência da célu.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cells/Reagent
Mus musculus macrófagos	ATCC	ATCC RAW 264.7
Dulbecco's Modified Eagle's Medium	ATCC	30-2002
L-glutamina	ATCC	30-2115
Soro fetal bovino	Bio-west	S0250
Antibiótico/ antimicótico	Hyclone	SV3007901
Células epiteliais intestinais humanas	ATCC	ATTC CCL-241
HybriCare media	ATCC	46-X
Ácido oleico	Sigma-Aldrich	O1008
Ácido linoleico	Sigma-Aldrich	L-1376
Ácido linolênico	Sigma-Aldrich	L-2376
Toxina da cólera	Sigma-Aldrich	C8052
Equipment
BD Falcon Placas de cultura de células de 96 poços	BD Biosciences	351172
Spectrophotometer com software Dynex Revelations 4.22	Dynex	91000101