Descreve-se o fabrico de peletes de hormonas comprimidos, bem como a implantação cirúrgica subcutânea em ratos. Esta estratégia pode ser combinado com o crescimento de células e de tecidos de xenoenxertos sob a cápsula renal de ratinhos nus atímicos para avaliar a carcinogénese hormonal e regulação do crescimento benigno da próstata.
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Artigo de método
Renal Capsule xeno e subcutânea Pellet Implantação de Avaliação de próstata Carcinogênese e hiperplasia benigna da próstata
Neste artigo
Resumo
Resumo
Novas terapias para duas doenças comuns da próstata, o cancro da próstata (AEP) e hiperplasia benigna da próstata (HBP), dependem criticamente experimentos avaliando sua regulação hormonal. Os hormônios sexuais esteróides (nomeadamente andrógenos e estrógenos) são importantes na AEP e BPH, nós sondar os seus respectivos papéis na indução do crescimento da próstata e carcinogênese em ratos com experimentos usando pelotas hormonais compactados. Hormonais e / ou drogas pellets são facilmente fabricado com uma imprensa da pelota, e cirurgicamente implantadas no tecido subcutâneo do hospedeiro macho mouse. Descrevemos também um protocolo para a avaliação da carcinogênese hormonal combinando subcutânea implantação hormônio pellet com xeno de recombinantes células da próstata sob a cápsula renal de ratos imunocomprometidos. Além disso, o hormônio subcutâneo pellet implantação, em combinação com xeno cápsula renal de tecido de BPH, é útil para compreender melhor regulação hormonal de prost benignocomeu o crescimento, e para testar novas terapias dirigidas sexo esteróide vias hormonais.
Introdução
O câncer de próstata (AEP) e hiperplasia prostática benigna (BPH) são encargos significativos para a saúde. AEP é o segundo câncer de órgão sólido mais prevalente em homens e uma das principais causas de câncer relacionados com a morte 1. HBP também é altamente prevalente entre os homens mais velhos, e estima-se que a manifestação clínica da HBP, os sintomas do trato urinário inferior (LUTS), vai afetar 50-90% dos homens 2. Enquanto andrógenos e estrógenos são conhecidos por serem importantes na AEP e BPH, a nossa compreensão dos mecanismos hormonais que sustentam a carcinogênese e crescimento permanece incompleta 3,4. Modelos animais....
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Protocolo
1. Preparação do comprimido hormonal / Drogas Pellet
- Este procedimento deve ser feito em uma capa de segurança química, enquanto vestindo um casaco de laboratório, luvas, máscara, óculos de segurança, e capô. Para evitar a contaminação cruzada, é essencial que o equipamento de fabricação sedimento é cuidadosamente limpa com etanol a 70% antes e depois do fabrico de cada tipo de sedimento.
- Usando uma balança analítica e pesar papel, medir a quantidade desejada de pó de hormônio / drogas. Cerca de 5% de material adicional é recomendado para acomodar a perda durante a prensagem.
- Algumas hormonas e / ou drogas requer um agente de ligação ou....
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Resultados
Dependendo da hipótese de ser testado, xeno cápsula renal de tecido ou de células recombinantes pode ser realizada isoladamente ou em combinação com a implantação subcutânea hormona sedimento. Um diagrama esquemático de um experimento hipotético combinando renal experimento cápsula xeno com hormona subcutânea sedimento implante está ilustrada na Figura 1. Uma variedade de substâncias em pó e / ou cristalinos pode ser usado no fabrico de granulados compactados com o pellet press. Figura 2
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Discussão
Este papel e o protocolo delineado aqui descrever o fabrico de hormona comprimido e / ou peletes de droga, e o procedimento cirúrgico para a implantação da pelete de camundongos. Dependendo da questão de pesquisa para ser dirigida, esta técnica pode ser realizada isoladamente ou em combinação com xeno cápsula renal de células de próstata enxertos recombinantes ou xenoenxertos de tecidos da próstata, os quais são amplamente usados em técnicas de pesquisa de próstata 17-19. Tomadas em conjunto, essas técnicas.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer a todos os membros do laboratório Ricke, passado e presente. Agradecemos Calvin Patten, Jr., DVM e Brigitte Raabe, DVM, pelos comentários úteis sobre o protocolo. Gostaríamos de agradecer o NIDDK, NCI e NIEHS pelo apoio financeiro para estes estudos: R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764. TMN é um estagiário no Programa de Formação do Cientista Médico da Universidade de Rochester financiado pelo NIH T32 GM07356, o NIH sob Ruth L. Kirschstein Nacional Research Service Award F30DK093173 também apóia este projeto. CDV é suportado por T32CA157322 e ABT é suportado por T32ES007015 na Universidade de Wisconsin-Madison. O conteúdo é de resp....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Prensa de pellets | PARR Industries | 2815 | 3mm Punch & Conjunto de matrizes |
| Balança Analítica | Ohaus | 1918302 | Voyager ou outro |
| bico de Bunsen | Fisher Scientific | 03-962Q | |
| Microscópio de dissecação | Leica | L2 | |
| Deltaphase Pad Kit (cera reaquecível) | Braintree Scientific | 39DP | Alternativa a uma almofada de aquecimento elétrica |
| Esterilizador de esferas quentes | F.S.T.18000-45 | ||
| Vaporizador de isoflurano | Supera Anestesia Innov | VAP3000 | |
| Câmara de Indução | Supera Anestesia Innov | RES644 | |
| F / AIR Canister | Supera Anestesia Innov | 80120 | |
| Manifold de 4 portas | Supera Anestesia Innov | RES536 | |
| Circuitos de Rerespiração | Supera Anestesia Innov | CIR529 | |
| Conexões de entrada / saída | Supera Anestesia Innov | VAP203 / 4 | |
| Pressão Reg / Gauge | Supera Anestesia Innov | OXY508 | |
| Medidor de vazão de oxigênio | Supera Anestesia Innov | OXY660 | |
| 21mm Tubo transparente Supera | Anestesia Innov | 301-150 | |
| Cone de nariz de camundongos pequenos | Supera Anestesia Innov | ACC526 | |
| Bata cirúrgica estéril | Midwest Vet Supply | 350.79866.2 | |
| Máscara cirúrgica | Midwest Vet Supply | 350.50111.2 | 2 camadas com ganchos |
| de orelha Gaze estéril | Midwest Vet Supply | 001.14100.2 | 2 x 2 polegadas |
| Luvas estéreis | Kimberly Clark | 55092 | |
| Bouffant | Midwest Vet Supply | 001.27100.2 | |
| Aplicador de Ponta de Algodão | Midwest Vet Supply | 001.06220.2 | |
| Lavagem Cirúrgica | Midwest Vet Supply | 733.80010.3 | |
| Campos Estéreis (Fenestrados) | General Econopak, Inc | 88VCSTF | |
| REAGENTS | |||
| Colesterol | Sigma-Aldrich | C-3292 | |
| Testosterona Proprionate | Sigma-Aldrich | T-1875 | |
| 17β-estradiol | Sigma-Aldrich | E-2758 | |
| Isoflurane | Midwest Vet Supply | 193.33161.3 | |
| Carprofeno | Midwest Vet Supply | 193.70200.3 | Injetável (Rimadyl) |
| Betadine | Webster Veterinary | 07-836-3379 | |
| Solução salina estéril | Midwest Vet Fornecimento | 193.74504.3 | NaCl 0.9%, Injetável |
| INSTRUMENTOS CIRÚRGICOS | |||
| Tesoura Afiada/Cega Reta | Científicas Finas (FST) | 14054-13 | |
| Pinça Graefe (Serrilhada, Dentada, Curva) | F.S.T. | 11055-10 | |
| Tesoura de íris fina | F.S.T. | 14090-09 | |
| Graefe Bisturi | F.S.T. | 10071-12 | |
| Dumont #5 fórceps | F.S.T. | 11251-20 | |
| Pipetas de vidro Pasteur | Fisher Scientific | S67050 | 5" comprimento |
| Graefe fórceps (serrilhado, curvo) | F.S.T. | 11052-10 | |
| Pinça Graefe (Serrilhada, Reta) | F.S.T. | 11050-10 | |
| Vicryl Suture | Midwest Vet Supply | 295-92100.2 | 4-0, FS-2, Suporte de Agulha Absorvível |
| com ação de tesoura | F.S.T. | ||
| Clipes de Ferida | Braintree Scientific | ACS CS | Pode usar clipes de 7mm ou 9mm |
| Clipper de Ferida Reflexo | F.S.T. | 12031-09 | Corresponde com tamanho do clipe enrolado |
| Removedor de Clipe | F.S.T. | 12033-00 | de |
| Esterilização | FST | 20810-01 | Qualquer recipiente autoclavável servirá |
| Seringa com agulha | BD | 148292C | 1cc, 25Gx1 |
| Aplicador de Brincos | National Band Tag Co. | 1005s1 | Alternativa para entalhar orelhas |
| pequenos animais Ear Tags | National Band Tag Co. | 1005-1 |
Referências
- Cancer Facts Figures. 4, American Cancer Society. (2010).
- McVary, K. T. BPH: epidemiology and comorbidities. Am. J. Manag. Care. 12, S122-S128 (2006).
- Nicholson, T. M., Ricke, W. A.
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Reimpressões e permissões
