Anticâncer metal Complexos: Síntese e Avaliação de citotoxicidade pelo ensaio MTT

Resumo

Um método para a síntese de titânio e vanádio anticancerígenos agentes sensíveis ao ar é descrito, juntamente com a avaliação da sua actividade citotóxica no sentido de linha de células de cancro humano por o Ensaio MTT.

Resumo

De titânio (IV) e vanádio (V) são complexos de agentes anticancerígenos altamente potentes. Um desafio na sua síntese refere-se à sua instabilidade hidrolítica, pelo que a sua preparação deve ser conduzida sob uma atmosfera inerte. Avaliação da actividade anti-cancerígena destes complexos pode ser alcançado através do ensaio MTT.

O ensaio com MTT é um ensaio colorimétrico baseado na viabilidade de redução enzimática da molécula de MTT para formazan, quando ele é exposto a células viáveis. O resultado da redução é uma mudança de cor da molécula de MTT. As medições de absorvância em relação a um controlo de determinar a percentagem de células cancerosas remanescentes viáveis ​​após o seu tratamento com diversas concentrações de um composto de ensaio, que é traduzido para a actividade anti-cancerígena composto e os seus valores de IC _50. O MTT é amplamente comum em estudos de citotoxicidade devido à sua precisão, rapidez e simplicidade relativa.

Aqui nós preenviado um protocolo detalhado para a síntese de medicamentos à base de ar de metal sensível e de medições de viabilidade de células, incluindo a preparação de placas celulares, a incubação dos compostos com as células, medições de viabilidade usando o ensaio de MTT, e determinação dos valores de IC _50.

Introdução

A quimioterapia ainda é um dos principais cursos de tratamentos utilizados na clínica para várias doenças cancerosas, e, assim, grande quantidade de pesquisa é conduzida em todo o mundo com o objetivo de desenvolver novas e melhores drogas anticâncer. Tais estudos principalmente começar no nível químico, com a concepção e preparação de compostos, seguido de avaliação biológica das propriedades citotóxicas in vitro. A viabilidade celular pode ser avaliada por vários ensaios que fornecem informações sobre a actividade celular ^1-2.

A cisplatina é um exemplo de um complexo de platina que é largamente utilizado como um fárm....

Protocolo

1. Preparação do V (V) complexo (Figura 2); ¹⁸ conduta passos 1,1-1,4 em um porta-luvas, se um porta-luvas não está disponível, pule para a alternativa passos 2 (2,1-2,6).
   1. Dissolve-se 0,42 mmol de os ligandos H ₂ L de THF seco e adiciona a uma solução em agitação de quantidades equivalentes de VO (OiPr) ₃ em THF.
   2. Agita-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 15 min e remover os voláteis sob vácuo.
   3. Adicionar hexano frio e removê-lo sob vácuo. Um pó de cor púrpura escura deve ser obtido com um rendimento quantitativo.
   4. Pesar 8 mg do composto obtido em um frasco de Eppendorf. Ir....

Resultados

Os complexos foram elaboradas com base em procedimentos estabelecidos ^18,28 e sua pureza pode ser avaliada por análise de RMN e elementar.

Os dados recebidos a partir do ensaio de MTT é analisada para avaliar a citotoxicidade do composto ^18,21. Em primeiro lugar, a subtracção do valor de absorvência de controlo em branco a partir de todos os outros valores é realizada. Em segundo lugar, o valor de controlo de solvente THF é definida como 100% de viabilidade, como não fo.......

Discussão

O método descrito neste manuscrito combina a síntese química, com ensaio de viabilidade de células biológicas. Tal como acontece com todos os métodos biológicos em matéria de células viáveis, é fundamental para o trabalho em uma capa laminar, e manter condições estéreis, incluindo o uso de solventes orgânicos estéreis. Além disso, a preparação e armazenamento de medicamentos à base de metal hidroliticamente instável deve ser realizado sob condições inertes, para o qual devem ser utilizadas técnicas de caixa de luvas ou .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Reagent/Material
Soro bovino fetal (FBS)	Biological Industries	04-007-1A
Hexano AR	Gadot	830122313	Seco usando um sistema de secagem por solvente
Linha celular HT-29	ATCC	HTB-38
Isopropanol AR	Gadot	830111370
L-glutamina	Biological Industries	03-020-1B
MTT	Sigma-Aldrich	M5655-1G
Antibióticos penicilina/estreptomicina	Biological Industries	03-031-1B
RPMI-1640 com vermelho de fenol com L-glutamina	Sigma-Aldrich	R8758
RPMI sem vermelho de fenol	Biological Industries	01-103-1A
Tetrahidrofurano (THF) AR	Gadot	830156391	seco usando um sistema de secagem por solvente
Ti(OiPr)4	Sigma-Aldrich	205273-500ML	sensível à umidade
Trypsin/EDTA	Biological Industries	03-052-1B
VO(OiPr)3	Sigma-Aldrich	404926-10G	umidade sensitive
Equipment
pipeta de 12 canais 30-300 μ l	Pipeta de
5-50 μ l	Finnpipeta
75 cm2 frasco	NUNC	156472
placa de 96 poços com tampa (fundo plano)	NUNC	167008
CO2 Pasta da incubadora		APT.line C150
Câmara contrária	Marienfeld-Superior	650030
Frasco Eppendorf	KARTELL
Caixa de luvas	M. Braun
Capô de fluxo laminar	ADS LAMINAIRE	OPTIMALE 12
Leitor de microplacas espectrofotômetro	Microscópio Bio-Tek	El-800
		Eclipse TS100
Pipeta 20-200 μ l	Pipeta Finnpipette
5-50 μ l	Finnpipette

12 canais Thermo Scientific Nikon