Ao longo dos últimos anos, novas endoscópios geração surgiram como importantes auxiliares de pesquisa de diagnóstico para a avaliação de colite murina e tumores colorectais. Apresentamos aqui um protocolo detalhado para a avaliação endoscópica de inflamação e tumores colo-rectal em ratos, bem como um novo sistema de pontuação que utiliza identificadores decimais para documentar a gravidade endoscópico de colite e tumores colorectais.
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Artigo de método
A colonoscopia flexível em camundongos para avaliar a gravidade da colite e colorretal Tumores Usando um sistema validado endoscópica Scoring
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O uso da endoscopia moderna para fins de pesquisa facilitou enormemente a nossa compreensão de patologias gastrointestinais. Em particular, a endoscopia experimental tem sido muito útil para estudos que requerem avaliações repetidas em um único animal de laboratório, tais como os mecanismos de avaliação de doença inflamatória intestinal crônica ea progressão do câncer colorretal. No entanto, os métodos utilizados em todos os estudos são altamente variáveis. Pelo menos três sistemas de pontuação endoscópicos foram publicadas para a colite murina e publicado protocolos para a avaliação dos tumores colorretais não conseguem resolver a presença de inflamação do cólon concomitante. Este estudo desenvolve e valida um sistema de pontuação endoscópica reprodutível que integra a avaliação de inflamação e tumores simultaneamente. Este novo sistema de pontuação tem três componentes principais: 1) avaliação da extensão e da gravidade da inflamação colorectal (baseado em achados perianal, a transparência do wall, sangramento das mucosas e lesões focais), 2) a gravação quantitativa de lesões tumorais (mapa de grade e gráfico de barras), e 3) a classificação numérica de casos clínicos por sua relevância patológica e de investigação com base em unidades decimais com categorias atribuídas de lesões observadas e complicações endoscópicas (identificadores decimais). Foram preparadas O vídeo eo manuscrito aqui apresentada, seguindo protocolos IACUC-aprovados, para permitir que os investigadores para marcar os seus próprios camundongos experimentais usando uma metodologia endoscópica bem validada e altamente reprodutível, com a opção de sistema para diferenciar distal de colite endoscópica proximal (D-PECS ).
Introdução
Endoscopia de murino foi realizada como uma ferramenta de pesquisa útil para mais de uma década 1-3. Até o momento, a maioria dos estudos que empregam endoscopia murino têm utilizado endoscópios rígidos, embora alguns também têm usado a sigmoidoscopia flexível. Endoscopia Murino proporciona resultados imediatos e uma estimativa mais objetiva da extensão da normalidade intestinal, a gravidade da inflamação e progressão do tumor em comparação com medidas indiretas, tais como perda de peso, diarréia e histologia (que é abaixo do ideal quando as lesões são irregulares), enquanto oferecendo insights sobre a saúde geral do cólon. Mais notavelmente, a endoscopia ....
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Protocolo
1. Configuração do Sistema de Endoscopia
- Configure o sistema de endoscopia antes de anestesiar os ratos, seguindo as instruções do fabricante. Use um ureteroscope vídeo projetado para os seres humanos para este protocolo (Figura 1). O diâmetro externo do tubo de inserção é de 9,9 Fr (3,3 mm), a sua extremidade distal é de 8,5 Fr (2,8 mm), e o diâmetro interno do canal de instrumentação é 6 Fr (1,2 mm).
- Embora o uso de endoscópios não têm sido associados a transmissão da doença [9], esterilizar a lente do endoscópio e com etanol a 70% ou 10 com técnicas adequadas quando se trabalha com microorganismos que formam esporos....
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Resultados
O protocolo e as imagens apresentadas neste estudo foram preparadas com um endoscópio flexível Olympus URF-V 14 e NBI 11,15. As imagens de vídeo foram salvas em formato e de imagens em JPG, TIF, PNG ou formato DICOM com o máximo de 1280 x 1024 pixels, transferíveis para memórias Flash portátil USB padrão MPEG-2. NBI aumenta o contraste visual dos tecidos que contêm hemoglobina. A luz normal e NBI imagens são características fundamentais para ilustrar a anatomia normal da mucosa retal e as diferença.......
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Discussão
Há várias considerações sobre modificação e solução de problemas da técnica endoscópica em camundongos. Aspectos críticos do procedimento que precisa ser dominado durante o uso da endoscopia flexível incluem o ajuste do volume de ar necessário para evitar a distensão abdominal e comprometimento respiratório do rato, e os aspectos técnicos menores de controle de exibição com a coordenação dos controles de angulação e torque . Controle de torque é importante para minimizar o risco de perfuração intestinal. Quando tratada .......
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Divulgações
Sem financeiro ou conflito de interesses divulgados.
Agradecimentos
Um agradecimento especial a Sarah Kossak, Mitchell Guanzon, Sung Yeun Yang e Li Guo Jia, pela colaboração durante a avaliação endoscópica de seus animais experimentais.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Isoflurano, USP | Webster Veterinary | ||
| Surgical lubricant | Savage laboratories | surgilube, 0281-0205-45 | |
| Phosphate Buffered Saline | Thermo Scientific | SH30256 | |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Methylene Blue 1% Solução Aquosa | Fisher Science Education | S96393 | |
| Ureteroscópio digital flexível | Olympus America | URF-V | |
| Centro de sistema de vídeo | Olympus America | VISERA Pro OTV-S7 Pro | |
| Fonte de luz de xenônio | Olympus America | VISERA Pro CLV-S40 Pro | |
| Gravador de vídeo | MediCapture, Inc. | MediCap USB200 | |
| Pinça de copo de biópsia flexível | Olympus America | FBC-3115 | |
| Máquina de anestesia | Euthanex Corporation | EZ-7000 Classic System |
Referências
- Huang, E. H., et al. Colonoscopy in mice. Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).
- Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing....
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Reimpressões e permissões
