Descrevemos procedimentos para quantificar e caracterizar lesões ateroscleróticas em modelos de camundongos usando secção de precisão do seio aórtico e da aorta ascendente combinada com análise histoquímica e imuno-histoquímica.
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Artigo de método
Análise quantitativa e caracterização das lesões ateroscleróticas no seio aórtico murino
Neste artigo
Resumo
Resumo
A aterosclerose é uma doença das grandes artérias e uma das principais causas subjacentes de infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral. Vários modelos diferentes de camundongos foram desenvolvidos para facilitar o estudo da fisiopatologia molecular e celular desta doença. Neste manuscrito descrevemos técnicas específicas para a quantificação e caracterização de lesões ateroscleróticas no seio aórtico murino e na aorta ascendente. A vantagem desse procedimento é que ele fornece uma medida precisa da área de secção transversa e do volume total da lesão, que pode ser usada para comparar a progressão aterosclerótica em diferentes grupos de tratamento. Isso é possível através do uso dos folhetos valvares como marco anatômico, juntamente com o ajuste cuidadoso do ângulo de secção. Também descrevemos métodos básicos de coloração que podem ser usados para começar a caracterizar a progressão aterosclerótica. Estes podem ser modificados para investigar antígenos de interesse específico para o pesquisador. As técnicas descritas são geralmente aplicáveis a uma ampla variedade de modelos dietéticos e geneticamente induzidos existentes e recém-criados
Introdução
Nas últimas duas décadas, o desenvolvimento e o uso de modelos de camundongos propensos à aterosclerose por meio de manipulação dietética e/ou genética aumentaram significativamente nossa compreensão dos mecanismos moleculares e celulares envolvidos no desenvolvimento da lesão aterosclerótica1-3. Grande parte do nosso conhecimento e compreensão da aterogênese vem de estudos realizados em camundongos deficientes em apolipoproteína (Apo)-E4 camundongos, nos quais lesões ateroscleróticas se desenvolvem espontaneamente e deficientes em receptor de lipoprote....
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Protocolo
O Conselho de Ética em Pesquisa Animal da Universidade McMaster pré-aprovou todos os procedimentos aqui descritos.
1. Colhendo Coração e Aorta
- Anestesiar o rato e abrir cuidadosamente a cavidade torácica para revelar o coração e a aorta proximal.
- Extraia o sangue do camundongo por pontuação direta do ventrículo direito do coração.
Nota: O sangue pode ser armazenado e usado para a análise de lipídios plasmáticos e outros fatores transmitidos pelo sangue.
- Extraia o sangue do camundongo por pontuação direta do ventrículo direito do coração.
- Eutanasiar o camundongo por luxação cervical.
- Enxágue a vasculatura com 5 ml de soro fisiológico.
Nota: Isso é realiz....
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Resultados
Ratos LDLR-/- com cinco semanas de idade foram alimentados com uma dieta padrão ou com uma dieta rica em gordura durante dez semanas. Os animais foram sacrificados e perfundidos com formalina, conforme descrito anteriormente. Foram preparadas seções transversais do seio aórtico e coradas com hematoxilina e eosina para determinar a área e o volume da lesão (Figura 4). Quando os camundongos são alimentados com uma dieta padrão, o desenvolvimento aterosclerótico é muito limitado e pode não ser detectável ao.......
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Discussão
A aterosclerose é uma doença crônica complexa das grandes artérias musculares que é uma das principais causas subjacentes de infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral. A progressão da doença envolve a interação de muitos tipos diferentes de células dentro da parede da artéria, com células sanguíneas circulantes, partículas de lipoproteínas e outros fatores transmitidos pelo sangue que estamos apenas começando a entender. Muito do nosso conhecimento atual sobre o desenvolvimento e progressão da aterosclerose veio .......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi financiada por uma bolsa operacional dos Institutos Canadenses de Ciências da Saúde e da Associação Canadense de Diabetes. A DEV é apoiada por uma bolsa de estudos da Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica (CONICYT, Chile).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Camundongos com deficiência de LDLR ( D2.129S7(B6)-Ldlrtm1Her/J) | The Jackson | Laboratory stock #002207 | |
| Formalina | Sigma-Aldrich | HT5011 | |
| Moldes de Histologia | Ted Pella Inc | 27195 | |
| Parafina | Paramat | 19286-10 | |
| Lâminas revestidas | Fisher | 12-550-15 | |
| Recipientes de solvente | Tissue Tek II | 4457 | |
| Micrótomo | Leica | RM22S5 | |
| Banho-maria | VWR | 80086-982 | |
| Microscópio | Olympus | BX41TF | |
| Câmera | Olympus | DP72 | |
| ImageJ | NIH | www.rsbweb.nih.gov/ij/ | |
| Processador | Sakura Finetek | VIP6-A1 | |
| de processamento | VWR | 18000-134 | |
| Preassure Cooker | Nordic Ware | ||
| Coverslip | Fisher | 12-545-M | |
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | |
| Lâmina de micrótomo | Thermo Scientific | 30-518-35 | |
| Meio de montagem antidesbotamento | Sigma-Aldrich | F-4680 | |
| Montagem de xileno médio | Sigma-Aldrich | 44581 | |
| Meio de montagem aquoso | Sigma-Aldrich | I1161 | |
| Mac-3 anbody | BD Pharmingen | 553322 | |
| DAPI | Sigma-Aldrich | D9542 | |
| F4 / 80 anticorpo | Abcam | Ab6640 | |
| Alpha actina | Santa Cruz Biotechnology | SC-32251 | |
| Mayer’ s Hematoxilina | Sigma-Aldrich | E4382 | |
| Eosina Y | Sigma-Aldrich | MHS16 | |
| DAB (3,3'-Diaminobenzidina) | Dako | K3468 |
Referências
- Zadelaar, S., Kleemann, R., et al. Mouse models for atherosclerosis and pharmaceutical modifiers. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27 (8), 1706-1721 (2007).
- Daugherty, A., Rateri, D. L. Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.
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Reimpressões e permissões
