Os macrófagos têm sido reconhecidos como um componente crítico das respostas imune inata e adaptativa. A recente explosão de conhecimentos relativos aos aspectos evolutivos, genéticos e bioquímicos da interação entre macrófagos e micróbios renovou atenção científica para macrófagos. Este artigo descreve um método para diferenciar macrófagos de medula óssea de ratinho.
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Artigo de método
Medula Óssea derivadas de macrófagos Produção
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os macrófagos são componentes críticos das respostas imune inata e adaptativa, e eles são a primeira linha de defesa contra invasores estrangeiros por causa de suas poderosas atividades microbicidas. Os macrófagos são amplamente distribuído por todo o corpo e estão presentes nos órgãos linfóides, fígado, pulmões, tracto gastrointestinal, sistema nervoso central, ossos e pele. Por causa da sua repartição, que participam numa vasta gama de processos fisiológicos e patológicos. Os macrófagos são células altamente versáteis que são capazes de reconhecer alterações do microambiente e para manter a homeostase do tecido. Numerosos agentes patogénicos desenvolveram mecanismos para usar macrófagos como cavalos de Tróia para sobreviver, replicam em, e infectam os seres humanos e animais e para propagar ao longo do corpo. A recente explosão de interesse em aspectos evolutivos, genéticos e bioquímicos de interação patógeno-hospedeiro renovou atenção científica sobre macrófagos. Aqui, descrevemos umProcesso para isolar e cultivar macrófagos de medula óssea de murino que irá proporcionar um grande número de macrófagos para estudar interacções hospedeiro de organismos patogénicos, assim como outros processos.
Introdução
Um aspecto importante da função dos macrófagos é o seu papel na imunidade inata e adaptativa. Devido à sua capacidade de fagocitar partículas inertes, bactérias ou parasitas, os macrófagos são a primeira linha de defesa contra os invasores externos. Uma vez internalizado, micróbios são degradados dentro de fagolisossomas. Os macrófagos também enviam sinais de recrutamento para e antígenos presentes a outras células do sistema imunológico, como os linfócitos T. Os macrófagos são derivados dos monócitos. Os monócitos surgem na medula óssea a partir de células-tronco mielóides e migrar para o sangue periférico e vários tecidos, onde eles diferenciam-se em macrófagos. Es....
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Protocolo
Declaração de Ética
O protocolo para manejo dos animais foi aprovado pelo Comitê de Ética institucional nosso Animal "Conseil Scientifique du Centre de Formation et de Recherche Experimental Médico-Cirúrgica" (CFREMC, licença Projeto 10-300122013 para Eric Ghigo) da Universidade de Aix-Marseille de acordo com as regras Décret de N ° 87-848 de 1987/10/19. Os experimentos foram realizados na Faculté de Médecine de la Timone (número de autorização Experimentação 13,385 para Eric Ghigo).
1. Material e Meios de Cultura Preparação
- Esterilizar duas pinças, duas tesouras, duas lâminas cirúrgicas, um almofariz ....
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Resultados
O objectivo deste método é obter facilmente um grande número de macrófagos em poucos dias. A preparação de células da medula óssea é ilustrada na Figura 1. Ossos da perna foram coletadas e esmagado num almofariz. Uma vez que os macrófagos residentes foram removidos a partir da preparação de células de medula óssea, células da medula óssea foram incubadas com GM-CSF (Dia 0). Após 3 dias, as células, que foram rodada e não aderentes antes da cultura, começam a diferenciar-se em macrófagos e aderir
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Discussão
O protocolo aqui descrito detalha um método para produzir grandes números de BMDMs. BMDM são células primárias e têm a função biológica e as propriedades dos macrófagos diferenciados a partir de monócitos, porque há madura, em contraste com as linhas celulares de macrófagos, que são imaturos. BMDMs podem ser utilizados para o rastreio genético (RNAi), a triagem de drogas, estudos funcionais, estudos de interação patógeno-hospedeiro e muitas outras áreas de investigação.
O procedimento aqui a.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo CNRS (PICS 2012-2014 a GE) e por uma bolsa da Regione Campania (LR n.5, 28.03.2002 para Giovanna Mottola). Filippo Conti é membro da Cooperação Científica Foundation'' Infectiopole Sud.'' Nicola Boucherit é um companheiro do Ministério Francês de Pesquisa e Tecnologia. As fontes de financiamento não teve nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados, análise de dados, a decisão de publicar ou preparação do manuscrito.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco Life Technologies | 21969-035 | |
| Soro de bezerro fetal | Gibco Life Technologies | 10270 | |
| Penicilina/Estreptomicina | Gibco Life Technologies | 15070 | |
| Glutamina | Gibco Life Technologies | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Lise de glóbulos vermelhos buffer | Sigma | R7757 | |
| Filtro de célula 70 μ m Nylon | BD Falcon | 352350 | |
| Filtro de célula 40 μ m Nylon | BD Falcon | 352340 | |
| Tubos de 50 ml | qualquer fornecedor | n/a | |
| Tubos de 15 ml | Qualquer fornecedor | n/a | |
| Placas de Petri (100/20 mm) | Qualquer fornecedor | n/a | tratadas com cultura |
| (35/10 mm) | Qualquer fornecedor | n/a |
Referências
- Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
- Van Furth, R. Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderm....
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Reimpressões e permissões
