Um modelo do rato de mama câncer no cérebro metástase é estabelecida com ultra-som guiada por imagem injeção intracardíaca de células MDA-MB231/Br-GFP. Desenvolvimento de metástases intracranianas multifocais tem sido monitorada longitudinalmente usando alta resolução de 9.4 T MRI.
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Artigo de método
Ecografia-guiada injeção intracardíaca para desenvolver um modelo do rato de mama metástases do cancro cerebral Seguido por Longitudinal MRI
Neste artigo
Resumo
Resumo
Metástases cerebrais de câncer de mama, que ocorre em 30% dos pacientes com câncer de mama em estágio IV, está associada com alta mortalidade. A sobrevida média é de apenas 6 meses. É crítico para ter modelos animais adequados para imitar a propagação hemodinâmico das células metastáticas no cenário clínico. Aqui, estamos introduzindo o uso de ultra-sonografia pequeno animal para guiar uma injeção precisa do cérebro células de câncer de mama tropical para o ventrículo esquerdo de ratos pelados atímicos. RM longitudinal é usado para avaliar a iniciação intracraniana e crescimento de metástases cerebrais. Injeção intracardíaca de ultra-som-guiada garante não só uma injeção precisa e vem uma taxa de sucesso mais elevada, mas também diminuiu significativamente a taxa de mortalidade, em comparação com o nosso procedimento manual anterior. In vivo alta resolução de ressonância magnética permite a visualização de lesões multifocais hiperintensas, tão pequeno quanto 310 mM de diâmetro em T imagens 2-ponderadas em 3 semanas após a injecção. Follow-se a RM revela crescimento do tumor intracraniano e aumento do número de metástases que distribuem ao longo de todo o cérebro.
Introdução
Metástase cerebral é a doença maligna intracraniana mais comum em adultos. O prognóstico é extremamente pobre, com uma sobrevida média de 4-6 meses, mesmo com o tratamento agressivo. O câncer de mama é um dos três principais tipos de câncer primário com alta morbidade da metástase cerebral 1-3. Várias linhas de câncer de mama cérebro-trópicos são capazes de desenvolver metástases cerebrais após intracardíaca ou injeção intracarotídeo 4. Injeção direta de células tumorais para o ventrículo esquerdo pode ignorar o leito capilar pulmonar e, assim, aumentar a incidência de formação de metástases cerebrais, minimizando metástases viscerais. A linha M....
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Protocolo
Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê de University of Texas Southwestern Medical Center Animal Care Institucional e uso.
1. Preparação das Células MDA-MB231/Br-GFP
- Recuperar e cultura das células MDA-MB231/Br-GFP (gentilmente cedidas pelos Drs. Palmieri e Steeg, NCI) em meio DMEM contendo 10% de FBS, 1% de glutamina e 1% de penicilina / estreptomicina.
- Observar o estado das células e cor de meio, e substituir meio cada 2-3 dias.
- Tripsinizar e recolher as células, quando 80% de confluência é alcançado como descrito nas etapas 1.3.1-1.3.5:
- Remover o meio antigo por completo e....
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Resultados
Com a elevada resolução espacial de ressonância magnética (78 mM de resolução do plano), lesões de hiper-intensas podem ser identificados tão pequeno quanto 310 um de diâmetro (Figura 2). Desde as metástases neste estudo são muito pequenos e desenvolvimento de necrose e edema é mínima, a lesão hiperintensas em T imagens 2-ponderados realmente representava a massa tumoral.
Exames de ressonância magnética permitem longitudinais na avaliação não invasiva
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Discussão
No presente estudo, demonstramos que a injeção ventricular esquerda guiada por ultra-sonografia garante a precisão de modo que todos os animais do estudo desenvolveram metástases cerebrais e morte do animal não foi observada. A beleza da injeção guiada por imagem é que o caminho da penetração da agulha da pele e, finalmente, para o ventrículo esquerdo pode ser monitorado e ajustado sob a imagem, o que é distinto do procedimento manual que exige rigorosos marcos anatômicos para seguir.
Entend.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Somos gratos aos drs. Diane Palmieri e Patricia Steeg de NCI por nos fornecer as células MDA-MB231Br. Agradecemos ao Dr. Ralph Mason, Sr. Jason Reneau ea Sra. Ramona Lopes para o suporte técnico e colegial. Este trabalho foi financiado em parte pelo IDEA DOD Prêmios W81XWH-08-1-0583 e W81XWH-12-1-0317. Experimentos de ressonância magnética foram realizados no Centro de Pesquisa de Imagem avançada, uma facilidade NIH BTRP # P41-RR02584 e injeção intracardíaca guiada por ultra-som foi realizada com VisualSonics Vevo 770 sob 1S10RR02564801.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| DMEM HyClone | SH30022.01 | ||
| Tripsina | Mediatech | 25-051-C1 | |
| Contador automático de células | BioRad | TC10 | |
| Isoflurano | Baxter International Inc. | 1001936060 | |
| Sistema de Imagem de Alta Resolução VisualSonics Vevo 770 | Visual Sonics Inc. | ||
| Ímã de furo horizontal de 9,4 T com um sistema Varian INOVA Unity | A Agilent | ||
| Composto O.C.T | Sakura Finetek USA | 4583 |
Referências
- Schouten, L. J., et al. Incidence of brain metastases in a cohort of patients with carcinoma of the breast, colon, kidney, and lung and melanoma. Cancer. 94, 2698-2705 (2002).
- Lin, N. U., et al. CNS metastases in breast cancer. J. Clin. O....
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Reimpressões e permissões
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