Aqui nós descrevemos um método para a medição rápida e precisa do desempenho de vôo em Drosophila, permitindo seleção de alto rendimento.
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Artigo de método
Um método melhorado para rápido e preciso de medição de desempenho em vôo
Neste artigo
Resumo
Resumo
Drosophila provou ser um sistema modelo útil para a análise de comportamento, incluindo o vôo. O testador vôo caindo envolvido inicial voa em uma revestido a óleo cilindro graduado; altura de desembarque prevista uma medida de desempenho de vôo, avaliando como moscas longe vai cair antes de produzir o suficiente impulso para fazer contato com a parede do cilindro. Aqui nós descrevemos uma versão atualizada do testador de vôo com quatro grandes melhorias. Primeiro, nós adicionamos um "tubo de queda" para garantir que todas as moscas entrar no cilindro de vôo a uma velocidade semelhante entre ensaios, eliminando a variabilidade entre os usuários. Em segundo lugar, substituiu o revestimento de óleo com folhas de plástico removíveis revestidas em Emaranhado-Trap, um adesivo projetado para capturar insetos vivos. Em terceiro lugar, nós usamos um cilindro de mais tempo para permitir a discriminação mais precisa da capacidade de vôo. Em quarto lugar, usamos uma câmera digital e software de imagem para automatizar a marcação de desempenho de vôo. Estas melhorias permitem o rapid, avaliação quantitativa do comportamento de vôo, útil para grandes conjuntos de dados e telas genéticos de larga escala.
Introdução
Drosophila tem sido utilizado para estudar a base genética de comportamento 1, e os investigadores desenvolveram um número de maneiras para analisar vários tipos de comportamento 2-6. As moscas têm sido particularmente úteis no fornecimento de modelos úteis de distúrbios neuromusculares 7. Um ensaio comum usado para estudar o comportamento locomotor é o desempenho de vôo. O testador vôo original é útil para identificar vôo mutantes defectivos e para a avaliação quantitativa da capacidade voo 1, mas tem várias deficiências que limitam a sua aplicação para as telas de alto rendimento: o uso de cilindros revestidos de....
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Protocolo
1. Montar vôo Tester
- Cilindro vôo seguro para Anel Suporte 1 usando grampos cadeia. (Deixe cerca de 3 cm por baixo do cilindro para pesar prato.)
(Nota: O cilindro de vôo que usamos é de 90 cm de comprimento, com um diâmetro de 13,5 cm.) - Insira pesar a cápsula com uma fina camada de óleo mineral por baixo do cilindro de voo.
- Funil Segura para Anel Fique 2, utilizando uma braçadeira de anel e grampo garra. Ajustar a altura do funil de modo a que a parte inferior do funil é alinhada com a parte superior do cilindro de voo. (Nota: o diâmetro da ponta do funil deve ser menor do que o diâmetro exterior dos tubos de ensaio colocados no....
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Resultados
Figura 1A mostra um esquema da montagem testador vôo atualizado. Figura 1B ilustra o projeto de trilha permitem a câmera para tirar uma imagem panorâmica sem bloquear o campo de visão. Os resultados representativos são mostrados na Figura 2, em que o desempenho de voo de moscas mutantes Slowpoke, que têm um voo conhecidos defeito 8-10, são comparados com o tipo selvagem Canton-S voa. Controle voa consistentemente pousar perto do topo d.......
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Discussão
Usando os métodos descritos aqui, temos sido capazes de avaliar rapidamente o desempenho de vôo de um grande número de mutantes de Drosophila, proporcionando maior eficiência do que era possível anteriormente. Para nossos experimentos, nós rotineiramente separar machos e fêmeas e criá-los em baixa densidade (menos de 20 moscas / frasco) para limitar a agressão que possa danificar asas. Outra consideração importante é controlar adequadamente as diferenças de desempenho de vôo, devido a diferenças de fundo genéti.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse de divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health concede F32 NS078958 (DTB) e R01 AG033620 (BG).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Espátula | Home Depot | 630147 | www.homedepot.com |
| Moldura de banda traseira de pinho (2x) | Home Depot | 156469 | www.homedepot.comTábua |
| de Tiras de Pele | Home Depot | 164704 | www.homedepot.com |
| Armadilha de Emaranhamento Revestimento de Armadilha de Insetos | BioControl Network | 268941 | www.biconet.com |
| Computador Portátil | Apple | www.apple.com/mac/ | |
| Óleo mineral | Fisher Scientific | BP26291 | www.fishersci.com |
| Cartolina branca | Staples | 247403 | www.staples.com |
| Prato de pesagem de poliestireno | Fisher Scientific | S67091A | www.fishersci.com |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | http://rsb.info.nih.gov/ij/ | |
| Câmera digital | Sony | DSC-TX7 | www.store.sony.com |
| Pinça fina | Fine Science Tools | www.finescience.com | |
| Cilindro de policarbonato (tubo de queda) | McMaster-Carr | 8585K62 | www.mcmaster.com |
| Cilindro de voo (acrílico) | McMaster-Carr | 8486K943 | www.mcmaster.com |
| Folhas de policarbonato | McMaster-Carr | 85585K25 | www.mcmaster.com |
| ring stand (2x) | Fisher Scientific | S47808 | www.fishersci.com |
| Suporte de anel | Fisher Scientific | S47791 | www.fishersci.com |
| Grampos de extensão de três pinos (x2) | Fisher Scientific | 05-769-7Q | www.fishersci.com |
| Funil | Fisher Scientific | 10-500-3 | www.fishersci.com |
| (2x) | VWR | 21573-275 | www.vwr.com |
| Frascos para injetáveis de vidro | VWR | 66020-198 | www.vwr.com |
Referências
- Benzer, S. Genetic dissection of behavior. Sci. Am. 229, 24-37 (1973).
- Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration. J. Vis. Exp. , e2504(2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T.
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Reimpressões e permissões
