Apresenta-se um teste de escolha para revelar a influência de odorantes sobre o comportamento de Drosophila, utilizando um ensaio de Y-labirinto.
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Neste artigo
Resumo
Resumo
A detecção de sinais a partir do ambiente é essencial para animais para garantir a sua sobrevivência. Para este fim, eles usam estímulos ambientais, tais como a visão, mechanoreception, audição e chemoperception através de gosto, através de contato direto ou através do olfato, que representa a resposta a uma molécula volátil atuando em uma escala mais longa. Moléculas químicas voláteis são sinais muito importantes para a maioria dos animais na detecção de perigo, de uma fonte de alimentação, ou para comunicação entre indivíduos. Drosophila melanogaster é um dos modelos biológicos mais comuns para os cientistas a explorar a base molecular e celular do olfacto. A fim de destacar as habilidades olfativas deste pequeno inseto, nós descrevemos um protocolo escolha modificado com base no teste Y-maze classicamente utilizada com camundongos. Dados obtidos com Y labirintos dar informações valiosas para entender melhor como os animais lidar com seu ambiente perpetuamente mudando. Introduzimos um protocolo passo-a-passo para estudar oimpacto de odores sobre a resposta exploratória mosca com este ensaio Y-labirinto.
Introdução
Quimiorecepção através de gosto ou olfato é uma modalidade sensorial chave para a sobrevivência animal. Dá sinais vitais necessários para a detecção de um perigo ou fontes de alimentos, bem como para as interacções sociais. Ela também ajuda os animais a encontrar um parceiro necessário sexo para a sua reprodução. Por mais de 20 anos, a pesquisa intensiva, incluindo Nobel premiado trabalho de Richard Axel e Linda Buck, em 2004, "por suas descobertas de receptores olfativos ea organização do sistema olfativo", foi realizado para revelar as bases moleculares e celulares da olfato 1,2.
Um dos modelos animais favoritos para os cient....
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Protocolo
1. Antes de Começar
- Use um estoque de referência isogenized tendo fenótipos comportamentais estáveis e robustos. Não existe uma regra geral para a escolha deste estoque, uma vez que todos os controles potenciais podem levar fundo heterogêneos alelos.
- Use esta estirpe de controlo para todos os outros retrocruzamento estoque necessário para etapas posteriores. Esta etapa retrocruzamento é normalmente representado por pelo menos cinco cruzamentos sucessivos de uma única fêmea virgem (para permitir possível crossing-over entre cromossomos homólogos) para 2-3 machos referência isogênicos 5. Este passo é importante para homogeneizar o fund....
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Resultados
A Figura 1D mostra dois respostas representativas utilizando este ensaio Y-labirinto. Canton-S machos evitar fortemente a 10% de ácido acético diluído, em água destilada, enquanto eles não evitar significativamente o ácido fenilacético 10%. Estes ensaios são baseados em 10 machos por repetição colocados juntos nos frascos de carregamento. Este protocolo pode levar a grande erro padrão da média. Se necessário, é possível reduzir este inconveniente, usando 20 machos por repetições em vez de apenas 10. Mat.......
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Discussão
Nosso protocolo Y-maze baseia-se num protocolo anteriormente descrito 9. No entanto, apresentamos duas grandes diferenças. Primeiro, usamos pontas de pipeta estreitas para evitar que as moscas de retornar uma vez que eles decidem entrar no frasco que contém o solvente ou o solvente mais o odorante. Estas pontas estreitas também são úteis para limitar a difusão odorante no Y-labirinto. Em segundo lugar, nós usamos um frasco menor carga para forçar as moscas para entrar no Y-labirinto. É importante ter uma elev.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Agradecemos 4 revisores anônimos por seu trabalho para melhorar o manuscrito. Agradecemos ao Centre National de la Recherche Scientifique pelo apoio financeiro para MBG e YG, ea Université de Bourgogne e do Ministério da Investigação francês para MMS. Pesquisa no laboratório YG é financiado pelo Conselho Europeu de Investigação (ERC Começando Grant, GliSFCo-311403), a Agence Nationale de la Recherche (ANR-JCJC, GGCB-2010), o Conseil Régional de Bourgogne (Faber), eo CNRS.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tubo de poliestireno Drosophila | VWR europa | 734-2255 | 30 x 25 mm Labirinto em Y |
| Drosophila Tubo de borossilicato | Dijon verre | 95 X 25 mm Labirinto em Y | |
| Rolha de espuma | Dutscher | 999038 | Labirinto em Y |
| Conector em forma de | Y Europrix | 11020605 | Labirinto em Y |
| 100-1.000 µ l ponteiras de pipeta | Corning | 4868 | Junte as seguintes ponteiras de pipeta ao conector em forma de Y. Corte 2 pontas de pipeta a 65 mm da extremidade larga e conecte a extremidade estreita (com um ∼ Abertura de 2 mm) a 2 frascos para injetáveis de teste. Essas aberturas limitarão as inversões de marcha assim que as moscas entrarem nos tubos que contêm os odores. Corte 1 ponta de pipeta a 35 mm da extremidade larga e conecte-a ao frasco de carregamento. Lâmpada |
| LED Y-maze Far-Red | Rubin-Lacaque | 0RB180238 | 625-630 nm |
| Ácido Acético | Sigma-Aldrich | 45725 | |
| Ácido Fenilacético | Sigma-Aldrich | P16621 | |
| Levedura | Sensient Sabores Estrasburgo | 1018880464 | |
| Fubá | eurogerm | Farine de maï s | |
| Ágar | Kalys | HP-697-25 | |
| Metil hidroxi 4 benzoato | VWR 25605293 |
Referências
- Mombaerts, P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors. Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).
- Silbering, A. F., Benton, R. Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: 'chance or design. EMBO Rep. 11, 173-1....
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Reimpressões e permissões
