Drosophila melanogaster são úteis no estudo de manipulações genéticas ou ambientais que afetam comportamentos, como a atividade locomotora espontânea. Aqui nós descrevemos um protocolo que utiliza monitores com raios infravermelhos e software de análise de dados para quantificar a atividade locomotora espontânea.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Determinação da atividade locomotora espontânea em
Neste artigo
Resumo
Resumo
Drosophila melanogaster tem sido usada como um excelente modelo para estudar organismo manipulações ambientais e genéticos que afectam o comportamento. Um tal comportamento é a atividade locomotora espontânea. Aqui nós descrevemos o nosso protocolo que utiliza Drosophila monitores da população e um sistema de rastreamento que permite o monitoramento contínuo da atividade locomotora espontânea de moscas por vários dias de cada vez. Este método é simples, fiável, e objectiva e pode ser usado para examinar os efeitos do envelhecimento, o sexo, as alterações no teor calórico dos alimentos, a adição de drogas, ou manipulações genéticas que imitam doenças humanas.
Introdução
As moscas de fruta, Drosophila melanogaster, têm sido usadas como um organismo valioso modelo para estudar mecanismos subjacentes comportamentos complexos, tais como a aprendizagem ea memória, a interação social, agressão, abuso de drogas, o sono, a função sensorial, corte e acasalamento 1,2. Um comportamento que tem sido estudada através de vários protocolos é a atividade locomotora espontânea. Geotaxis negativo foi um dos primeiros métodos desenvolvidos para medir a actividade de Drosophila, e este protocolo envolve a medição da percentagem de moscas que atingem uma certa altura do frasco depois de moscas foram agitados para o fundo do ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Nota: A tensão Canton-S é a linha de fundo do tipo selvagem padrão obtido a partir da Bloomington Stock Center.
1. Preparação de Alimentos e Receita para 1000 ml de Alimentos
Nota: Esta seção descreve o protocolo para a preparação de alimentos. Grandes vasos de metal são usados para preparar cerca de 18 litros de alimento de cada vez. O protocolo aqui descrito é reduzido e utiliza 1,000 ml de H 2 O. A comida é autoclavado duas vezes.
- Misture 113 g de sacarose e 28 g levedura de cerveja em 643 ml de água. Deixe os ingredientes em um conjunto de placa quente a 25 ° C, com uma barra de agi....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
A atividade locomotora espontânea em Drosophila depende sexo mosca (Figura 3A), o conteúdo calórico dos alimentos (Figura 3B) e ciclo claro / escuro. Uma vez que a luz é desligada atividade mosca diminui drasticamente. Figura 3A ilustra de 24 horas de gravações de moscas machos e fêmeas de atividade locomotora. Um asterisco no eixo x marca o momento em que a luz foi desligada ea transição para o ciclo escuro. Figura 3B ilustra o desvio pa.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Atividade locomotora espontânea de moscas é influenciado por muitos fatores, como idade, antecedentes genéticos e sexo 2,13,18,19. Além disso, os factores ambientais tais como o teor calórico dos alimentos, a temperatura do meio, a adição de diversos fármacos, e dia / noite ciclo de luz pode afectar a actividade da mosca. Por exemplo, moscas macho da mesma idade têm uma maior atividade física espontânea entre mulheres (Figura 1). Portanto, as moscas da mesma idade e sexo devem ser comparados .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Não temos nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por uma concessão do National Institutes of Health (AG023088 a BR).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cacarose FCC Grau Alimentício 100 LB, | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90471380 | |
| Brewer' s Levedura | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90331280 | |
| Drosophila Agar Fine | SciMart | DR-820-25F | |
| Fubá | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90141125 | |
| Metil4-hidroxibenzoato, tegosept | Sigma | H5501-5KG | |
| EtOH | Pharmco-AAPER | 111000200 | |
| Levedura Seca Ativa | Fisher Scientific | ICN10140001 | |
| Fly CO2 pad Microscópio | LabScientific | BGSU-7 | |
| Olympus | SZ40 | ||
| Drosophila tanque de dióxido de carbono (CO2) | Airgas | UN1013 | |
| Pincel pequeno para empurrar as moscas | |||
| Frasco de concha largo | Fischer Scientific | AS519 | |
| Buzzplugs para frascos de plástico largos Frascos de vidro | Fischer Scientific | AS275 | |
| Frascos de vidro (25 x 95 mm) | Fischer Scientific Kimble 60931-8 | AS-574 | |
| Tampões de esponja para frascos de vidro | SciMart | DR-750 | |
| Drosophila Food Dispenser | Applied Scientific (Fischer Científico) | AS780Q | |
| DPM Drosophila Monitor de População | Trikinetics Inc. | ||
| Fonte de alimentação DC com cabo de linha | Trikinetics Inc. | ||
| PSIU9 A Unidade de Interface da Fonte de Alimentação | Trikinetics Inc. | ||
| Cabos telefônicos e divisores de 5 vias | Trikinetics Inc. | ||
| Hardware USB (Universal Serial Bus) | Trikinetics Inc. | ||
| Macintosh ou PC com Windows com porta | |||
| UCB Software de aquisição de dados DAMSystem308X para Macintoch OSX (Intel) | www.trikinetics.com | ||
| Software de aquisição de dados DAMSystem308 para PC com Windows (XP/Vista/7) | www.trikinetics.com | ||
| [header] | |||
| Software DAMFileScan108X para Macintosh | |||
| software DAMFileScan108X para PC com Windows (XP/Vista/7) | www.trikinetics.com | ||
| software USB (PSIUdrivers.zip) | www.trikinetics.com | ||
| DAMSystem Notes 308 | (http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf |
Referências
- Ali, Y. O., Escala, W. E., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration. J. Vis. Exp. 49, 2504(2011).
- Jones, M. A., Grotewiel, M. Drosophila as a model for age-related impairment....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
