Uma nova abordagem para Microdissecção Recuperando<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; transcritos específicos de formalina fixo Parafina incorporado Lung granulomas

Teresa A. Hudock; Deepak Kaushal

doi:10.3791/51693

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Artigo de método

Uma nova abordagem para Microdissecção Recuperando

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DOI:

10.3791/51693

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5 de junho de 2014

Teresa A. Hudock¹ , Deepak Kaushal¹^,²

¹Bacteriology and Parasitology, Tulane National Primate Research Center, ²Microbiology and Immunology, Tulane National Primate Research Center

Neste artigo

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Resumo

Microdissecção tem sido extensivamente utilizada para a análise de DNA, RNA e proteínas dentro do tecido. Microscopia captura a laser (LCM) é o método mais comumente utilizado, mas uma nova técnica de fresagem, mesodissection, é recentemente disponível. Demonstramos extração de RNA a partir de mesodissected formalina parafina fixo lâminas de tecido embebidos de Mycobacterium tuberculosis granulomas.

Resumo

Microdissecção foi usado para o exame de tecidos em ADN, ARN, e os níveis de proteína de mais de uma década. Microscopia captura a laser (LCM) é a técnica de microdissecção mais comum usado hoje. Nesta técnica, um laser é usado para fundir focalmente uma membrana termoplástica que se sobrepõe uma secção de tecido ¹ desidratado. O compósito secção de tecido é então levantada e separada da membrana. Embora esta técnica pode ser utilizada com sucesso para a análise de tecido, que é demorado e caro. Além disso, a conclusão bem sucedida de procedimentos que utilizam esta técnica requer a utilização de um laser, limitando assim o seu uso. Uma nova abordagem microdissection mais acessível e prático chamado mesodissection é uma possível solução para as armadilhas da LCM. Esta técnica utiliza o sistema de MESO-1/MeSectr moer o tecido desejado a partir de uma amostra de tecido montada deslizante, enquanto simultaneamente a distribuição e aspiração de fluido para recuperar a amostra de tecido desejado emum pouco moinho consumível. Antes do processo de dissecação começa, o usuário alinha a parafina fixado em formalina incorporado (FFPE) deslizar com hematoxilina e eosina (H & E) referência slide. Depois disso, o operador anota a área de dissecção desejada e prossegue para dissecar o segmento apropriado. O programa gera uma imagem arquivada da dissecção. A principal vantagem do mesodissection é a curta duração necessária para dissecar um slide, tendo uma média de 10 minutos de set up para provar geração neste experimento. Além disso, o sistema é muito mais rentável e fácil de usar. Um pequena desvantagem é que não é tão precisa como a microscopia de captura laser. Neste artigo, vamos demonstrar como mesodissection pode ser usado para extrair RNA de slides de granulomas FFPE causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb).

Introdução

As amostras foram tradicionalmente microdissecado manualmente a partir de qualquer tecido ou conjunto lâminas usando uma agulha e bisturi. Isto exige uma separação clara entre a secção de tecido de interesse e tecidos circundantes pontos ^2. Com os avanços na tecnologia actual perfil molecular, tem havido uma necessidade cada vez maior para avaliar tecidos ao nível celular. Devido às limitações de microdissecção manual, foram estabelecidas técnicas, incluindo LCM para permitir uma maior precisão isolamento. Esta técnica permite ao investigador para isolar populações de células específicas a partir de vários tipos de células e de deslizamento, que podem entã....