O transplante de pele da cauda para estudar as respostas das células T CD4 alogênico em camundongos

Resumo

O transplante de pele da cauda é um modelo poderoso para estudar a rejeição dependente de células T e a indução de tolerância durante respostas imunes alogênicas em camundongos. As vantagens deste protocolo são pequenas cirurgias invasivas e facilidade de monitoramento sem a necessidade de sacrificar o camundongo receptor.

Resumo

O estudo das respostas das células T e suas consequências durante o reconhecimento do aloantígeno requer um modelo que permita distinguir entre células T doadoras e hospedeiras, monitorar facilmente o enxerto e adaptar o sistema para responder a diferentes questões imunológicas. Medawar e colegas estabeleceram o transplante alogênico de pele da cauda em camundongos em 1955. Desde então, o modelo de transplante de pele tem sido continuamente modificado e adaptado para responder a perguntas específicas. O uso da pele da cauda torna este modelo fácil de pontuar para a rejeição do enxerto, não requer preparo extensivo nem anestesia profunda, é aplicável a animais de todos os antecedentes genéticos, desencoraja a necrose isquêmica e permite intervenção química e biológica.

Em geral, as células T alogênicas CD4⁺ e CD8⁺ são responsáveis pela rejeição de aloenxertos, uma vez que reconhecem antígenos principais de histocompatibilidade incompatíveis de diferentes cepas de camundongos. Vários modelos foram descritos para ativar células T alogênicas em camundongos transplantados de pele. A identificação de moléculas de classe I e II do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) em diferentes cepas de camundongos, incluindo camundongos C57BL / 6, foi um passo importante para a compreensão e estudo das alorespostas mediadas por células T. No modelo de transplante de pele da cauda descrito aqui, uma mutação de três pontos (I-A^bm12) no sulco apresentador de antígeno da molécula MHC CLASSE II (^{I-A b}) é suficiente para induzir forte ativação alogênica de células T CD4⁺ em camundongos C57BL/6. Enxertos de pele de camundongos I-A^bm12 em camundongos C57BL/6 são rejeitados dentro de 12-15 dias, enquanto enxertos singênicos são aceitos por até 100 dias. A ausência de células T (camundongos CD3^-/- e Rag2^-/-) permite a aceitação do enxerto de pele por até 100 dias, o que pode ser superado pela transferência de 2 x 10⁴ células T selvagens ou transgênicas. As células T transferidas adotivamente proliferam e produzem IFN-γ em camundongos Rag2^-/- transplantados com^bm12 I-A.

Introdução

O transplante de órgãos sólidos, tais como a pele, o coração e os rins já é um procedimento padrão na prática médica mundial ^1. Órgãos transplantados com sucesso pode ser rejeitado pela activação do sistema imune receptor, o qual reconhece os principais antigénios de histocompatibilidade dos dadores. Pacientes transplantados Portanto precisam de tratamento com drogas imunossupressoras ^2. O transplante alogênico de pele em ratos foi estabelecida por Medawar e seus colegas em 1955 e foi útil para identificar as moléculas-alvo mais tarde descrito como complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe I e II. Desde então, o modelo de transp....

Protocolo

Nesta publicação de vídeo e protocolo, todos os procedimentos com animais foram conduzidos de acordo com o protocolo de animais aprovados pela Autoridade cantão Basileia-Cidade, Suíça. Execute todos os procedimentos em condições estéreis, sempre que possível.

1. Preparação de Cirurgia

1. Autoclave todos os instrumentos cirúrgicos e gaze antes de usar.
2. Aqueça a almofada quente e organizar instrumentos cirúrgicos sobre a mesa (Tabela de Materiais / Métodos).
3. Abra as ataduras tira dedo. Aplique vaselina na almofada ferida com um cotonete (certifique-se a gaze é completamente coberto).
4. Pe....

Resultados

Numa primeira abordagem C57BL / 6 foram transplantadas com IA allografts ^BM12 e IA ^b syngrafts. Após a remoção curativo, enxertos sinais manifestos de cicatrização de feridas, sem encerramento da zona de contato em camundongos C57BL / 6 (Figura 1A). Após a remoção do penso, a inflamação mediada por células T CD4 ^+, conduziu ao aparecimento de áreas necróticas (manchas vermelhas) e rejeição de aloenxertos IA ^BM12 em ratinhos C57BL / 6 no espaço de 13 dias após .......

Discussão

O transplante de pele é um método amplamente utilizado para estudar a rejeição e de tolerância em células T dependentes. Desde foi criado o modelo de transplante de pele, várias adaptações e mudanças foram aplicadas. No procedimento descrito, IA ^BM12 transplante de cauda-de pele é realizada usando gás anestésico (isoflurano). O uso de anestesia gás diminui o tempo de execução e recuperação de ratos, o que diminui o stress em ratos transplantados. O procedimento utiliza tecido adesivo para fixar o tail-pele, q.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução padrão Betadine	Mundipharma
Cotonete	Carl Roth GmbH	31025060
Dafalgan , UPSA	Bristol Myers Squibb UPSA Hansaplast
tiras de dedo	Beierdorf AG	REF.76861
Histoacryl adesivo tecidual	Braun	REF.1050052
Leukotape classic , 2 cm x 10 m	BSN Medical SAS	REF.02204-00
PBS, solução salina tamponada com fosfato, pH 7,4	Invitrogen	10010015	GIBCO
Gaze estéril, 5 x 5 cm, 8 camadas	MaiMed GmbH	21010
Pinça de padrão estreito	FST	11003-12
Tesoura de íris fina curva	FST	14095-11
Tesoura de íris fina	FST	14094-11
Tesoura Mayo	FST	14010-15
Tesoura de artéria com ponta esférica 11,5 cm	FST	14080-11
Pinça de tecido	FST	11021-14
Lâmina cirúrgica nº 20	Swann-Morton LTD	3006	Aço carbono
Cabos de lâmina cirúrgica	Seringa Swann-Morton LTD
, 1 ml	ARTSANA		Descartável
Temgesic, buprenorfina	ESSEX Chemie AG		0,3 mg/ml
Placas de cultura de tecidos 10 cm, 60,1 cm2	TPP
Vaselina	Vifor SA
Almofada quente	Solis		Tipo 223