O mouse do bulbo olfativo acessório (AOB) tem sido difícil de estudar, no contexto da codificação sensorial. Aqui, nós demonstramos uma dissecação que produz uma preparação ex vivo em que os neurônios AOB permanecem funcionalmente ligados às suas entradas periféricas, facilitando a investigação sobre o processamento de informações de feromônios e cairomônios rato.
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Artigo de método
Ex vivo preparações da Intacta Vomeronasal Órgão e acessórios bulbo olfatório
Neste artigo
Resumo
Resumo
O sistema olfativo acessório rato (AOS) é um caminho sensorial especializado para detectar odores voláteis sociais, feromônios e cairomônios. O primeiro circuito neural na via AOS, chamado bulbo olfatório acessório (AOB), desempenha um papel importante no estabelecimento de comportamentos típicos do sexo, como a agressão territorial e acasalamento. Este circuito pequeno (<1 mm 3) possui a capacidade de distinguir estados comportamentais únicas, tais como sexo, tensão e estresse a partir de sugestões de quimio nas secreções e excreções de animais da mesma espécie. Enquanto a organização compacta deste sistema apresenta oportunidades únicas para a gravação de grandes porções do circuito ao mesmo tempo, a investigação de processamento sensorial no AOB continua sendo um desafio, em grande parte devido à sua localização experimentalmente desvantajosa no cérebro. Aqui, nós demonstramos uma dissecação de várias etapas que remove a AOB intacta dentro de um único hemisfério do crânio anterior mouse, deixando conectaríons para ambos os vomeronasais periférica neurônios sensoriais (VSNs) e circuitos neuronais locais intactos. O processo apresenta a superfície de MAA para dirigir a inspecção visual, facilitando electrofisiológico e gravações ópticas de AOB elementos de circuito, na ausência de anestésico. Após a inserção de uma cânula fina no órgão vomeronasal (VNO), que abriga os VSNs, pode-se expor diretamente da periferia de odores e feromônios sociais durante a gravação de actividade a jusante da AOB. Este procedimento permite investigações controladas em AOS processamento de informação, que pode lançar luz sobre mecanismos que ligam a exposição feromônio a mudanças no comportamento.
Introdução
Processamento sensorial no cérebro de mamíferos tipicamente se estende por vários circuitos neuronais reciprocamente conectados, cada um dos quais extrai as características particulares de estímulos sensoriais. Em vias sensoriais, processamento de informação precoce é vital para a percepção eo comportamento normal. No sistema olfativo acessório (AOS), o bulbo olfativo acessório (AOB) é o principal circuito neural que liga a periferia sensorial para estruturas a jusante que ditam o equilíbrio hormonal 1,2, agressão 3 e 4 excitação. Como tal, o processamento de informações dentro deste circuito está fortemente ligada a mudanças no compo....
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Protocolo
Todos os experimentos foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo Comitê de UT Southwestern Institutional Animal Care e Use, e foram escolhidos de modo a minimizar o estresse, desconforto e dor experimentada pelos animais experimentais.
1. Dissecção Secção
Uma câmara de dissecção personalizada e pequena, prancha fina de plástico são necessários para obter os melhores resultados (Figura 1). Construir ou obter tal câmara antes de tentar esse protocolo.
2. Soluções de dissecação
- Prepare 1 litro de padrão artificial líquido cefalorraquidiano (aCSF....
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Resultados
Alcançar o sucesso com esta preparação requer prática extensa, e tem várias fases em que ele pode falhar. Deve-se esperar para exigir várias tentativas antes de alcançar o sucesso. A câmara de dissecção personalizada é necessária para a conclusão bem sucedida deste protocolo, e deve ser obtido antes de iniciar os estágios mais avançados da dissecção. A concepção da câmara apresentada na Figura 1 é suficiente para esta finalidade, e pode ser feito de materiais plásticos relativamente baratos, com exigênc.......
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Discussão
O VNO-AOB ex preparação vivo descrito neste protocolo é uma alternativa útil para anestesiados in vivo 5-7 e fatia vivo agudo 17 experimentos de função AOB. Ao contrário de experimentos fatia AOB agudas, que também expõem elementos do circuito para registros eletrofisiológicos e ópticos, esta preparação mantém todos os aferentes sensoriais e conexões intra-AOB. Embora isso também pode ser dito de anestesiado em abordagens in vivo, a presença de anestésic.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse significativos para divulgar.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi apoiada por R00 DC011780 (JPM: NINDS, NIH), F30 DC011673 (GFH: NINDS, NIH) e os fundos de inicialização UT Southwestern (JPM).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tesoura reta | Fine Science Tools | 14002-14 | |
| Tesoura fina-Reta | Fine Science Tools | 14060-10 | |
| Tesoura fina-curvada | Fine Science Tools | 14061-10 | |
| Adson Forceps | Fine Science Tools | 11006-12 | |
| # 3 Bisturi Handle | Fine Science Tools | 10003-12 | |
| #11 Lâminas de Bisturi | Fisher Scientific | 3120030 | |
| Lâminas de Barbear de Aço Carbono Retas | Fisher Scientific | 12-640 | |
| 35 mm Placa de Petri | Fisher Scientific | 08-772-21 | |
| Câmara de Dissecção | Personalizada | N/A | Ver Figura 1 |
| Delrin prancha de plástico 0,6 cm x 1,5 cm x 0,1 cm | Personalizado | N / A | |
| Dow Corning Graxa a vácuo de silício | Fisher Scientific | 146355D | |
| # 5 Fórceps, Ferramentas | Ciências Finas | 91150-20 | |
| # 5 Fórceps, | Ciências Finas | 11295-10 | |
| # 5 Fórceps, Ferramentas | Ciências Finas | 91150-20 | |
| Vannas Spring Scissors | Ferramentas | de Ciências Finas15000-08 | |
| 1/16" Macho Luer | Cole-Parmer | EW-45505-00 | |
| Tubulação de 1/16" | Fisher Scientific | 14-171-129 | |
| Epoxy de duas toneladas | Grainger | 5E157 | |
| ValveBank Kit de Perfusão Pressurizada | AutoMate Scientific | 09-16 | |
| Controlador digital/manual ValveLink | AutoMate Scientific | 01-18 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | vários | |
| KCl | Sigma-Aldrich | vários | |
| CaCl2 di-hidratado | Sigma-Aldrich | vários | |
| MgCl2 hexahidratado | Sigma-Aldrich | vários | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | vários | |
| NaH2PO4 | Sigma-Aldrich | vários | |
| myo-inositol | Sigma-Aldrich | vários | |
| Na-piruvato | Sigma-Aldrich | vários | |
| Na-ascorbato | Sigma-Aldrich | vários | |
| HEPES buffer | Sigma-Aldrich | vários | |
| Glicose | Sigma-Aldrich | vários |
Referências
- Bruce, H. M. An exteroceptive block to pregnancy in the mouse. Nature. 184, 105(1959).
- Bellringer, J. F., Pratt, H. P., Keverne, E. B. Involvement of the vomeronasal organ and prolactin in pheromonal induction of delayed implantation in mice. J Reprod Fertil....
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Reimpressões e permissões
