É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Murino Endoscopia para In Vivo Cura Multimodal imagem de Carcinogênese e Avaliação de Intestinal ferida e inflamação

18.9K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/51875

⸱

26 de agosto de 2014

 ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Pequenas técnicas de imagem animais permitem exames de diagnóstico de série e intervenções terapêuticas in vivo. Recentemente, o leque de aplicações tem aumentado significativamente e atualmente inclui avaliação do desenvolvimento de tumor do cólon, cicatrização de feridas e monitoramento da inflamação. Este protocolo ilustra essas aplicações potenciais diferentes de endoscopia murino.

Resumo

Modelos de mouse são amplamente utilizados para estudar patogênese de doenças humanas e para avaliar os procedimentos de diagnóstico, bem como intervenções terapêuticas pré-clínicos. No entanto, a avaliação válida de alterações patológicas, muitas vezes requer análise histológica, e quando realizado ex vivo, necessita de morte do animal. Portanto, em situações experimentais convencionais, exames de acompanhamento intra-individuais são raramente possível. Assim, o desenvolvimento de endoscopia de murino em ratinhos vivos investigadores permite pela primeira vez a ambos visualizar diretamente a mucosa gastrointestinal e também repetir o processo para a monitorização de alterações. Existem inúmeras aplicações para in vivo murino endoscopia, incluindo estudar inflamação intestinal ou cicatrização de feridas, a obtenção de biópsias da mucosa repetidamente, e localmente administrar agentes de diagnóstico ou terapêuticos em uso de cateter de injeção em miniatura. Mo de diagnóstico por imagem, mais recentemente, a imagem molecular tem estendidodalidades permitindo a detecção específica de moléculas alvo específicas distintas, usando as fotossondas. Em conclusão, a endoscopia murino surgiu como uma nova tecnologia de ponta para o diagnóstico experimental in vivo de imagens e pode ter um impacto significativo em pesquisas pré-clínicas em vários campos.

Introdução

Modelos animais têm muito enriquecido nossa compreensão de inúmeras patologias intestinais. O rato de laboratório (Mus musculus) surgiu como um modelo animal primordial na investigação biomédica devido à sua informação genética e genômica abundante e está prontamente disponível em linhagens transgênicas e mata-mata. Além de reforçar a compreensão patogênese da doença, modelos animais também são usados ​​principalmente para testar drogas candidatos, bem como intervenções diagnósticas ou terapêuticas pré-clínicos. No entanto, apesar da variedade de modelos de ratos, simulando a doença humana, muitas opções de diagnóstico e de intervenção que são rotineiramente....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) de acordo com a Lei de Proteção de Animais alemão.

1. Materiais e montagem de experimento

  1. Cuidados com os animais
    1. Use feminino ou camundongos machos de qualquer tensão pesando 20 a 25 g e abrigá-los de acordo com a legislação cuidado animal local.
    2. Alimentar ratos com comida para roedores e especial aplicar ração isenta de alfafa pelo menos três dias antes da fluorescência exames para minimizar endoluminal auto-fluorescência.
    3. Fornecer autoclavado beber água ad libitum.
    <....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Na monitorização in vivo da cicatrização do intestino
Durante a endoscopia de rotina, feridas na mucosa foram induzidas mecanicamente por uma pinça de biópsia em miniatura com um diâmetro de 3 Francês (igual a 1 mm; Figura 1A). Subsequentemente, a cicatrização de feridas foi monitorada por exames endoscópicos diários e quantificada por medição da área de ferida residual utilizando o software de edição, por exemplo, o ImageJ (Figura 1B). O.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

Cicatrização do epitélio é um processo contínuo. Esfoliação fisiológica contínua de células superficiais da mucosa gastrointestinal ocorre exigindo a regeneração frequente de células epiteliais 16. Consequentemente, a cicatrização de feridas prejudicada tem um imenso impacto sobre várias doenças, incluindo úlceras gastrointestinais e vazamento da anastomose 17 18. Avaliação da base molecular, assim como potenciais candidatos a medicamentos para estimular a cicatrização, só pode ser realizada de for.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Agradecemos Sonja Dufentester e Elke Weber para assistência técnica especializada. Agradecemos Faekah Gohar pela revisão do manuscrito e Stefan Brückner para suporte informática médica. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa interdisciplinar do Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2012_A94). D. Bettenworth foi apoiado por uma bolsa de pesquisa da Faculdade de Medicina da Westfälische Wilhelms-Universität Münster. M. Brückner foi apoiado por uma "Gerok" posição de rotação da Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG SFB1009B8). Agradecemos Heike Blum para ilustração do desenho anim....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Reagentes
Dieta sem alfafaHarlan Laboritories, Madison, EUA2014
Azoximetano (AOM)Sigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemanhaA5486
Pomada para os olhos BepanthenBayer, Leverkusen, Alemanha80469764
Sulfato de dextrano sódico (DSS)TdB Consulatancy, Uppsala, SuéciaDB001
EosinSigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemanhaE 4382
Ácido etilenodiaminotetracético (EDTA)Sigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemanhaE 9884
Falcon Tube 50 mlBD Biosciences, Erembodegem, Bélgica352070
Florene 100 V/VAbbott, Wiesbaden, AlemanhaB506
HematoxilinaSigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemanhaHHS32-1L
Isopentano (2-Metilbutano)Sigma-Aldrich, Deisenhofen, AlemanhaM32631-1L
Azul de metilenoMerck, Darmstadt, Alemanha1159430025
O.C.T. Tissue Tek compound                                                                 Sakura, Zoeterwonde, Holanda4583
Omnican F - canulaBraun, Melsungen, Alemanha9161502
Solução salina tamponada com fosfato, PBSLonza, Verviers, Bélgica4629
Cloreto de sódio 0,9%Braun, Melsungen, Alemanha5/12211095/0411
Dieta padrãoAltromin, Lage, Alemanha1320
Tissue-Tek CryomoldSakura, Leiden, Holanda4566
Vitro – Clusão                                                                                                                             R. Langenbrinck, Teningen, Alemanha04-0002 
Equipamento
AIDA ControlKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha20 096020
Filtro passa-bandaSemrock, Rochester, EUAHC 716/40
Filtro passa-bandaSemrock, Rochester, EUAHC 809/81
Pinça de biópsia, 3 Fr., 28 cmKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha61071ZJ
Dell MonitorDell, Frankfurt am Main, AlemanhaU2412Mb
Bainha de Exame, 9 Fr.KarlStorz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha61029D
Bainha de Exame, 9 Fr.KarlStorz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha61029C
Cabo de Luz de Fibra Óptica, 3,5 mmKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha69495NL
Fluoresceína Azul Sistema de FiltroKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha20100032
Filtro de Barreira de FluoresceínaKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha20100033
PedalKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha20010430
Telescópio HOPKINS, 1,9 mm, Comprimento 10 cmKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha1830231
SCB D-light P Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha20 133720
SCB tricam SL IIKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha20 2230 20
Conjunto de instrumentos de tubulação VETPUMP IIKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha69811
Tricam PDD PALKarl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha20221037
UniVet PortaGroppler Medizintechnik, Deggendorf, AlemanhaBKGM 0451
Vetpump 2Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Alemanha69321620

Referências

  1. Bettenworth, D., et al. Translational 18F-FDG PET/CT imaging to monitor lesion activity in intestinal inflammation. Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 54, 748-755 (2013).
  2. Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Explorar mais artigos

Imagem In VivoModelo de ColiteEndoscopia de FluorescênciaCicatrização de Feridas MucosasInflamação IntestinalCâncer ColorretalBiópsia EndoscópicaTratamento com DSSTraçador Fluorescente