Língua Eletrônica Geração de padrões contínuos reconhecimento para análise de proteínas

Summary

Uma nova abordagem é descrita para a construção de língua eletrônica (eT), o que simplifica muito o projeto e a produção de materiais sensores, e permite que o eT gere perfis de evolução contínua e paisagens para amostras em líquido. O eT obtido é eficiente para análises de proteínas comuns, como discriminação.

Abstract

No protocolo atual, uma abordagem combinatória foi desenvolvida para simplificar o projeto e a produção de materiais sensores para a construção de línguas eletrônicas (eT) para análise de proteínas. Ao misturar um pequeno número de moléculas simples e facilmente acessíveis com diferentes propriedades físico-químicas, usadas como blocos de construção (BBs), em proporções variadas e controladas e permitindo que as misturas se auto-montassem na superfície dourada de um prisma, foi criada uma série de superfícies combinatórias com propriedades apropriadas para detecção de proteínas. Desta forma, um grande número de receptores de reação cruzada pode ser obtido de forma rápida e eficiente. Ao combinar essa matriz de receptores combinatórios de reação cruzada (CoCRRs) com um sistema de detecção óptica, como ressonância plasmônica de superfície (SPRi), o eT obtido pode monitorar os eventos de ligação em tempo real e gerar padrões de reconhecimento contínuo, incluindo perfil de evolução contínua 2D (CEP) e paisagem de evolução contínua 3D (CEL) para amostras em líquido. Esse sistema de ET é eficiente para a discriminação de proteínas purificadas comuns.

Introduction

Métodos de detecção de proteínas precisas e rápidas são muito importantes no diagnóstico e proteômica médicos. Matrizes de detecção de proteínas clássicos, tais como biochips, baseiam-se no princípio do reconhecimento "lock-e-chave" e requerem receptores específicos, tais como anticorpos, aptâmeros, ou miméticos.

Nos últimos anos, o diferencial de sensoriamento inspirado pelo olfato humano e gustação surgiu como uma alternativa ^1. Este nariz / língua eletrônica (EN / ET) abordagem é baseada na ligação dos analitos a uma série de receptores de reação cruzada (CRRs), que não precisam ser altamente específica ou selectiva para as ....

Protocol

1: Preparação de várias soluções e as amostras de proteínas

1. Preparar 100 ml de solução tampão de fosfato (PBS-G), que contém 50 mM de NaH ₂ PO _4, 50 mM de NaCl, e 10% de glicerol a pH 6,8.
2. Preparar 250 ml de solução tampão HEPES contendo 10 mM de HEPES, 150 mM de NaCl, 0,005% de Tween 20 a pH 7,4.
3. Preparar a solução estoque de bloco 1 (BB1) lactose e bloco 2 (BB2) sulfatada lactose (Figura 1) em 0,2 mM em PBS-G.
4. Prepare 1 ml de soluções de proteína em HEPES: Uma lectina raque hypogaea (AHL) a 500 nm, a mioglobina a 1 uM, e lisozima em 500 nM.
5. Preparar 20 ml de SDS a 1% ....

Results

Para investigar a possibilidade de a lingueta electrónica para análise de proteína comum, foram usadas três proteínas: AHL, mioglobina e lisozima. Para cada proteína, um perfil 2D distinta contínua evolução, PEC foi gerado pelo eT, como mostrado na Figura 6.

Além disso, graças à SPRI, que é capaz de controlar os adsorção e dessorção cinética em tempo real, para cada uma proteína padrão de reconhecimento contínuo dependente do tempo, denominado 3D paisagem evolução contínua (.......

Discussion

Os passos mais críticos para a construção deste eT são dedicados a garantir uma boa reprodutibilidade do sistema. Por exemplo, a limpeza da superfície de ouro do prisma com um procedimento normalizado antes da utilização, a adição de 10% de glicerol em onze soluções puras e mistas de BB1 ​​e BB2 para eliminar a evaporação do solvente durante o BBS de auto-montagem em ouro na superfície do prisma, depositando várias repetições para cada [BB1] / ([BB1] + [BB2]) Relação, etc. Tal como para a detecção da prot.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aparelho SPRi	O aparelho Horiba Scientific-GenOptics		SPRi é colocado em uma incubadora com temperatura regulada a 25 ° C.
Incubadora	Memmert
Bomba de seringa	Instrumentos científicos	Cavro XLP 6000
Micro Elite Degasser	Válvula	Alltech AT590507
6 portas	Upchurch Scientific		O volume do loop de injeção usado é de 500 µl.
Limpador de plasma Femto (versão 7)	Sistema de		desgaseificação eletrônico Diener On-line com 2 canais.
Spotter	Siliflow		É um observador piezoelétrico sem contato.
SPRi-Biochip	Horiba Scientific-GenOptics	36000067	O prisma é feito de um prisma de vidro de alto índice de refração revestido com uma fina película de ouro (45 nm) e especialmente desenvolvido para fins de imagem.
Erythrina cristagalli lectina	Sigma-Aldrich	L5390
Arachis hypogaea lectina	Sigma-Aldrich	L0881
Mioglobina	Sigma-Aldrich	M1882
Lisozima	Sigma-Aldrich	L6876
CXCL12α			Fornecido pelo Dr. Hugues Lortat-Jacob; para detalhes de preparação, consulte as informações de suporte na referência 9
CXCL12γ			Fornecido pelo Dr. Hugues Lortat-Jacob; para detalhes de preparação, consulte as informações de apoio na referência 9
Lactose			fornecida pelo Prof. David Bonnaff; para detalhes de preparação, consulte as informações de apoio na referência 9
Lactose			sulfatada fornecida pelo Prof. David Bonnaff; para detalhes de preparação, consulte as informações de apoio na referência 9
Glicerol	Sigma-Aldrich	G5150
SDS	Sigma-Aldrich	L4509
Tween 20	Sigma-Aldrich	274348
HEPES	Sigma-Aldrich	H3375
Fosfato de sódio monobásico	Sigma-Aldrich	S0751
Cloreto de sódio	Sigma-Aldrich	S3014