Infusões artéria carótida para farmacocinéticas e farmacodinâmicas Análise de taxanos em Ratos

Resumo

Este método foi desenvolvido com o objectivo de proporcionar uma solução de fármaco estável através da artéria carótida, para avaliar a farmacocinética de drogas novas em modelos de rato.

Resumo

Ao propor a utilização de um fármaco, a combinação de fármacos, ou a entrega de drogas para um novo sistema, deve-se avaliar a farmacocinética do fármaco no modelo de estudo. Como o uso de modelos do rato são muitas vezes um passo vital para a descoberta de drogas pré-clínica e no desenvolvimento de drogas ^1-8, é necessária a concepção de um sistema para introduzir medicamentos em ratos de uma maneira reprodutível uniforme,. Idealmente, o sistema deve permitir a recolha de amostras de sangue em intervalos regulares ao longo de um período de tempo definido. A capacidade para medir as concentrações de droga por espectrometria de massa, tem permitido aos investigadores seguir as mudanças nos níveis de droga no plasma ao longo do tempo em murganhos individuais ^{1, 9, 10.} Neste estudo, o paclitaxel foi introduzido em ratinhos transgénicos como uma infusão arterial contínua ao longo de três horas, enquanto que as amostras de sangue foram simultaneamente tomadas por hemorragias retro-orbital em momentos set. Infusões artéria carótida são uma alternativa potencial para as infusões de veia jugular, quando factores tais comotumores mamários ou outras obstruções fazer infusões jugular impraticável. Usando esta técnica, as concentrações de paclitaxel no plasma e tecido atingido níveis semelhantes em comparação com a infusão jugular. Neste tutorial, vamos demonstrar como a cateterização da artéria carótida com sucesso através da preparação de um cateter otimizado para o modelo individual do mouse, em seguida, mostrar como inserir e fixar o cateter na artéria carótida de rato, coloque a ponta do cateter para fora através da parte traseira do pescoço do rato, e ligar o rato a uma bomba para entregar uma velocidade controlada de influxo de drogas. Várias sangramentos retro-orbital de baixo volume para permitir a análise de concentrações de droga no plasma ao longo do tempo.

Introdução

A infusão da droga através da carótida pode ser realizada de forma fiável e reprodutível pelo equipamento e técnica de optimização. O procedimento não é complicado, embora exija um bom controle e atenção aos detalhes. Superior cuidado e habilidade são necessários para isolar a artéria carótida e inserir o cateter, o qual pode, geralmente, ser adquirido através da prática. Cirurgia por um técnico experiente não deve exceder uma hora. Após a cirurgia bem sucedida, o rato deve aparecer normal e saudável (embora o rato pode reagir com a infusão da droga real), e fármaco (s) podem ser administrados em uma dosagem uniforme e contínua controlada. As amostras de sangue devem....

Protocolo

Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de Cancer Center, Animal Care Institucional e Uso do Fox Chase e pelo Biotério, e encontrado para estar em conformidade com as diretrizes institucionais para o tratamento humano dos animais.

1. Preliminar Preparação

1. Preparação do cateter: Preparar um cateter a partir de um curto comprimento de tubagem de polietileno, modificado para formar um diluído, ponta furada (Figura 3A). Faça várias cateteres com antecedência e salvar indefinidamente.
   1. Acender um bico de Bunsen, e ajustar para estabelecer uma chama baixa constante. Segure tubulação perto de chama para amolec....

Resultados

O paclitaxel distribuição segue padrões previsíveis durante um regime de dosagem de 3 h de uma infusão de 15 minutos de alta velocidade, seguido de uma infusão de 165 minutos a baixa velocidade.

A Figura 1 mostra uma comparação entre a infusão venosa concentrações de paclitaxel plasma jugular e da artéria carótida-infusões. As concentrações de paclitaxel cair rapidamente nos primeiros 15 minutos após a infusão inicial de alto volume, e depois se estabilizar ao longo do próxi.......

Discussão

Infusão da artéria carótida é uma técnica importante neste estudo de farmacocinética de paclitaxel. Perfusão da artéria carótida é um método para distribuir rapidamente drogas em todo o sistema circulatório ^14. A infusão hr 3 é um mímico mais perto de administração clínica de drogas, como taxanos do que injeções em bolus. A cirurgia pode ser realizada de forma fiável por um único indivíduo, o tempo de cirurgia é relativamente curto, e as taxas de sucesso são> 75%. Após as amostras são coletadas, elas devem.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubulação de polietileno 0,024" OD X 0,011 " IDENTIFICAÇÃO	Braintree Scientific, Inc.	PE10
3 agulhas cegas (calibre 30)	Braintree Scientific, Inc.	NB-30
(calibre 28)	Braintree Scientific, Inc.	PP-28	Ligeiramente maior que a identificação da tubulação PE, para se encaixar perfeitamente e manter uma vedação firme.
2 plugues de conector de aço inoxidável (calibre 30)	Braintree Scientific, Inc.	C-30
Três seringas de 1 cc	Becton, Dickinson e Co.
Solução salina estéril a 0,9%	Hospira	0409-7984-37
Cath-Loc HGS Heparina/Glycerol Solution	Braintree Scientific, Inc.	HGS
	Braintree Scientific, Inc.	SUT-S  113
Tesoura Vanna (micro-tesoura)	World Precision Instruments	14122	Este modelo tem uma ponta curva, mas tesouras de ponta reta também funcionam.
Fórceps Hemostático Hartman Mesquito	World Precision Instruments	501705
Betadine Swabsticks	Perdue Products L.P.	BSWS1S
Bupivacaína	Hospira	0409-1160-01	Pode ser substituído por lidocaína ou anestesia local semelhante.
Paclitaxel	LC Laboratories	P-9600
Metanol	Sigma-Aldrich	32213
Micro-Tubos Capilares de Hematócrito, Heparinizado	Fisher Scientific	22-362-566
Micro Tubo Capilar Selante	Fisher Scientific	02-678
C57BL/6J camundongos	Fox Chase Cancer Center, Laboratório Animal Facility em-house-bred
API 4000 Q-Trap espetrômetro em massa Applied	Biosystems

Plugue de porta de aço inoxidável 309659Sutura de seda