Modelos animais de doença pediátrica pode experimentar início precoce e progressão da doença agressiva. Clinicamente entrega terapia relevantes para jovens modelos de mouse pode ser tecnicamente difícil. Este protocolo descreve um método de injecção intravenosa não-invasiva para a ratinhos recém-nascidos nos dois primeiros dias pós-natais de vida.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Injeções intravenosas em Neonatal Ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
A injeção intravenosa é uma forma clinicamente aplicável para entregar terapêutica. Para roedores adultos e animais maiores, injeções intravenosas são tecnicamente viáveis e de rotina. No entanto, alguns modelos de mouse pode ter início precoce da doença com uma progressão rápida que torna a administração de terapias potenciais difícil. A veia temporal (ou facial) é apenas anterior ao botão da orelha em ratinhos e é claramente visível para os dois primeiros dias após o nascimento em cada lado da cabeça, usando um microscópio de dissecação. Durante esta janela, a veia temporal, podem ser injectados com volumes de até 50 ul. A injecção é seguro e bem tolerado por ambas as crias e as barragens. Um procedimento típico de injecção está concluída dentro de 1-2 min, após o que o filhote é devolvida à gaiola de origem. No terceiro dia pós-natal a veia é difícil de visualizar e do procedimento de injeção se torna tecnicamente confiável. Esta técnica tem sido utilizada para a entrega de vírus adeno-associado (AAV) vectors, que por sua vez pode fornecer quase todo o corpo, a expressão do transgene estável durante a vida do animal, dependendo do serotipo viral escolhido.
Introdução
A entrega de agentes terapêuticos ao sistema nervoso central (SNC) em modelos murinos de doença pediátrica continua a ser um desafio. Ratos que modelo estados de doença recém-nascidos são subdimensionados e developmentally imaturo, e, portanto, pode ser difícil de injectar directamente nas estruturas apropriadas dentro do SNC. Injeção intravascular de agentes terapêuticos é um método não-invasivo, bem tolerado para entregar células, drogas ou vetores virais para todo o corpo, incluindo o SNC 1-5 e 3,5-9 retina. Publicações anteriores descrevem injeção veia rosto temporal, utilizando um transiluminador 10,11, sem um microscópio de diss....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Todos os procedimentos listados no protocolo foram aprovados Instituto para uso animal e comissão Care (IACUC) da Universidade Estadual de Ohio.
1. Preparação da área de trabalho
- Reunir gelo triturado, para anestesiar os filhotes de rato, uma gaiola vazia para segregar a represa da ninhada, um microscópio de dissecação, uma fonte de luz que pode ser posicionado a um ângulo em relação à injecção (utilização de uma fonte de luz em um 90 ° ângulo em relação ao local da injecção obscurece a veia), uma superfície limpa para colocar o animal para a injecção, cotonetes, 3/10 cc seringa de insulina com 3/8 "de 30 L de....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Durante uma injecção adequada, a veia deve momentaneamente virar clara, ou branquear. Se injetar tingir todo o filhote deve ficar azul em segundos. Se uma injecção indevida tenha ocorrido, há muitas vezes um bolus subcutâneo concentrada na cabeça ou pescoço e injectant pode verter para fora do local de injecção. Injecções impróprios também pode resultar no aparecimento de nódoas negras em torno da garganta. Os filhotes que recebem injeções subcutâneas (ou seja, a injeção não foi totalmente entregue na veia) ger.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
A entrega intravascular de agentes para o SNC ou por todo o corpo é difícil em modelos murinos de doença neonatal. O protocolo descrito é uma maneira rápida, relativamente não-invasivo para administrar por via intravenosa soluções em camundongos neonatal com requisitos mínimos de equipamento. Embora a cara veia temporal, podem ser vistos a olho nu, as injecções podem ter maior precisão com o uso do microscópio e fonte luminosa de fibra óptica, especialmente para um injector sem prática. Injeções intravenosas em ratos re.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores gostariam de reconhecer o NINDS, FightSMA e Famílias de SMA para apoio financeiro. SEGL é suportado por formação NINDS concessão # 5T32NS077984-02.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Seringa de insulina | Thinpro Terumo | SS30M3009 | 3/10 cc, agulha de 3/8", 30 G, 1 por camundongo |
| Corante azul Evans | Sigma-Aldrich | E2129 | Diluir a 1% com 1x Aplicadores de Algodão Salino Tampolado com Fosfato |
| microscópio |
Referências
- Foust, K. D., et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes. Nature. 27, 59-65 (2009).
- Dominguez, E., et al. Intravenous scAAV9 delivery of a codon-optimized SMN1 sequence rescues SMA mice. ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
