Os ratos de algodão são extremamente excitáveis e têm uma forte resposta de fuga ou luta. Um método de manejo otimizado para reduzir o estresse dos animais é descrito, o que tornará os ratos de algodão mais acessíveis como um modelo pré-clínico.
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Artigo de método
Manuseio do Rato Cotton em Estudos para a avaliação pré-clínica de Vírus Oncolíticos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os vírus oncolíticos são uma nova terapia anticancerígena com a capacidade de atingir as células tumorais, deixando as células saudáveis intactas. Para que essa estratégia seja bem-sucedida, estudos recentes mostraram que o envolvimento do sistema imunológico do hospedeiro é essencial. Portanto, a viroterapia oncolítica deve ser avaliada no contexto de um modelo imunocompetente. Além disso, o estudo de terapias antitumorais em modelos animais tolerados pode recapitular melhor os resultados observados em ensaios clínicos. Os ratos de algodão, comumente usados para estudar vírus respiratórios, são um modelo atraente para estudar a viroterapia oncolítica, pois os modelos singênicos de carcinoma mamário e osteossarcoma estão bem estabelecidos. No entanto, há uma falta de informações publicadas sobre o procedimento de manuseio adequado para esses roedores altamente excitáveis. A abordagem de manuseio e captura descrita minimiza o estresse animal para facilitar a experimentação. Essa técnica depende da capacidade do pesquisador de manter a calma durante o manuseio e realizar os procedimentos em tempo hábil. Finalmente, descrevemos como preparar células tumorais mamárias de rato de algodão para a formação consistente de tumores subcutâneos e como realizar injeções intratumorais e intraperitoneais. Esses métodos podem ser aplicados a uma ampla gama de estudos que promovem o desenvolvimento do rato do algodão como um modelo pré-clínico relevante para estudar a terapia antitumoral.
Introdução
Vírus Oncolíticos (OV) replicar selectivamente em células tumorais, explorando as diferenças bioquímicas entre células normais e tumorais 1,2. Existem dois tipos de VOs: aqueles que não necessitam de uma mutação para alcançar oncólise selectiva, referido como ocorrendo naturalmente vírus do tipo selvagem e as que devem ser modificadas para alcançar oncólise selectiva. A recolha de mutações dentro de um determinado tipo de tumor que determina a natureza da vantagem de crescimento selectivo sobre as células normais de um OV 2. A segurança e benefício de utilizar VOs foi demonstrada em ensaios clínicos 3-7. Apesar dos avanços no campo da....
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Protocolo
NOTA: Os protocolos utilizados foram aprovados pelo nosso Conselho de Ética de Pesquisa animal institucional da Universidade McMaster, de acordo com a Canadian Council on orientações de cuidados Animal. Os experimentos foram realizados nas instalações de McMaster University animal Central.
1. A cultura LCRT Cells
- Cultura de células LCRT em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS), 2 mM de L-glutamina, 100 U / ml de penicilina e 100 ug / ml de estreptomicina. Manter as células em frascos T-150 de cultura de tecidos a 37 ° C e 5% de CO 2. Células de passagem qu....
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Resultados
Devido à natureza extremamente excitável de ratos do algodão, sendo familiarizados com e utilizando processos optimizados para reduzir a tensão dos animais vai facilitar a sua utilização como um modelo animal de pré-clínico. O uso de técnicas de manejo adequadas também vai minimizar os riscos para o pesquisador.
Ao usar ratos do algodão é imperativo para manter a calma. Os ratos são altamente excitáveis e tentará escapar de sua gaiola. A utilização de um tubo de enriquecimento e nestlets m.......
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Discussão
Os ratos de algodão são altamente excitáveis e têm uma forte resposta de vôo. Portanto, cuidados especiais devem ser tomados para minimizar qualquer estresse indevido no animal. A configuração da gaiola descrita permitirá a captura segura e fácil dos animais, sendo a colocação do tubo de enriquecimento de extrema importância. Ao montar gaiolas, certifique-se de que os tubos de enriquecimento atendam aos requisitos de tamanho e forma e sejam colocados na orientação adequada na gaiola. Também é importante garantir que todo.......
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Divulgações
Os autores reconhecem que não há conflitos de interesse financeiros relacionados a esta pesquisa.
Agradecimentos
Breanne Cuddington é bolsista da Canadian Breast Cancer Foundation. Este trabalho foi patrocinado por subsídios operacionais da Cancer Research Society e do Canadian Cancer Society Research Institute (anteriormente Canadian Breast Cancer Research Alliance). Agradecemos a Ann Tollefson (Escola de Medicina da Universidade de Saint Louis) pelas células LCRT e à Dra. Kathleen Delaney e Marion Corrick pela assistência técnica com alojamento e sedação de ratos de algodão.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s Águia modificada' s médio | Gibco | 11965-092 | Pode usar qualquer marca |
| 1X Solução salina tamponada com fosfato | Pode preparar em laboratório, filtrar para esterilizar | ||
| 200 mM L-glutamina | Gibco | 25030164 | Pode usar qualquer marca |
| 100x Antibiótico-Antimicótico | Gibco | 15240-062 | Pode usar qualquer marca |
| de soro fetal bovino | Quality Biological Inc. | 110-001-101HI | Pode usar qualquer |
| marca T-150cm2 | de cultura de tecidos Fisher Scientific | 14-826-80 | Pode usar qualquer marca |
| 1X TypLE Express | Life Technologies | 12604-013 | |
| Placa de cultura de células de 12 poços, fundo plano | Fisher Scientific | 08-772-29 | Pode usar qualquer marca, deve ser tratado com cultura de tecidos |
| alamarBlue | Life Technologies | DAL1025 | Pode usar um reagente alternativo para determinação da viabilidade celular |
| 8640 Teklad 22/5 Dieta para roedores | Harlan | 8640 | |
| 1/8" espiga de milho cama para roedores | Harlan | 7092 | |
| Nestlets | Ancare-Feito | de fibra de algodão virgem descascado, sem poeira e autoclavável | |
| Tubos cônicos de 50 mL | Fisher Scientific | 14-432-22 | Pode usar qualquer marca, deve ser estéril |
| Isoflurano USP, 99,9%, anestésico inalatório | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| 70% Etanol | Pode preparar em laboratório | ||
| 10% Formalina Tamponada Neutra | Sigma-Aldrich | HT501128 | Pode usar qualquer marca |
| NAPCO NapFlow 1200 Classe II A/B3 Biossegurança Microbiological Safety Cabinet (capuz de cultura de células) | NAPCO | usado não disponível atualmente | Pode usar qualquer marca |
| Thermo Fisher Scientific Precision Banho de Água Aquecido | Fisher Modelo científico | usado não disponível no momento | Pode usar qualquer marca |
| [header] | |||
| Reichert Bright-line Hemacytometer | Sigma-Aldrich | Z359629 | Pode usar qualquer marca |
| Typhoon Trio BioAnalyzer | GE Healthcare Life Sciences | Modelo usado não disponível no momento | Pode usar qualquer leitor de placa de fluorescência |
| Tecan Safire2 Leitor de Microplacas Multi-detecção | Modelo Tecan | usado não disponível no momento | Pode usar qualquer leitor de placa de fluorescência |
| Centrífuga de bancada Allegra 6R | Beckman Coulter | 366816 | Pode usar qualquer |
| marca Máquina de anestesia de mesa | Modelo | usado não disponível no momento | Pode usar qualquer marca, deve ser portátil |
| Mini Cortadores de Amendoim Wahl | Wahl | Pode usar qualquer marca de pequenos cortadores | |
| Seringas de insulina 29 G x 1/2', 0.3 mL | BD | 329464 | Pode usar qualquer marca. As seringas de insulina são recomendadas, pois facilitam as injeções através do rato' s pele dura. |
| Cotonetes | MedPro | 018-425 | Pode usar qualquer marca |
| Tesoura de dissecação de ponta afiada | Fisher Scientific | 8940 | Pode usar qualquer marca |
| Pinça de tecido de dissecação | Fisher Scientific | 13-812-41 | Pode usar qualquer marca |
Referências
- Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. Oncolytic virotherapy. Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).
- Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. Oncolytic viruses in cancer therapy. Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).
- Abril, C., et al.
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Reimpressões e permissões
