Axotomia do nervo facial em ratos: um modelo para estudo de resposta motoneuron para Injury

Resumo

Apresentamos um protocolo cirúrgico detalhando como realizar uma axotomia de corte ou esmagamento no nervo facial do camundongo. A axotomia do nervo facial pode ser empregada para estudar a resposta fisiológica à lesão nervosa e testar técnicas terapêuticas.

Resumo

O objetivo deste protocolo cirúrgico é expor o nervo facial, que inerva a musculatura facial, em sua saída do forame estilomastóideo e cortar ou esmagá-lo para induzir lesões de nervos periféricos. As vantagens desta cirurgia são sua simplicidade, alta reprodutibilidade, bem como a falta de efeito sobre as funções vitais ou mobilidade da conseqüente paralisia facial, resultando assim em um resultado cirúrgico relativamente leves em comparação com outros modelos de lesão do nervo. Uma importante vantagem da utilização de um modelo de lesão de nervo craniano é que os motoneurónios residir numa população relativamente homogénea no núcleo motor facial na ponte, simplificar o estudo dos corpos celulares de motoneurónios. Devido à natureza simétrica da inervação do nervo facial e a ausência de interferência entre os núcleos motores faciais, a operação pode ser realizada de forma uni com o lado unaxotomized servindo como um controlo interno emparelhado. Uma variedade de análises pode ser realizada no pós-operatório para avaliaré a resposta fisiológica, cujos detalhes estão fora do escopo deste artigo. Por exemplo, a recuperação da função muscular pode servir como um marcador para Reinervação comportamental, ou os neurónios motores podem ser quantificados para medir a sobrevivência das células. Além disso, os neurónios motores podem ser capturadas com precisão usando microdissecação laser para análise molecular. Porque a axotomia do nervo facial é minimamente invasiva e bem tolerada, pode ser utilizada numa ampla variedade de ratinhos geneticamente modificados. Além disso, este modelo de cirurgia pode ser utilizado para analisar a eficácia dos tratamentos de lesão do nervo periférico. A lesão do nervo facial proporciona um meio para investigar não apenas neurónios motores, mas também as respostas do microambiente central e periférica da glia, o sistema imunológico, e musculatura alvo. O modelo de lesão do nervo facial é um modelo de lesão de nervo periférico amplamente aceite que serve como uma ferramenta poderosa para o estudo da lesão e da regeneração do nervo.

Introdução

Existem muitos modelos de lesão de nervos periféricos, mas uma que se destaca para o estudo da motoneurons é o modelo de axotomia do nervo facial. O nervo facial, também conhecido como nervo craniano VII, se origina na ponte e inerva os músculos da expressão facial ^1,2. Neste protocolo cirúrgico, o nervo facial é exposto na sua saída do forame estilomastóideo e cortados ou triturados. A gravidade da lesão do nervo pode ser classificado de acordo com as Sunderland ³ classificações, o que diferencia o prejuízo com base na intactness do axônios, endoneuro, perineuro e epineuro, que são camadas de tecido conjuntivo que sequencialmente envolver em to....

Protocolo

Todos os procedimentos executados são aprovados pela Escola de Medicina da Institutional Animal Care e do Comitê Use Universidade de Indiana e siga Instituto Nacional de diretrizes de saúde.

1. Técnica Cirúrgica

1. Manter a técnica asséptica durante esse procedimento usando luvas estéreis, instrumentos e um campo cirúrgico estéril acordo com as diretrizes do NIH ^25. Esterilizar ferramentas antes de iniciar a cirurgia por autoclavagem-los (ver Tabela de Specific Reagentes / Equipamentos para a lista completa). Use um esterilizador de contas de vidro para esterilizar instrumentos durante a operação.
....

Resultados

Após a axotomia do nervo facial é realizada, perda de motoneurónios ocorre como um resultado da lesão. Sobrevivência motoneuron após a lesão depende de muitas variáveis, como sexo, idade do animal no momento da cirurgia, e o ponto de tempo em que as contagens de neurónios motores são feitas, eo Moran e Graeber avaliação ²⁴ e Jinno e Yamada avaliação ²² tanto resumir dados de sobrevivência motoneuron. Normalmente, cerca de 86% dos neurónios motores sobreviver aos 28 dias pós-axotomia ^{14,15,26.<.......}

Discussão

A etapa crítica para este protocolo é posicionar o mouse corretamente antes do início da cirurgia. Se o mouse não estiver deitado de lado, a orelha não estiver presa no ângulo correto ou a incisão for feita em um local incorreto, encontrar o nervo facial se tornará muito mais difícil. Quando essa técnica é dominada, as cirurgias levam apenas alguns minutos por camundongo.

Suturas, cola ou clipes de ferida podem ser usados para fechar a ferida. Os clipes de ferida são preferidos devido ao pequ.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Microscópio estéreo	Leica	M60
Fita de rotulagem	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tü tesoura de mola bingen - reta/afiada/8,5 cm/5 mm de ponta	Ferramentas de Ciência Fina	15003-08	Esterilizar antes de usar
Pinça Dumont #5/45 - pontas padrão/angular 45°/Dumoxel/11 cm	Ferramentas de Ciência Fina	11251-35	Esterilizar antes de usar
Clipes de sutura Michel - 7,5 mm x 1,75 mm	Ferramentas de Ciência Fina	12040-01	Descrito como "clipe de ferida" no protocolo, esterilizar antes de usar
o aplicador de clipe de ferida de ação cruzada Hagenbarth 5 "	George Tiemann & Co	160-910	Usado para aplicar clipe de ferida, esterilizar antes de usar
Aplicador e removedor de clipe de sutura Michel - Para clipes de 7,5 mm	Fine Science Tools	12029-12	Usado para remover clipe de ferida
0,9% Injeção de cloreto de sódio, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 onças, com dispensador	Fisher Scientific	19-027132
70% Etanol
Esterilizador

de esferas de vidro