Desenvolvemos um novo modelo ex vivo para estudar a acção da hormona no peito humano. Baseia-se em microestruturas dos tecidos isolados de amostras de tecidos mamários cirúrgicos que preservam a arquitetura do tecido, as interações intercelulares, e sinalização parácrina.
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Resumo
Resumo
O estudo da ação do hormônio no peito humano tem sido dificultada pela falta de sistemas de modelos adequados. Após a cultura in vitro, células epiteliais mamárias primários tendem a perder a expressão de receptores hormonais. Amplamente receptores hormonais linhas celulares de cancro da mama positivo utilizados são de limitada relevância para a situação in vivo. Aqui, descrevemos um modelo ex vivo para estudar a ação hormonal no peito humano. Amostras frescas de tecido da mama humano a partir de material de descarte cirúrgico, tais como mamoplastias de redução ou mammectomies são mecanicamente e enzimaticamente digerido para obter fragmentos de tecido contendo ductos e lóbulos e vários tipos de células do estroma. Estes micro-estruturas dos tecidos conservados em meio basal sem fatores de crescimento preservar seus contatos intercelulares, a arquitetura do tecido, e permanecem hormônio que responde por vários dias. Eles são processados prontamente para RNA e extração de proteínas, análise histológica ou armazenados em meio de congelamento. Fluorescênciaseparação de células activadas (FACS) pode ser usado para o enriquecimento em populações de células específicas. Este protocolo fornece uma abordagem simples, padrão para estudos translacionais com alta complexidade, amostras humanas variadas.
Introdução
Informações sobre a paisagem mutacional no câncer de mama está aumentando em ritmo acelerado. Menos atenção tem sido dada a fatores sistêmicos que influenciam o desenvolvimento do câncer de mama. A exposição a hormônios reprodutivos tem um grande impacto na progressão da doença 1-3. No entanto, os mecanismos pelos quais as hormonas reprodutivas embatem na mama humano são mal compreendidos. Trabalho com modelos de engenharia genética do rato revelou que envolvem células sinalização intrínseca e paracrine por vários efectores a jusante 4.
O conhecimento limitado sobre ação do hormônio no peito humano é largamente atrib....
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Protocolo
Considerações gerais: antes do tempo, o estabelecimento de um protocolo de ética, preparar questionários para os pacientes, e ver a formação do pessoal clínico. Antes de usar o material de cirurgia mamoplastia de redução, obter autorizações, e assegurar o consentimento do paciente. Tecido podem ser infecciosos e precisa de ser tratadas em conformidade. Este protocolo foi aprovado pelo comitê de ética do ISREC - Instituto Suíço de Experimental Cancer Research.
1. Tissue Recovery, Processamento e Bio-banking
Para garantir a qualidade da amostra ideal para o bio-banking, uma série de passos são realizados no hospit....
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Resultados
Para estudar o papel dos estrogênios e progesterona e compreender melhor suas funções moleculares no peito humano, coletamos amostras de tecido fresco de mama humano de pacientes submetidos a mamoplastias de redução (Figura 1), após aprovação do consentimento informado. Nós também obter história médica e reprodutiva do paciente, bem como uma amostra de sangue para determinar os níveis de progesterona no soro no momento da cirurgia. Tecido de mamoplastias de redução frescos é mecanicamente e enzimaticame.......
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Discussão
A cultura ex vivo descrito aqui fornece microestruturas dos tecidos mamários contendo ductos e lóbulos intactos, juntamente com outros tipos de células encontradas normalmente no peito fêmea humana. No processamento do tecido da mama humana obtidos geralmente de mamoplastias de redução, a remoção de tecido adiposo, a digestão enzimática e mecânica da matriz estromal, e a lise de células vermelhas do sangue enriquece para fragmentos de condutas de leite e unidades lobulares ductais terminais. Digestão enzimática.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores agradecem M. Fiche do Hospital Universitário de Lausanne para fornecer a fotografia mamoplastia, M. Wirth e A. Ayyanan do Swiss Institute for Cancer Research Experimental, Centro Nacional de Competência em Pesquisa de Oncologia Molecular, Faculdade de Ciências da Vida, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne para a assistência técnica e R. Clarke, da Universidade de Manchester para comentários críticos. A investigação conducente a estes resultados foi recebido apoio de SNF3100A0-112090, Oncosuisse 531.817, eo Innovative Medicines Initiative empresa comum ao abrigo do contrato de concessão não. 115.188, recursos de que são compostas de contribuição finance....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Centrífuga de Microlitros | Heraeus Biofuge Fresco | 75005521 | |
| Centrifuge 5810R | Eppendorf | 5810 000.327 | |
| Cryobox | Nalgene | 5100-0001 | |
| Congelador de Taxa Controlada EF600 Grant | Asymptote | EF600 | |
| Incubadora CO2 | Hera Cell Heraeus | 51022391 | |
| Misturador de Rolos SRT9D | Sturt | SRT9D | |
| de Histologia | Medizintechnik | 81-0021-00 | |
| Cell Strainer | Falcon | 352340 | |
| Lâmina Cirúrgica Strile | Aesculap | BB536 | |
| Bisturi | Aesculap | BB084R | |
| Fórceps | Aesculap | BD047R | |
| Tesoura | Aesculap | BC374R | |
| Base de parafina molde | SAKURA | 4166 | |
| Temperatura Ótima de Corte (OCT) Cryomatrix | Thermoscientific | 6769006 | |
| Penicilina/Estreptomicina | Life Technologies | 15070-063 | |
| Antibiótico/Antimicótico | Life Technologies | 15240-062 | |
| DMEM F/12 | Life Technologies | 11039-021 | Pré-aquecimento (37 ° C) |
| Colagenase | Roche | 11 088 793 001 | Pré-aquecimento (37 ° C) |
| Soro bovino fetal | Life Technologies | 10270 | pode ser substituído por |
| tampão de lise de sangue de células | Sigma | R7757 | |
| Dimetilsulfóxido (DMSO) | Sigma | D2650 | |
| Tripsina-EDTA | Life Technologies | 15400-054 | |
| Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| Formaldeído | Sigma | F1635 | |
| Paraformaldeído | Roth | 335 | |
| Isopentano | Sigma | M32631 | |
| Etanol | Merck | 1009831000 | |
| Frascos criogênicos (5,0 ml) | VWR, International | 479-0820 | |
| Placa de cultura de fixação ultrabaixa | Corning, NY 14831 | 3471 |
Referências
- Beral, V. Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study. Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).
- MacMahon, B., et al. Age at first birth and breast cancer risk. Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).
- Pike, M. C., Krail....
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Reimpressões e permissões
Errata
Formal Correction: Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast
Posted by JoVE Editors on 2/01/2015. Citeable Link.
A correction was made to An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast. There was an error with the author, Marie Shamsheddin's, name. The author's name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin
