Introduction
Den klinisk relevant, mock katarakt kirurgi, blev ex vivo epitel sårheling model her beskrevne udviklet til at tilvejebringe et værktøj til undersøgelse af de mekanismer, der regulerer reparation af epitelvæv som reaktion på en skade. Vigtige funktioner, der blev rettet til at skabe denne model medfølger 1) giver betingelser, der nøje replikerede in vivo respons på såret i en kultur indstilling, 2) lette modulere de regulatoriske elementer af reparation, og 3) evne til at afbilde reparationsprocessen, i sin helhed, i realtid. Udfordringen var derfor at skabe en kultur model, hvor det var muligt at studere og manipulere, epithelial sårheling i cellernes native mikromiljø. Tilgængeligheden af dette sår-reparation model åbner nye muligheder for at identificere de endogene signalsystemer tidskoder fra matrix proteiner, cytokiner og kemokiner, der regulerer reparationsprocessen. Derudover modellen er ideel til at undersøge, hvordan enn epitel er i stand til at bevæge sig som en kollektiv ark til at re-epithelialize sårområdet 2,3, og til bestemmelse af afstamning af mesenkymale leder celler ved sårkanten der fungerer i dirigere den kollektive migration af de sårede epitel 4. Denne model giver også en platform med til at identificere lægemidler, der kunne fremme effektiv sårheling og forhindre afvigende sårreparation 5.
Der findes allerede en række af tilgængelige sår-reparation-modeller, både i kultur og in vivo, der har givet det meste af, hvad der er kendt om såret reparationsprocessen i dag. I animalske skade modeller, såsom hornhinden 6-12 og hud 13-17, er der mulighed for at studere svaret af vævet til at såre i forbindelse med alle de reparationer mæglere, der kunne være involveret i processen, herunder bidrag fra vaskulatur og nervesystemet. Der er imidlertid begrænsninger for at manipulere erfamentale tilstande in vivo, og det er endnu ikke muligt at foretage billeddannelse undersøgelser af reparationen respons in vivo, kontinuerligt. I modsætning hertil er de fleste in vitro sår-reparation kultur modeller, såsom bunden sår, kan nemt manipuleres og fulgt over tid, men mangler den miljømæssige kontekst studere sårheling i in vivo væv. Mens ex vivo modeller tilbyder fordelen af at studere den skade reparationsprocessen kontinuerligt over tid i forbindelse med cellernes mikromiljø kombineret med evnen til at modulere de molekylære regulatorer af reparation på ethvert tidspunkt i processen, er der få modeller, som passer disse parametre.
Her beskrives en fremgangsmåde til at generere meget reproducerbar ex vivo epitel sårheling kulturer, der gengiver et epitelvæv reaktion på et fysiologisk sårdannelse. Brug af chick embryo linse som en vævskilde, en ex vivo mock katarakt kirurgi udføres. Linsen er en ideel væv til brug for disse undersøgelser, da det er selvstændig inden for en tyk basalmembran kapsel, avaskulær ikke innerverede, og fri for alle tilknyttede stroma 18,19. I den menneskelige sygdom, katarakt kirurgi adresser synstab på grund opacifikation af linsen og involverer fjernelse af linsen fiber cellemasse, som omfatter størstedelen af linsen. Efter kataraktoperation vision genoprettes gennem indsættelse af en kunstig intraokulær linse. Grå stær kirurgi procedure gennem fjernelse af fiberceller, inducerer en skade respons i den tilstødende linse epitel, som reagerer ved reepitelisering af den bageste område af linsekapslen, der var blevet besat af fiberceller. I kataraktoperation, som i de fleste sår reparation reaktioner, der sommetider opstår en afvigende fibrotisk udfald af sårheling respons, der er forbundet med fremkomsten af myofibroblaster, som i linsen er kendt som Posterior Capsule opacifikation 20-22. For at generere kataraktoperation sårheling model er en katarakt kirurgi procedure efterlignes in linser fjernet fra chick embryo øjet til frembringelse af en fysiologisk skade. Mikrokirurgiske fjernelse af linsen fiber celler resulterer i en meget konsekvent cirkulært sår område omgivet af linse-epitelceller. Denne celle population forbliver solidt fastgjort til linsen basalmembran kapsel og såret af den kirurgiske procedure. Epitelcellerne migrerer på det blottede område af det endogene basalmembran at helbrede såret, ledet af en population af vimentin-rige mesenchymal-celler er kendt inden for reparationsprocessen som leder celler 1. Med denne model respons et epithel skade kan let visualiseres og fulgt med tiden i forbindelse med cellernes mikromiljø. Cellerne er let tilgængelige for modifikationer af ekspression eller aktivering af molekyler forventes at spille en rolle i sårheling. En kraftig funktion i ther model er evnen til at isolere og studere migration-specifikke ændringer i forbindelse med sårheling. Evnen til at fremstille store antal af alderen matchede ex vivo sårheling kulturer til undersøgelser er en anden fordel ved denne model. Således er denne model system giver en unik mulighed for at drille hinanden mekanismer sårheling og test terapi for deres effekt på sårheling proces. Ex vivo mock kataraktoperation model forventes at have bred anvendelighed, hvilket giver en kritisk ressource for at studere mekanismer skade reparation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende protokol overholder Thomas Jefferson University Institutional Animal Care og brug Udvalg retningslinjer, og med ARVO Statement for brug af dyr i Vision Research.
1. Opsætning og Udarbejdelse af objektiver til Ex Vivo Wound Kultur
- Placere tre 100 mm petriskåle i en steril, laminar flow hætte. Fylde to af de petriskåle halvvejs med Tris / Dextrose puffer (TD buffer; 140 mM NaCI, 5 mM KCI, 0,7 mM Na 2 PO 4, 5 mM D-glucose, 8,25 mM Tris Base, pH til 7,4 med HCI) ved stuetemperatur og efterlod tredje tom. Pre-varme dyrkningsmedier (Media 199 suppleret med 1% L-glutamin og 1% penicillin / streptomycin) til 37 ° C.
Bemærk: standard sårhelende dyrkningsmedier er serum-fri, som forekommer in vivo; Imidlertid kan de sår-reparation kulturer dyrkes med succes i definerede medier betingelser, der omfatter serum eller andre faktorer. - Fjern frugtbare embryonale day 15 hvid Livorno chick æg fra inkubator (afholdt på 37,7 ° C med blid vuggen)
- Placere udvalgte æg i laminar flow hætte og ren uden for skallen med 70% ethanol fra en vaskeflaske. Udføre alle nedenstående procedurer under aseptiske forhold i laminar flow hætte, hjælp sterile opløsninger og instrumenter.
- Crack æg og placere indholdet ind i det tomme 100 mm petriskål. Halshugge embryo anvendelse af standard pincet og fine sakse. Placer chick embryo hovedet i en petriskål indeholdende TD buffer og korrekt bortskaffelse af den resterende del af embryo. Eventuelt holde hønseembryo hoveder i TD puffer i en kort periode, ikke længere end 15 min.
- Placer chick embryo hoved på en petriskål låg. Ved hjælp af høj præcision pincet, fjern objektivet sammen med sin vedhæftet glaslegemet fra øjet i følgende rækkefølge. Klem bagsiden af øjet med pincet for at skabe en lille åbning i den bageste del af øjet.
- Derefter tage fat i glaslegemet wed pincet og forsigtigt slæbebåd på glaslegemet med en rullende bevægelse, vil glaslegemet med linsen vedhæftet blive løsnet fra øjet. Sted linse / glaslegemet i de resterende petriskål indeholdende TD buffer. Lad linserne til at forblive i TD buffer i højst 30 minutter.
- Flyt linsen til en ny petriskål låg under et dissektionsmikroskop. Fra dette tidspunkt udføre alle trin under et dissektionsmikroskop. Med høj præcision pincet forsigtigt børste væk enhver corpus ciliare (pigmenterede celler), der blev løsnet med objektivet ved hjælp kanten af pincet, idet forsigtighed for ikke at beskadige linsen væv.
Bemærk: Fjernelse af corpus ciliare sikrer, at celletyper, der ikke er endogent for linsen ikke er inkluderet i sårheling kultur. - Adskil linsen fra glaslegemet med høj præcision pincet ved at klemme ud glaslegemet fra dets association med den posteriore linsekapsel.
- Ved hjælp af høj præcision pincet overføre linsen ind i en lille dråbeTD puffer (ca. 200 pi) i et 35 mm vævskulturskål.
2. Udførelse Mock Cataract Surgery
- Orientere linsen i dråbe TD buffer i 35 mm skål med den forreste del af linsen opad.
Bemærk: forreste af linsen er let identificeres ved tilstedeværelsen af en tæt ring i væv, der noterer grænsen mellem det forreste og ækvatoriale region af linsen epitel. I modsætning hertil er et fravær af mærkning bageste af linsekapsel, hvortil linsen fiberceller er fastgjort. - Anvendelse af to høj præcision pincet lave et lille snit (ca. 850μm) i midten af den forreste linsekapsel, den tykke basalmembran, der omgiver linsen væv, og dens tilhørende forreste linse epitel, ved at gribe vævet med en pincet i hver hånd og blidt trækker i modsatte retninger.
- Fjerne fiber cellemasse, som udgør størstedelen af linsen væv, dislodging den fra dens bilag til linsen epitel og omkringliggende linsekapsel af hydro-eluering (en fremgangsmåde, der anvendes i klassisk operation for grå stær, modelleret i figur 1A).
- Fyld en 1 ml sprøjte med en 27,5 g nålespids med 300 pi TD buffer. Stik nålen spidsen ind i snit i den forreste linsekapsel, og om halvvejs ind i linsen.
- Forsigtigt trykke sprøjten injicere TD buffer ind i linsen fiber cellemasse. Injicer mellem 50 og 200 pi TD, og aldrig mere end 300 pi. Observere fiber cellemassen løsne sig fra epitel og linsekapslen.
- Ved hjælp af høj præcision pincet, tag løsnede fiber cellemasse fra linsen gennem den forreste incisionssted.
Bemærk: Denne procedure efterlader den bageste linse basalmembran kapsel, som fiber cellerne var blevet knyttet blottet af celler, og en såret linse epitel blot støder op til dette websted.
3. Preparing såredes Lens for Ex Vivo Kultur
- Glat linsekapselsækken som hidrører fra kataraktoperation beskrevet ovenfor på dyrkningsskålen, celle opad, ved at gøre fem udskæringer i den forreste del af kapselsækken.
- Skåret vinkelret på den oprindelige incisionssted igennem til ækvator af linsen. Flade de resulterende fem "flapper" af linsekapsel med vedhæftet epitel på dyrkningsskålen kapsel nedad, celle opad. Bemærk den ex vivo sårede linse nu bør påtage sig en stjerne eller blomsteragtigt form (se figur 1B).
- At fastgøre kapslen til fadet, tryk blidt ned med pincet ved hvert punkt af stjernen. Dette vil gøre en lille fordybning på de fem mest yderste spidser af eksplantatet og resultere i vedvarende fastgørelse til skålen.
Bemærk: Det er muligt at beskadige kapslen under denne procedure, og det er derfor vigtigt at sikre kapslen i skålen så tæt på spidserne af flaps som muligt, samt at gøre den mindste mængde af sikring point som muligt (normalt to, højst tre pr flap). - Fjern TD buffer fra 35mm skål og erstatte det med 1,5 ml forvarmet medier. Dæk 35mm skål med låg og plads i inkubatoren (37 ° C, 5% CO2).
4. Adskillelse af den centrale Migration Zone (CMZ), hvor Re-epitelialisering af det sårede område af bageste kapsel opstår, fra Original Attachment Zone (OAZ) i linseepitelceller for kvantitativ analyse.
Bemærk: Cellerne begynder at flytte ind i CMZ regionen straks som reaktion på skade. Ved dag ét i kultur nok celler migrerer over CMZ til molekylær og biokemisk analyse efter adskillelse af CMZ og OAZ af mikro-dissektion 23. Denne protokol indebærer fjernelse af en flap (OAZ) ad gangen fra det sårede område af kapslen.
- Observere en Demarkation, tydeligt under dissektionsmikroskop, mellem OAZ og CMZ (se figur 2A). Ved hjælp af to høje præcision pincet fat med begge pincet på kanten af OAZ / CMZ linje, man blot støder op til den anden, på hver side af linjen (se figur 2A, B, pil).
- Med én hånd / en pincet på CMZ side fortsat holde på såret kultur, mens med den anden hånd / pincet, træk forsigtigt OAZ langs OAZ / CMZ linje. Den CMZ let adskilles fra OAZ langs denne linje. Fortsæt ad denne linje rundt om hele kulturen, indtil de to regioner er helt adskilt.
- Undersøgelse de adskilte Oaz og CMZ fraktioner for molekylær analyse, såsom RNA-Seq 24 eller biokemisk analyse, såsom western blot eller co-immunoudfældning 23,25.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ex vivo-model skabt til at studere sårhelingsprocessen i cellernes native mikromiljø
For at undersøge mekanismer, der er involveret i reguleringen af sårheling af et epitel inden cellernes indfødte mikromiljø, blev en klinisk relevant ex vivo mock operation for grå stær model oprettet. Denne model er skabt af linsen væv, som giver mange fordele på grund af dets iboende egenskaber: 1) objektivet er et selvstændigt organ omgivet af en tyk basalmembran kaldet linsen kapsel; 2) det er avaskulært, 3) ikke innerveres og 4) fri for tilknyttet stroma. Derfor er reparationsprocessen undersøgt begrænset til celler, der er medfødte til linsen korrekt. For at skabe denne model, er linser fjernes fra en embryonale (E) dag 15 chick embryo (figur 1A). Et lille snit er lavet i den forreste linsekapsel og associerede linseepitelceller hvorigennem linsen fiber cellemasse fjernesved hydro-eluering, en klassisk katarakt procedure, der skaber en fysiologisk relevant sårdannelse (figur 1A). Linsen epitel, som er til stede som en kontinuerlig monolag af celler langs den forreste og ækvatoriale aspekter af linsekapslen omgiver fiberen cellemasse, sammen med dets endogene population af vimentin-rige mesenkymale reparation-stamceller 1, forbliver i linsen under ekstraktion af fiber-celler (figur 1A). Efter fjernelse af fiberen cellemassen, er fem udskæringer foretages i den forreste del af linsekapslen og epitelet fladtrykte celle opad, vender mediet. Denne procedure gør det muligt billeddannelse af svaret fra de sårede epitel af forskellige mikroskopiske metoder, herunder time-lapse mikroskopi (Video 1). Disse yderligere snit i den forreste linsekapsel skabe en stjerneformet form eksplantat af de sårede linse med den cirkulære sår skabt ved at fjerne fiberen cellemassen i center af eksplantatet (figur 1B). Post-operation for grå stær og udfladning af væv, er de sårede epitel placeret i de punkter i stjernen, der omtales som den oprindelige Attachment Zone (OAZ) (figur 1A, B).
Fjernelsen af fiberen cellemassen fra dets bindingssted på bageste linsekapsel skaber en meget reproducerbar sårområde på basalmembranen, omgivet af den sårede epitel (Figur 1B, C). Den blotlagte kant af linsen ækvatoriale epitel, blot tilstødende til hvor fiberceller blev fæstnet, er forkanten af såret. Umiddelbart efter skade, er en subpopulation af vimentin-rige mesenkymale reparationsceller aktiveret og migrerer til sårkanten af epitelet 1. Linsen epitel, med disse mesenkymale reparation celler ved deres forkant, hurtigt bevæger sig ind på det cellefrie region af det endogene Basement membran kapsel, den centrale Migration Zone (CMZ), til at begynde at helbrede såret. Linseepitelceller bevæge kollektivt som et ark, i CMZ angreb fra de mesenkymale celler leder 1, der strækker fremspring langs substratet og styrer sårhelingsprocessen (F igur 1D, Video 1). Sårheling skrider frem, som dækker en betydelig sårområdet (67%) på dag 1 i kultur (figur 1C), og er typisk afsluttet inden for 3 dage i kultur (figur 1B, C).
Kan foretages en klar fysisk sondring mellem de Oaz og CMZ regionerne så tidligt som dag 1, som er afgrænset som en fold eller rynke mellem disse to zoner (figur 2A, pil). Dette fænomen giver en retningslinje, som at adskille disse områder på noget tidspunkt under sårhelingsprocessen. Ved hjælp af en fin tippet pincet, kan kulturerne være mikro-dissekeret til SEPARspiste Oaz og CMZ regioner for at analysere molekylære forskelle mellem disse forskellige zoner (figur 2B). Dette er en stærk tilgang, der er blevet anvendt til at identificere migration-specifikke ændringer i forbindelse med sår-reparation. Tidligere blev det konstateret, at der er en stigning i fokal adhæsionkinase (FAK) aktivering i ex vivo sårede kulturer under sårhelingsprocessen 5. FAK har en veletableret rolle i cellemigrering 26-29. Evnen til at berige for OAZ vs. CMZ nu gjort det muligt at undersøge, om denne stigning i FAK aktivering er specifik for migration-specifikke CMZ region. Til denne undersøgelse blev Oaz og CMZ regioner separeret på dag 1 - 3 (hele sårhelingsprocessen) og analyseret for biokemiske forandringer i FAK aktivering (FAK pY397). Resultaterne viste, at stigningen i FAK-aktivering var forbundet med migrationen-specifikke CMZ region (figur 2C). Denex vivo modelsystem beskrevet her tilvejebringer en unik og uvurderlig mulighed til at undersøge de molekylære programmer involveret i koordineringen såret reparationsprocessen.
Figur 1. Etablering af en ex vivo-model til at studere sårhelingsprocessen inden cellernes nativt mikromiljø som reaktion på et fysiologisk sårdannelse. Mock katarakt kirurgi blev udført på E15 chick linser. Linsen fiber cellemasse (hvid) fjernes gennem et snit i den forreste kapsel af hydro-eluering. Denne proces efterlader epitelceller (grøn), der forbliver stramt klæbende til linsekapslen og en celle-blottede basalmembran (BM) på hvilke celler vil vandre til at helbrede såret (A). Fem snit er lavet til at epitelet at flade ud og skabe en stjerne formet ex vivo kult ure (B). De resterende linse-epitelceller, der fylder de punkter i stjernen benævnes Original Attachment Zone (OAZ) (A, B). Det blottede BM på hvilke celler vil vandre omtales som den centrale Migration Zone (CMZ) (A, B). Øjeblikkeligt som reaktion på skade, begynder cellerne at flytte ind i CMZ region på celle-blottet BM (B). Det åbne sår området er kvantificeret over tid i (C). Sårheling er typisk afsluttet med D3 i kultur (B, C). I (B, C) T0 angiver tidspunktet for sårdannelse, D1-3 betegner Days 1-3. Inden for CMZ kan to populationer af celler der skelnes mellem objektivet epitelceller og de mesenchymale celler, der leder lokalisere til sårkanten, forløbende fremspring langs substratet (D). Dette tal er genoptrykt fra Menko et al 23.target = "_ blank"> Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Adskillelse af Oaz og CMZ regioner til at identificere migration-specifikke ændringer i forbindelse med sårheling. På dag 1, kan skelnes Oaz og CMZ regioner fra hinanden med en fold (pil), som kan anvendes som en guide til at adskille disse zoner (A). På dette krølle, kan fine tippet pincet bruges til at gribe kanten af OAZ / CMZ linje. Kulturen kan adskilles langs denne linje tillader isolation af Oaz og CMZ regioner (B). Mikro-dissektion af OAZ og CMZ dagligt, fra dag 1 (D1) - dag 3 (D3) blev udført for at bestemme, om migration-specifikke ændringer i FAK-aktivering forekommer i området af sårheling. Lysater fra hver region blev undersøgt ved Western blot-analyse til enten FAK aktivering (pFAK Y397) eller Total FAK ekspression (C). Mens lille ændring i total FAK-niveauer blev observeret, blev en stigning i FAK aktivering forbundet med migrationen-specifikke CMZ region (C).
Video 1. sårheling i ex vivo mock kataraktoperation model efterfølges af time-lapse mikroskopi fra tid 0 efter skade gennem til dag 3. sårlukning ses fra midten af sårområdet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Chloride (NaCl) | Fisher Scientific | S271-3 | Use at 140 mM in TD Buffer |
| Potassium Chloride (KCl) | Fisher Scientific | P217-500 | Use at 5 mM in TD Buffer |
| Sodium Phosphate (Na2HPO4) | Sigma | S0876 | Use at 0.7 mM in TD Buffer |
| D-glucose (Dextrose) | Fisher Scientific | D16-500 | Use at 0.5 mM in TD Buffer |
| Tris Base | Fisher Scientific | BP152-1 | Use at 8.25 mM in TD Buffer |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 | Use to pH TD buffer to 7.4 |
| Media 199 | GIBCO | 11150-059 | |
| L-glutamine | Corning/CellGro | 25-005-CI | Use at 1% in Media199 |
| Penicillin/streptomycin | Corning/CellGro | 30-002-CI | Use at 1% in Media199 |
| 100 mm petri dishes | Fisher Scientific | FB0875711Z | |
| Stericup Filter Unit | Millipore | SCGPU01RE | Use to filter sterilize Media |
| Dumont #5 forceps (need 2) | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| 35 mm Cell Culture Dish | Corning | 430165 | |
| 27 G 1 ml SlipTip with precision glide needle | BD | 309623 | |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Standard Forceps | Fine Science Tools | 91100-12 | |
| Other Items Needed: General dissection instruments, fertile white leghorn chicken eggs, check egg incubator (humidified, 37.7°C), laminar flow hood, binocular stereovision dissecting microscope |
References
- Walker, J. L., et al. Unique precursors for the mesenchymal cells involved in injury response and fibrosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 13730-13735 (2010).
- Friedl, P., Gilmour, D. Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer. Nature reviews. Molecular cell biology. 10, 445-457 (2009).
- Riahi, R., Yang, Y., Zhang, D. D., Wong, P. K. Advances in wound-healing assays for probing collective cell migration. Journal of laboratory automation. 17, 59-65 (2012).
- Khalil, A. A., Friedl, P. Determinants of leader cells in collective cell migration. Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 2, 568-574 (2010).
- Walker, J. L., Wolff, I. M., Zhang, L., Menko, A. S. Activation of SRC kinases signals induction of posterior capsule opacification. Investigative ophthalmology & visual science. 48, 2214-2223 (2007).
- Sta Iglesia, D. D., Stepp, M. A. Disruption of the basement membrane after corneal debridement. Investigative ophthalmology & visual science. 41, 1045-1053 (2000).
- Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Brown, M., Stepp, M. A. A mouse model for the study of recurrent corneal epithelial erosions: alpha9beta1 integrin implicated in progression of the disease. Investigative ophthalmology & visual science. 45, 1775-1788 (2004).
- Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing. Experimental eye research. 93, 927-936 (2011).
- Stepp, M. A., et al. Wounding the cornea to learn how it heals. Experimental eye research. 121, 178-193 (2014).
- Kuwabara, T., Perkins, D. G., Cogan, D. G. Sliding of the epithelium in experimental corneal wounds. Investigative ophthalmology. 15, 4-14 (1976).
- Sherrard, E. S. The corneal endothelium in vivo: its response to mild trauma. Experimental eye research. 22, 347-357 (1976).
- Stramer, B. M., Zieske, J. D., Jung, J. C., Austin, J. S., Fini, M. E. Molecular mechanisms controlling the fibrotic repair phenotype in cornea: implications for surgical outcomes. Investigative ophthalmology & visual science. 44, 4237-4246 (2003).
- Escamez, M. J., et al. An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice. The Journal of investigative dermatology. 123, 1182-1191 (2004).
- Werner, S., Breeden, M., Hubner, G., Greenhalgh, D. G., Longaker, M. T. Induction of keratinocyte growth factor expression is reduced and delayed during wound healing in the genetically diabetic mouse. The Journal of investigative dermatology. 103, 469-473 (1994).
- Tarin, D., Croft, C. B. Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin. II. Dermo-epidermal interrelationships. Journal of anatomy. 106, 79-91 (1970).
- Croft, C. B., Tarin, D. Ultrastructural studies of wound healing in mouse skin I. Epithelial behaviour. Journal of anatomy. 106, 63-77 (1970).
- Winstanley, E. W. The epithelial reaction in the healing of excised cutaneous wounds in the dog. Journal of comparative pathology. 85, 61-75 (1975).
- Wormstone, I. M., Wride, M. A. The ocular lens: a classic model for development, physiology and disease. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 366, 1190-1192 (2011).
- Danysh, B. P., Duncan, M. K.
- Awasthi, N., Guo, S., Wagner, B. J. Posterior capsular opacification: a problem reduced but not yet eradicated. Archives of ophthalmology. 127, 555-562 (2009).
- Walker, T. D. Pharmacological attempts to reduce posterior capsule opacification after cataract surgery--a review. Clinical & experimental ophthalmology. 36, 883-890 (2008).
- Schmidbauer, J. M., et al.
- Menko, A. S., et al. A central role for vimentin in regulating repair function during healing of the lens epithelium. Molecular biology of the cell. 25, 776-790 (2014).
- Chauss, D., et al. Differentiation state-specific mitochondrial dynamic regulatory networks are revealed by global transcriptional analysis of the developing chicken lens. G3 (Bethesda). 4, 1515-1527 (2014).
- Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. Distinct roles for N-Cadherin linked c-Src and fyn kinases in lens development. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 242, 469-484 (2013).
- Sieg, D. J., et al. FAK integrates growth-factor and integrin signals to promote cell migration. Nature cell biology. 2, 249-256 (2000).
- Sieg, D. J., Hauck, C. R., Schlaepfer, D. D. Required role of focal adhesion kinase (FAK) for integrin-stimulated cell migration. Journal of cell science. 112 (Pt 16), 2677-2691 (1999).
- Hauck, C. R., Hsia, D. A., Schlaepfer, D. D. The focal adhesion kinase--a regulator of cell migration and invasion). IUBMB life. 53, 115-119 (2002).
- Zhao, X., Guan, J. L. Focal adhesion kinase and its signaling pathways in cell migration and angiogenesis. Advanced drug delivery reviews. 63, 610-615 (2011).
- Menko, A. S., Bleaken, B. M., Walker, J. L. Regional-specific alterations in cell-cell junctions, cytoskeletal networks and myosin-mediated mechanical cues coordinate collectivity of movement of epithelial cells in response to injury. Experimental cell research. 322, 133-148 (2014).
- Martin, P. Wound healing--aiming for perfect skin regeneration. Science. 276, 75-81 (1997).
- Ferguson, M. W., O'Kane, S. Scar-free healing: from embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 839-850 (2004).
- Redd, M. J., Cooper, L., Wood, W., Stramer, B., Martin, P. Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair. Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological. 359, 777-784 (2004).
- Nodder, S., Martin, P. Wound healing in embryos: a review. Anatomy and embryology. 195, 215-228 (1997).
- Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T.
