Aqui nós descrevemos um método para infligir a cabeça fechado traumatismo crânio-encefálico (TCE) em Drosophila. Este método oferece um portal para investigar os mecanismos celulares e moleculares que estão na base patologias TCE, utilizando a vasta gama de ferramentas experimentais e técnicas disponíveis para as moscas.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Um Método para infligir Cabeça Fechada Lesão cerebral traumático em
Neste artigo
Aviso de errata
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Resumo
Resumo
Traumatismo crânio-encefálico (TCE) afeta milhões de pessoas a cada ano, causando comprometimento da saúde física, cognitiva e funções comportamentais e morte. Estudos utilizando Drosophila têm contribuído importantes avanços na compreensão de processos neurológicos. Assim, com o objetivo de compreender a base celular e molecular de patologias TCE em humanos, foi desenvolvido o dispositivo de Trauma de Alto Impacto (HIT) para infligir cabeça fechada TBI em moscas. Moscas submetidos aos fenótipos visor do dispositivo HIT consistentes com TBI humano, tais como incapacidade temporária e neurodegeneração progressiva. O dispositivo HIT usa um mecanismo baseado em mola para impulsionar moscas contra a parede de um tubo de ensaio, provocando danos mecânicos ao cérebro mosca. O dispositivo é barato e fácil de construir, a sua operação é simples e rápida, e que produz resultados reprodutíveis. Por conseguinte, o dispositivo de HIT pode ser combinada com as ferramentas experimentais existentes e técnicas de moscas para tratar fundamentaisdúvidas sobre TCE que podem levar ao desenvolvimento de diagnósticos e tratamentos para o TCE. Em particular, o dispositivo HIT pode ser usado para realizar telas genéticos em grande escala para compreender a base genética de patologias TBI.
Introdução
Traumatismo crânio-encefálico (TCE) é definida como lesão no cérebro de uma força mecânica externa. Mais vulgarmente, a partir de resultados de TCE forças de cabeça fechada, como forças rombas e aceleração inércia e forças de desaceleração que causam o cérebro para atingir o interior do crânio. Nos Estados Unidos, estima-se que 50.000 pessoas morrem a cada ano de TBI e 2,5-6.500.000 indivíduos estão a viver com as consequências do TCE, incluindo debilitante físico, cognitivo e problemas de comportamento 1,2. As conseqüências do TCE não são apenas devido a lesões mecânicas primárias para o cérebro, mas também a lesões celulares e moleculares secundários par....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
1. Construção do Dispositivo HIT
- Fixe a mola para a placa utilizando dois grampos e quatro parafusos (Figura 1A). Centralize os grampos em relação à largura da placa e Butt-los uns contra os outros com o flush braçadeira exterior com a borda da placa. Antes de fixar os grampos, dobre-os usando um alicate para caber firmemente sobre a primavera.
NOTA: Consulte a Tabela 1 para obter descrições dos materiais necessários para a construção do dispositivo de HIT. A extremidade apertada da mola deve ser de 1/8 de polegada (3,2 mm) a partir da borda da placa, ea extremidade livre deve estender-se sobre a placa por 3/4 de po....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Estamos interessados em entender por que as moscas morrem logo após a lesão primária. Para quantificar a morte, determinou-se o Índice de mortalidade às 24 horas (MI 24), que é a percentagem de moscas que morreram dentro de 24 horas da lesão primária. Moscas sujeitos a ataques do dispositivo HIT foram incubadas a 25 ° C num frasco com comida mosca, e o número de moscas mortas foi contado após 24 horas. Utilizou-se esta abordagem para identificar os factores que afectam a MI 24 e descobriram que o.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
O método dispositivo HIT se distingue de outros métodos que infligem lesões traumáticas em moscas pelo fato de que ele faz com que a cabeça fechado, em vez de penetrar TBI 11. Além disso, o método de dispositivo HIT leva menos tempo, esforço e habilidade para infligir TBI em muitas moscas, por isso, o método é mais favorável do que outros métodos para telas genéticos de grande escala. Por fim, o facto de as lesões primárias infligidos pelo dispositivo HIT não estão limitados ao cérebro é ao mesmo tempo uma li.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Não temos conflitos de interesse para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo National Institutes of Health subvenção, R01 AG033620 (BG) e por Robert Draper Inovação Tecnológica Financiamento (DAW).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Mola de compressão zincada | A Hillman Grupo | 540189 | 9 7/8 polegadas (comprimento, 2,2 cm), 15/16 polegadas (diâmetro externo, 2,4 cm), 0,12 polegadas (tamanho do fio, 0,3 cm) |
| Tábua | 9 polegadas (comprimento, 22,9 cm), 6,5 polegadas (largura, 16,5 cm), 0,75 polegadas (altura, 1,9 cm) | ||
| Braçadeiras | Sigma Electrical Manufacturing Corporation | 49822 | 3,10 polegadas (comprimento, 7,9 cm), 0,68 polegadas (largura, 1,7 cm), 1,11 polegadas (altura, 2,8 cm), EMT Duas Correias de Furo, clique no tipo para 1 polegada (2,5 cm) conduíte de aço EMT |
| Laço metade de velcro | 3 polegadas (comprimento, 7,6 cm), (3/4 polegada largura, 1,9 cm) | ||
| Tampa de balde de gelo de poliuretano | Fisher Scientific | 02-591-45 | 9 1/8 polegadas (comprimento, 23,2 cm), 9 1/8 polegadas (largura, 23,2 cm), 1 1/4 polegadas (altura, 3,2 cm) |
| Frascos de plástico para moscas | Applied Scientific | AS-510 | 3 11/16 polegadas (altura, 9,4 cm), 1 1/16 polegadas (diâmetro interno, 2,7 cm), 1 1/8 polegada (diâmetro externo, 2,9 cm) |
| Grandes bolas de algodão | Fisher Scientific | 22-456-883 | |
| Transferidor | 10 polegadas (diâmetro, 25,4 cm) |
Referências
- Harrison-Felix, C. L., Whiteneck, G. G., Jha, A., DeVivo, M. J., Hammond, F. M., Hart, D. M. Mortality over four decades after traumatic brain injury rehabilitation: A retrospective cohort study. Arch Phys Med Rehabil. 90, 1506-1513 (2009).
- Coronado, V. G., et al.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
Errata
Formal Correction: Erratum: A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila
Posted by JoVE Editors on 7/14/2015. Citeable Link.
An author's name was corrected in the publication of A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila. The second to last author's was spelled incorrectly. It has been updated from:
Barry Ganetky
to:
Barry Ganetzky
