Indução e Avaliação de isquemia-reperfusão em Langendorff-perfundidos Rato Corações

Resumo

O coração isolado de rato é um modelo duradouro para lesão de isquemia e reperfusão. Aqui, descrevemos o processo de coleta do coração batendo de um rato por meio de canulação aórtica in situ, perfusão de Langendorff do coração, lesão simulada de isquemia-reperfusão e coloração de infarto para confirmar a extensão do insulto isquêmico.

Resumo

Os eventos bioquímicos que envolvem a lesão de isquemia e reperfusão no cenário agudo são de grande importância para promover novas opções de tratamento para infarto do miocárdio e complicações cardíacas da cirurgia torácica. A capacidade de certos medicamentos de pré-condicionar o miocárdio contra a lesão de isquemia e reperfusão levou a vários ensaios clínicos, com pouco sucesso. O modelo de coração isolado permite a observação aguda dos efeitos funcionais da lesão de isquemia-reperfusão em tempo real, incluindo os efeitos de várias intervenções farmacológicas administradas em qualquer momento antes ou dentro da janela de lesão de isquemia-reperfusão. Como breves períodos de isquemia podem pré-condicionar o coração contra lesão isquêmica, a canulação aórtica in situ é realizada para permitir a avaliação funcional do miocárdio não pré-condicionado. Um balão cheio de solução salina é colocado no ventrículo esquerdo para permitir a medição em tempo real da geração de pressão. A lesão isquêmica é simulada pela cessação do fluxo do tampão de perfusão, seguida de reperfusão. A duração da isquemia e da reperfusão pode ser modulada para examinar eventos bioquímicos em um determinado momento. Embora o modelo cardíaco isolado de Langendorff não permita a consideração de eventos sistêmicos que afetam a isquemia e a reperfusão, é um excelente modelo para o exame de eventos funcionais e bioquímicos agudos dentro da janela de lesão de isquemia e reperfusão, bem como o efeito da intervenção farmacológica no pré e pós-condicionamento cardíaco. O objetivo deste protocolo é demonstrar como realizar a canulação aórtica in situ e a excisão cardíaca seguida de lesão de isquemia/reperfusão no modelo de Langendorff.

Introdução

A elucidação dos eventos subjacentes à resposta cardíaca tanto para isquemia e reperfusão são essencial para melhorar o tratamento de enfarte ¹ e procedimentos cirúrgicos cardíacos do miocárdio que necessitam pinçamento aórtico ^2. Embora os modelos in vivo de lesão de reperfusão de isquemia permitir análise de ponto final muito úteis, eles não são tão eficazes para estudar os efeitos funcionais da isquemia lesão de reperfusão aguda em tempo real. Além disso, em modelos de isquemia reperfusão in vivo geralmente produzem uma variabilidade significativa da dimensão do enfarte e a entrega directa de drogas para o coração n....

Protocolo

Todos os procedimentos listados aqui foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso do animal Institucional na Universidade de Medicina da Carolina do Sul. As experiências aqui descritas são, experiências agudas não-sobrevivência. Como tal, não há uso de pomada e uma suíte de cirurgia estéril não é necessária. A eutanásia por exsanguinação é conseguida durante a colheita do coração.

1. Experimental Preparação

1. Configure ou uma pressão constante ou fluxo constante de perfusão Langendorff Aparelho ^4.
2. Prepare a 4 L de Krebs Henseleit modificado (em mM: NaCl 112, KCl 5, _MgSO4 1,2, 1 K ₂ HPO <....

Resultados

O aparelho de balão do ventrículo esquerdo permite a monitorização em tempo real da pressão desenvolvida pela entidade ventrículo esquerdo (Figura 1). Como descrito anteriormente ^7, este traçado da pressão pode ser usado para calcular muitos dos parâmetros da função ventricular. Estes cálculos podem ser realizados na fase de linha de base, bem como a fase de reperfusão, em média, em traços múltiplos dentro de cada grupo, e comparadas a fim de determinar se a intervenção farmacológica resultou.......

Discussão

O coração perfundido isolado de rato pode ser utilizado com êxito para estudar o efeito da intervenção farmacológica no pré-condicionamento cardíaco em lesão de reperfusão de isquemia ^9. No entanto, existem alguns passos essenciais para o procedimento que deve ser normalizados, a fim de assegurar a reprodutibilidade dos resultados. A manutenção de uma temperatura de 37,4 ° C no interior do sistema é crítica, já que mesmo a hipotermia e hipertermia pode causar pré-condicionamento cardíaco ^10,11. O t.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cloreto de sódio	Sigma Aldrich	S3014
Cloreto de potássio	Sigma Aldrich	P9541
Sulfato de magnésio	Sigma Aldrich	203726
Fosfato de potássio dibásico	Sigma Aldrich	RES20765-A7
Cloreto de cálcio di-hidratado	Sigma Aldrich	C8106
Sódio Bicarbonato	Sigma Aldrich	S5761
D-glicose	Sigma	Aldrich G8270
Ácido octanóico	Sigma Aldrich	C2875
Cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio	Sigma Aldrich	T8877
Transdutor de pressão médica	MEMSCAP	SP844
Masterflex Bomba peristáltica	Cole Parmer	EW-07521-40
Cabeça de bomba de carga fácil Masterflex	Cole Parmer	EW-07518-10
Banho-maria circulante aquecido	Lauda	M3
	transônico	TS410
de fluxo em linha
Instrumento	do dispositivo da aquisição	PL3508
LabChart instrumentos	MLU60/8

Módulo de fluxo de tubulação Console de pesquisa modular Sensor transônico T402 Transonic ME2PXN PowerLab PL3508 da aquisição de dados de dados do dispositivo do anúncio