É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Preparação de altamente poroso Coordenação Polymer Revestimentos em macroporosas Polymer Monólitos para o enriquecimento avançado de Fosfopeptídeos

9.9K vistas

⸱

DOI:

10.3791/52926

⸱

14 de julho de 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1The Molecular Foundry, E. O. Lawrence Berkeley National Laboratory, 2Institute of Chemical Sciences, Bahauddin Zakariya University, 3Department of Chemistry, University of the Balearic Islands, 4Beijing Key Lab of Bioprocess, College of Life Science and Technology, Beijing University of Chemical Technology

Neste artigo

Resumo

Um procedimento para a preparação de meios de separação híbridos porosos compostos por um monólito de polímero macroporoso revestido internamente por um polímero de coordenação microporosa de alta área superficial é apresentado.

Resumo

Descrevemos um protocolo para a preparação de materiais híbridos baseados em revestimentos poliméricos de coordenação altamente porosos na superfície interna de monólitos poliméricos macroporosos. A abordagem desenvolvida é baseada na preparação de um polímero macroporoso contendo grupos funcionais de ácido carboxílico e no subsequente crescimento controlado baseado em solução passo a passo de uma camada de um polímero de coordenação porosa na superfície dos poros do monólito polimérico. O híbrido de polímero metal-orgânico preparado tem uma alta área de superfície específica de microporos. A quantidade de sítios de ferro (III) é aumentada por meio da coordenação metal-orgânica na superfície dos poros do suporte funcional do polímero. O aumento de sites metálicos está relacionado ao número de iterações do processo de revestimento.

O esquema de preparação desenvolvido é facilmente adaptado a um formato de coluna capilar. O polímero poroso funcional é preparado como um monólito poroso autônomo de bloco único dentro do capilar, produzindo um dispositivo de separação de fluxo contínuo com excelente permeabilidade de fluxo e contrapressão modesta. A coluna híbrida de polímero metal-orgânico apresentou excelente desempenho para o enriquecimento de fosfopeptídeos a partir de proteínas digeridas e sua posterior detecção usando espectrometria de massa de tempo de voo de dessorção/ionização a laser assistida por matriz. O protocolo experimental apresentado é altamente versátil e pode ser facilmente implementado em diferentes suportes e revestimentos de polímeros orgânicos com uma infinidade de polímeros de coordenação porosa e estruturas metal-orgânicas para múltiplas aplicações de purificação e/ou separação.

Introdução

Polímeros de coordenação poroso (PCPS) são compostos de coordenação com base em centros metálicos ligados por ligantes orgânicos com repetição de entidades de coordenação que se estende em uma, duas ou três dimensões, que pode ser amorfa ou cristalina 1-3. Nos últimos anos, esta classe de materiais porosos tem atraído a atenção geral devido à sua elevada porosidade, de largura tunability química, e a sua estabilidade. PCP têm sido explorados para uma gama de aplicações incluindo a armazenagem de gás, a separação de gás, e catálise 3-6 e, muito recentemente, as primeiras aplicações analíticas de PCP têm sido descritos 7.

Por causa de sua funcionalidade química e alta porosidade PCP avançados têm sido alvo de seu enorme potencial para a melhoria dos processos de purificação e separações cromatográficas, e uma série de relatórios sobre este assunto têm sido publicados 7-13. No entanto, o desempenho de PCP não está neste momento a um equivalenível nt com materiais cromatográficos existentes provavelmente devido à rápida difusão através de grandes espaços vazios interpartículas em camadas preenchidas com estes sólidos devido às suas morfologias tipicamente de forma irregular de suas partículas ou cristais. Esta embalagem irregularmente distribuída leva a um desempenho inferior ao esperado, assim como contrapressões alta coluna e indesejáveis ​​morfologias formato de pico 14,15.

A fim de resolver o problema da rápida difusão através dos espaços vazios entre partículas e concomitantemente aumentar o desempenho de PCP para aplicações analíticas, o desenvolvimento de um material híbrido baseado em um monólito de polímero macroporoso 16 que contém o PCP na superfície dos macroporos seria ser desejável. Monólitos de polímero são auto-suficientes, materiais de peça única que possam sustentar fluxo convectivo através de seus poros, o que os torna uma das alternativas mais eficientes para talão de embalagens e têm sido comercializados com sucesso por vários c ompanies 17,18. Monólitos polímero poroso são geralmente baseados na polimerização de um monómero e um agente de reticulação na presença de porogénios, que são tipicamente misturas binárias de solventes orgânicos. Os materiais monolíticos obtidos têm uma estrutura microglobular e uma porosidade elevada e permeabilidade ao fluxo.

Uma abordagem simples para unificar destes materiais para preparar um monólito de polímero contendo um PCP baseia-se na adição directa de PCP tal como sintetizada na mistura de polimerização do monólito. Esta abordagem resultou em PCPs principalmente enterrado dentro de um andaime do polímero, e não estar ativo para a continuação da aplicação do material final 14,15. Uma abordagem sintética diferente é claramente necessário, a fim de, por exemplo, desenvolver filmes uniformes de PCP, ou estruturas de metal-orgânicos cristalinos (MOF) onde a maioria dos poros contidos no interior do cristal são acessíveis a partir dos macroporos do monólito de polímero.

t "> Aqui relatamos um protocolo simples para a preparação de um material híbrido de polímero orgânico-metálico (MOPH) com base num suporte de polímero macroporosas com grupos funcionais adequados para a ligação do PCP, que podem ser facilmente implementados como um auto-contido única monólito de polímero -Peça num formato de coluna com propriedades óptimas para aplicações de escoamento. O procedimento de síntese do polímero é seguida por uma solução com base em temperatura ambiente simples   método para crescer um revestimento PCP sobre a superfície interna dos poros do monólito 19-20. Como primeiro exemplo, descreve-se a preparação de uma película de polímero de coordenação de ferro (III) benzenotricarboxilato (FeBTC) dentro de um poli macroporosa (estireno-ácido metacrílico-divinilbenzeno) monólito. Este método é eficaz para a preparação de pós a granel, bem como a coluna capilar e o protocolo descrito é facilmente exequível a outros PCP. Como um exemplo do potencial de MOPHs como materiais funcionais para o fluxo atra-aplicações gh, aplicou-se o desenvolvido FeBTC MOPH que contém um revestimento denso de Fe (III) para enriquecer fosf centros de misturas de proteínas digeridas que exploram a afinidade de ligação de fosfopéptidos a Fe (III). O protocolo desenvolvido 21 compreende três partes principais: Preparação do suporte macroporous monólito de polímero orgânico; crescimento do revestimento PCP sobre a superfície dos poros do monolito; aplicação para o enriquecimento de fosfopeptídeos.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

NOTA: Antes de começar, verifique todas as fichas de dados de materiais relevantes (MSDSs). Muitos dos produtos químicos usados ​​nos procedimentos de síntese e de aplicação são tóxicos. Por favor, siga todas as práticas de segurança apropriadas e utilizar equipamentos adequados de proteção (jaleco, calças compridas, sapatos fechados, óculos de segurança, luvas). Por favor, use todos os equipamentos de protecção individual criogênico ao manusear nitrogênio líquido para as medições de adsorção de nitrogênio (luvas isolantes, protetor facial).

1. Porous Polymer Monolith Preparação em massa e Capilar formato de coluna

  1. Massa de polímero Monolith para Caracterização
    1. Purifica-se o estireno, divinilbenzeno e ácido metacrílico através de uma coluna de alumina básica, de modo a remover os inibidores de polimerização. Colocar 10 g de alumina básica em 25 ml de uma seringa de plástico descartável com um tampão de lã de vidro embalado na ponta da seringa. Fazer passar cerca de 10 ml do monómero através da coluna.
    2. Carregar os monómeros de estireno (50 mg, 100 mg de divinilbenzeno e 50 mg de ácido metacrílico) e os agentes de formação de poros (300 mg de tolueno e 300 mg de isooctano) em um frasco de vidro de 1 ml. Adicionar o iniciador da polimerização, 4 mg de 2,2'-azobisisobutironitrilo (AIBN, 1% em relação aos monómeros).
    3. Homogeneizar a mistura por ultra-sons durante 10 min. Remover o oxigénio dissolvido por borbulhamento de azoto através do líquido durante 10 min. Fecha-se o frasco com tampa de película de parafina e colocá-lo num banho de água a 60 ° C durante 6 horas para polimerizar a mistura.
    4. Arrefecer à temperatura ambiente e quebrar o frasco cuidadosamente. Transferir o monólito de polímero em um cartucho de extracção de celulose. Colocar o dedal de extracção para uma câmara de extracção de Soxhlet e montá-lo para um balão de fundo redondo que contém um volume de metanol, que é pelo menos três vezes o volume da câmara de extracção. Montar um condensador para a parte superior da câmara de extracção. Realizar a extração Soxhlet fervendo o metanoldurante 16 h, assegurando a completa remoção dos monómeros que não reagiram e agentes de formação de poro.
    5. Secar durante a noite numa estufa de vácuo a 60 ° C. Confirmar a presença de grupos funcionais carboxílicos para anexar o PCP por Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR). Medir a área de superfície por adsorção de porosimetria de azoto.
  2. Funcionalização da sílica Capilares para a preparação de colunas monolíticas
    1. Corte de 2 m de uma ID de 100 uM capilar de sílica fundida revestido com poliimida. Ligue-o a uma seringa de vidro de 0,25-0,50 ml e lava-se o capilar com acetona. Remover a acetona por lavagem da coluna capilar com água.
    2. A fim de activar o revestimento de sílica interno do capilar, utilizar uma bomba de seringa a fluir uma solução aquosa de NaOH 0,2 M em 0,25 mL / min durante 30 min. Lavar com água até o efluente estar neutro.
    3. Use tiras de papel de pH para verificar efluente pH. Em ordem para protonar os grupos silanol do capilar, uma bomba aqueo 0,2 Msolução de HCl-nos através do capilar em 0,25 mL / min durante 30 min. Lavar com água até o efluente estar neutro. Enxágüe com etanol.
    4. Bombear a 20% (w / w) de uma solução de etanol 3- (trimetoxisilil) metacrilato de propilo (pH 5 ajustado com ácido acético) a 0,25 mL / min durante 1 hora. Neste passo, o capilar de sílica funcionalizado com grupos de vinil, a fim de fixar o monólito de polímero para a superfície interior dos capilares.
    5. Lavar com acetona e seco numa corrente de azoto e deixar à temperatura ambiente durante a noite antes da utilização. Corte o capilar em pedaços mais curtos de comprimento 20 cm.
  3. Preparação das colunas capilares Monolithic
    1. Prepara-se uma mistura de polimerização idêntico para o monólito de polímero a granel (secção 1.1), num frasco de vidro de 1 ml com um septo de borracha. Adicionar iniciador AIBN 1% em relação aos monómeros. Homogeneizar a mistura por ultra-sons durante 10 min.
    2. Purgar a mistura com azoto polimerização por acoplamento de um capilar de sílica não-funcionalizadoa um fluxo de azoto.
      1. Inserir o capilar corrente de azoto, através do septo de borracha do frasco e mergulhá-lo na mistura de polimerização, de modo que o azoto bolhas através do líquido. Deixe a tampa do frasco levemente solto para evitar excesso de pressão. Purgar para 10 min.
      2. Levantar o capilar corrente de azoto a partir da mistura de polimerização para o espaço superior do frasco, e fechar firmemente a tampa. Inserir um capilar funcionalizada através do septo para dentro da mistura de polimerização. O excesso de pressão gerada no capilar através do azoto injectado na câmara de expansão bombeia a mistura de polimerização através do capilar funcionalizado.
      3. Recolha algumas gotas de mistura de polimerização a partir do efluente do capilar para assegurar que ele está completamente cheio e fechá-lo com um septo de borracha. Aqui o capilar para fora do frasco com muito cuidado e fechar a entrada do tubo capilar com um septo de borracha.
    3. Polimerizar o mixtura contido no capilar em um banho de água a 60 ° C durante 6 h. Arrefecer à temperatura ambiente e corte de alguns milímetros de ambas as extremidades do capilar. Remover os monómeros não reagidos e agentes de formação de poros através de lavagem da coluna com acetonitrilo utilizando uma bomba de HPLC em 3 mL / min durante 30 min. Verifique contrapressão da coluna capilar.

2. Crescimento da Ferro-benzenetrycarboxylate (FeBTC) PCP

  1. Crescimento do FeBTC MOPH em um polímero Monolith massa para Caracterização
    1. Moer o monólito previamente seca utilizando um almofariz e pilão.
    2. Imergir 100 mg do pó monólito em 5 ml de 2 mM de FeCl 3 .6H 2 O em etanol durante 15 min. Filtro de vácuo utilizando um filtro de nylon (0,22 um) e lava-se o pó com etanol. Mergulha-se o pó monólito em 5 ml de mM de ácido benzeno- 1,3,5-2 (BTC) em etanol durante 15 min. Filtro de vácuo utilizando um filtro de nylon (0,22 um) e lava-se o pó com etanol.
    3. Repita o passo número 2 como desejar. O crescimento do revestimento orgânico-metálico final será definido pelo número de ciclos aplicados. Normalmente, entre 10 e 30 ciclos são realizados. Confirmar a presença de novos poros por porosimetria de adsorção de azoto. Medir a quantidade de locais adicionais de metal por análise termogravimétrica (TGA).
  2. Crescimento do FeBTC MOPH numa coluna capilar monolítico para o enriquecimento de fosfopéptidos
    1. Utilizando uma bomba de seringa. Lavar o monólito capilar com 2 mM de FeCl 3 .6H 2 O em etanol durante 15 minutos a 2 uL / min. Lava-se com etanol durante 15 minutos a 2 uL / ​​min. Lavar o monólito capilar com uma BTC 2 mM em etanol durante 15 minutos a 2 uL / ​​min. Lava-se com etanol durante 15 minutos a 2 uL / ​​min.
    2. Repita o passo 1 se o desejar. O crescimento do revestimento orgânico-metálico final será definido pelo número de ciclos realizados.

3. Proteína A digestão e Enrichment de Fosfopeptídeos

  1. A digestão de proteínas
    1. Dissolve-se 0,5 ml de leite não gordo em 1 ml de água e dividi-lo em fracções de 200 uL.
    2. Para a digestão de proteínas adicionar 160 ul de 1 M de bicarbonato de amónio e 50 ul de 45 mM de ditiotreitol a cada fracção, a fim de clivar as ligações dissulfureto. Incubar a 50 ° C num Thermomixer durante 15 min.
    3. Adicionar gradualmente 50 mL de uma solução aquosa de iodoacetamida 100 mM, enquanto que a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente. Iodoacetamida irá evitar a formação de novas ligações dissulfureto.
    4. Incubar no escuro durante 15 min à temperatura ambiente. Adicionar 1 ml de água desionizada. Adicionar 2 mg de tripsina e digerir proteínas num termomisturador a 37 ° C durante 14 h.
    5. Terminar a digestão por acidificação com 10 ul de ácido trifluoroacético a 1% e colocando-o no termomisturador durante 5 min à temperatura ambiente. Armazenar as proteínas digeridas a -20 ° C.
  2. Enriquecimento de fosfopéptidos usando uma coluna capilar MOPH.
    1. Lavar a coluna com 100 mL de uma mistura 4: 1 de acetonitrilo contendo um ácido trif luoroacético a 0,1% durante 10 min a um caudal de 1 mL / min. Bombear a digestão da proteína através da coluna a 2 mL / min durante 30 min.
    2. Lavar os peptídeos não fosforilados novamente com uma mistura 4: 1 de acetonitrilo contendo um ácido trif luoroacético a 0,1% durante 10 min a um caudal de 1 mL / min. Lava-se com água durante 10 min a um caudal de 1 mL / min.
    3. Fosfopéptidos eluir usando uma solução tampão de pH 7 fosfato 250 mM bombeada a 1 mL / min durante 15 min. Recolhe-se o eluente num frasco e dessalinizar a solução utilizando um protocolo padrão de 19. Preparar um ácido / ml 2,5-di-hidroxibenzóico 2 mg a usá-lo como a matriz para a espectrometria de massa de laser assistida por matriz dessorção / ionização de tempo-de-voo (MALDI-TOF-MS). Tirado 2 ul de ácido 2,5-di-hidroxibenzóico em ponta para eluir o phosphopeptides e identificá-los diretamente sobre a placa MALDI.
    4. Analisar as manchas por MALDI-TOF-MS e regenerar a coluna por lavagem com água e em seguida com metanol.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Uma ilustração esquemática do crescimento PCP sobre a superfície dos poros do monólito de polímero orgânico é mostrado na Figura 1. Nesta figura, ilustra-se o inicial de Fe (III) átomos retido sobre a superfície dos poros do monólito de polímero original é coordenado com grupos funcionais carboxílicos . Utilizando o protocolo descrito aqui ligando orgânico adicional e iões Fe (III) são adicionados à superfície, formação de uma rede de coordenação porosa dentro do monólito de polímero. A Figura 1...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

O monólito de polímero original contém grupos funcionais carboxílicos capazes de ligar-se a metais. Coordenando os locais de metal iniciais sobre o material original, somos capazes de crescer um revestimento PCP (Figura 1A), que incorpora uma série de sites de metal adicionais moldando uma rede microporosa. Isso faz com que os materiais apresentados MOPH atraentes para os procedimentos de extracção ou purificação, onde estão envolvidas as espécies metálicas, tais como a técnica de cromatografia de afini...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi realizado na Fundição Molecular, Laboratório Nacional Lawrence Berkeley e apoiado pelo Escritório de Ciência, Escritório de Ciências Básicas de Energia, Divisão de Instalações de Usuários Científicos do Departamento de Energia dos EUA, sob o Contrato No. DE-AC02–05CH11231. O apoio financeiro de FM por uma bolsa ME-Fulbright e AS pela Comissão de Ensino Superior do Paquistão é reconhecido com gratidão.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Capilares revestidos com poliimidaPolymicro TechnologiesTSP100375100 μ m i.d.
3-(trimetoxissilil) propil metacrilato, 98%Sigma-Aldrich440159
estireno, 99%Sigma-AldrichW323306
Divinilbenzeno de grau técnico, 80%Sigma-Aldrich414565
ácido metacrílico, 98%MallinckrodtMK150659
Tolueno, etc; 99,5%EMD produtos químicosMTX0735-6
Isooctano, ≥ 99,5%Sigma-Aldrich650439
2,2 '-azobisisobutironitrila, 98%Sigma-Aldrich441090
Óxido de alumínio (alumina básica)Sigma-Aldrich199443
Cloreto de ferro (III) hexahidratado, 97%Sigma-Aldrich236489
ácido 1,3,5-benzenotricarboxílico, 95%Sigma-Aldrich482749
Acetonitrila, ≥ 99,5%Sigma-Aldrich360457
bicarbonato de amônio, ≥ 99,5%Sigma-Aldrich9830
Ácido trifluoroacético, ≥ 99%Sigma-Aldrich302031
Etanol, ≥ 99,8%Sigma-Aldrich2854
Iodoacetamida, ≥ 99%Sigma-AldrichI1149
Ditiotreitol, ≥ 99%Sigma-Aldrich43819
Fosfato de sódio monobásico di-hidratado, ≥ 99%Sigma-Aldrich71505
Fosfato de sódio dibásico di-hidratado, ≥ 99%Sigma-Aldrich71643
Ácido fosfórico, ≥ 85%Sigma-Aldrich438081
ácido 2,5-dihidroxibenzóico, ≥ 99%Sigma-Aldrich85707
TripsinaSigma-AldrichT8003Pâncreas
β -caseínabovina Sigma-AldrichC6905Leite bovino
ZipTip ponteiras de pipetaMerck MilliporeZTC18S096resina C18

Referências

  1. Li, H., Eddaoudi, M., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. Design and synthesis of an exceptionally stable and highly porous metal-organic framework. Nature. 402, 276-279 (1999).
  2. Kitagawa, S., Kitaura, R., Noro, S. i Functional porous coordination polymers. Angew. Chem. Int. Ed. 43, 2334-2375 (2004).
  3. Furukawa, H., Cordova, K. E., O’Keeffe, M., Yaghi, O. M. The chemistry and applications of metal-organic frameworks. Science. 341, 974(2013).
  4. Ma, S., Zhou, H. C. Gas storage in porous metal-organic frameworks for clean energy applications. Chem. Commun. 46, 44-53 (2010).
  5. Li, J. R., Sculley, J., Zhou, H. C. Metal-organic frameworks for separations. Chem. Rev. 112, 869-932 (2012).
  6. Lee, J., Farha, O. K., Roberts, J., Scheidt, K. A., Nguyen, S. T., Hupp, J. T. Metal-organic framework materials as catalysts. Chem. Soc. Rev. 38, 1450-1459 (2009).
  7. Gu, Z. Y., Yang, C. X., Chang, N., Yan, X. P. Metal-organic frameworks for analytical chemistry: From sample collection to chromatographic separation. Acc. Chem. Res. 45, 734-745 (2012).
  8. Ahmad, R., Wong-Foy, A. G., Matzger, A. J. Microporous coordination polymers as selective sorbents for liquid chromatography. Langmuir. 25, 11977-11979 (2009).
  9. Yang, C. X., Yan, X. P. Metal-organic framework MIL-101(Cr) for high-performance liquid chromatographic separation of substituted aromatics. Anal. Chem. 83, 7144-7150 (2011).
  10. Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. Control of the coordination status of the open metal sites in metal-organic frameworks for high performance separation of polar compounds. Langmuir. 28, 6802-6810 (2012).
  11. Gu, Z. Y., Yan, X. P. Metal-organic framework MIL-101 for high-resolution gas-chromatographic separation of xylene isomers and ethylbenzene. Angew. Chem. Int. Ed. 49, 1477-1480 (2010).
  12. Chang, N., Gu, Z. Y., Yan, X. P. Zeolitic imidazolate framework-8 nanocrystal coated capillary for molecular sieving of branched alkanes from linear alkanes along with high-resolution chromatographic separation of linear alkanes. J. Am. Chem. Soc. 132, 13645-13647 (2010).
  13. Yu, L. Q., Xiong, C. X., Yan, X. P. Room temperature fabrication of post-modified zeolitic imidazolate-90 as stationary phase for open-tubular capillary electrochromatography. J. Chromatogr. A. 1343, 188-194 (2014).
  14. Fu, Y. Y., Yang, C. X., Yan, X. P. Incorporation of metal-organic framework UiO-66 into porous polymer monoliths to enhance the liquid chromatographic separation of small molecules. Chem. Commun. 49, 7162-7164 (2013).
  15. Lin, C. L., Lirio, S., Chen, Y. T., Lin, C. H., Huang, H. Y. A novel hybrid metal-organic framework-polymeric monolith for solid-phase extraction. Chem. Eur. J. 20, 3317-3321 (2014).
  16. Svec, F. Porous polymer monoliths: Amazingly wide variety of techniques enabling their preparation. J. Chromatogr. A. 1217, 902-924 (2010).
  17. Monolithic HPLC Columns. , Available from: http://www.phenomenex.com/onyx (2015).
  18. Bia Separations. , Available from: http://www.biaseparations.com/ (2015).
  19. Shekhah, O., et al. Step-by-step route for the synthesis of metal-organic frameworks. J. Am. Chem. Soc. 129, 15118-15119 (2007).
  20. Shekhah, O., Fu, L., Belmabkhout, Y., Cairns, A. J., Giannelis, E. P., Eddaoudi, M. Successful implementation of the stepwise layer-by-layer growth of MOF thin films on confined surfaces: mesoporous silica foam as a first case study. Chem. Commun. 48, 11434-11436 (2012).
  21. Saeed, A., Maya, F., Xiao, D. J., Naham-ul-Haq, M., Svec, F., Britt, D. K. Growth of a highly porous coordination polymer on a macroporous polymer monolith support for enhanced immobilized metal ion affinity chromatographic enrichment of phosphopeptides. Adv. Funct. Mater. 24, 5797-5710 (2014).
  22. Krenkova, J., Lacher, N. A., Svec, F. Control of selectivity via nanochemistry: Monolithic capillary column containing hydroxyapatite nanoparticles for separation of proteins and enrichment of phosphopeptides. Anal. Chem. 82, 8335-8341 (2010).
  23. Jabeen, F., et al. Silica-lanthanum oxide: Pioneer composite of rare-earth metal oxide in selective phosphopeptides enrichment. Anal. Chem. 84, 10180-10185 (2012).
  24. Hussain, D., et al. Functionalized diamond nanopowder for phosphopeptides enrichment from complex biological fluids. Anal. Chim. Acta. 775, 75-84 (2013).
  25. Aprilita, N. H., et al. Poly(glycidyl methacrylate/divinylbenzene)-IDA-FeIII in phosphoproteomics. J. Proteom. Res. 4, 2312-2319 (2005).
  26. Lo, C. Y., Chen, W. Y., Chen, C. T., Chen, Y. C. Rapid enrichment of phosphopeptides from tryptic digests of proteins using iron oxide nanocomposites of magnetic particles coated with zirconia as the concentrating probes. J. Proteom. Res. 6, 887-893 (2007).
  27. Aryal, U. K., Ross, A. R. S. Enrichment and analysis of phosphopeptides under different experimental conditions using titanium dioxide affinity chromatography and mass spectrometry. Rapid Commun. Mass. Spectrom. 24, 219-231 (2010).
  28. Select Iron Affinity Gel Technical Bulletin. , Available from: https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Bulletin/p9740bul.pdf (2015).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Etiquetas

Estrutura Metalorg nicaMon lito Polim rico MacroporosoEnriquecimento de Fosfopept deosFormato de Coluna CapilarCrescimento Controlado Baseado em Solu oCromatografia de Afinidade por ons Met licosEspectrometria de Massa por Ioniza o por Dessor o a Laser Assistida por Matriz com Tempo de VooEspectroscopia no Infravermelho com Transformada de FourierAn lise Termogravim trica
Preparação de altamente poroso Coordenação Polymer Revestimentos em macroporosas Polymer Monólitos para o enriquecimento avançado de Fosfopeptídeos
Entre em contato
Recomendar à biblioteca

Privacidade

Termos de uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos os direitos reservados.