As células T Capturar Bactérias por Transinfection das dendríticas

Aranzazu Cruz-Adalia; Guillermo Ramírez-Santiago; Mónica Torres-Torresano; Raquel Garcia-Ferreras; Esteban Veiga Chacón

doi:10.3791/52976

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Artigo de método

As células T Capturar Bactérias por Transinfection das dendríticas

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DOI:

10.3791/52976

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13 de janeiro de 2016

Aranzazu Cruz-Adalia¹ , Guillermo Ramírez-Santiago¹^,² , Mónica Torres-Torresano¹^,² , Raquel Garcia-Ferreras¹^,² , Esteban Veiga Chacón¹

¹Cellular and Molecular Biology, Spanish National Research Council (CSIC), Spanish National Biotechnology Centre (CNB-CSIC), ²Hospital de Santa Cristina, Healthcare Research Institute Princesa Hospital (IIS-Princesa)

Neste artigo

Resumo

Aqui é apresentado um protocolo para medir a captura de bactérias por células ^T CD4 +, o qual ocorre durante a apresentação de antigénio através de células dendríticas transinfection pré-infectadas (DC). Mostramos como executar os passos necessários: isolamento de células primárias, infecção de formação conjugado celular DC, DC / T, e medição da transfecção de células T bacteriana.

Resumo

Recentemente, mostramos, ao contrário do que é descrito, que as células T CD4⁺, o paradigma das células imunes adaptativas, capturam bactérias de células dendríticas (DCs) infectadas por um processo chamado transinfecção. Aqui, descrevemos a análise do processo de transinfecção, que ocorre durante o curso da apresentação do antígeno. Esse processo foi revelado usando células T CD4⁺ de camundongos OTII transgênicos, que carregam um receptor de células T (TCR) específico para um peptídeo de ovoalbumina (OVAp), que, portanto, pode formar complexos imunes estáveis com células dendríticas infectadas carregadas com esse OVAp específico. A dinâmica das bactérias que expressam proteína fluorescente verde (GFP) durante a transmissão de células DC-T pode ser monitorada por imagens de células vivas e a quantificação da transinfecção bacteriana pode ser realizada por citometria de fluxo. Além disso, a transinfecção pode ser quantificada por um método mais sensível baseado no uso de gentamicina, um antibiótico aminoglicosídeo não permeável que mata bactérias extracelulares, mas não intracelulares. Este método clássico foi usado anteriormente em microbiologia para estudar a eficiência de infecções bacterianas. Explicamos o protocolo do processo completo, desde o isolamento das células primárias até a quantificação da transinfecção.

Introdução

Quando um agente patogénico infecta o seu hospedeiro, geralmente há uma ativação da resposta imune inata e adaptativa, necessários para o apuramento bacteriana. A imunidade inata é a primeira linha de defesa que impede a maioria das infecções. A imunidade inata em distinguir a maneira como os elementos precisos que são conservadas entre grandes grupos de microrganismos (padrões moleculares associados a agentes patogénicos, PAMPS ^1). Os mecanismos da imunidade inata incluem barreiras físicas tais como a pele, as barreiras químicas (péptidos antimicrobianos, lisozima) e os leucócitos inatos, que incluem os fagócitos (macrófagos, neutrófilos, e células dendrí....