Até o momento, os defeitos de tecido espesso são normalmente reconstruídos com a aplicação de retalhos de tecido autólogo ou tecidos projetados. Neste protocolo, apresentamos um novo método de engenharia de retalho de tecido vascularizado com pedículo autólogo, para servir como substituto dos retalhos autólogos.
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Artigo de método
Projetado retalho do músculo vascularizada
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Um dos principais fatores que limitam a espessura de uma construção tecidual e sua consequente viabilidade e aplicabilidade in vivo, é o controle do suprimento de oxigênio para o microambiente celular, pois a difusão passiva é limitada a uma camada muito fina. Embora vários materiais tenham sido descritos para restaurar a integridade de defeitos de espessura total da parede abdominal, nenhum material ainda se mostrou ideal, devido à baixa vascularização do enxerto, rejeição tecidual, infecção ou propriedades mecânicas inadequadas. Este protocolo descreve um meio de engenharia de um retalho totalmente vascularizado, com espessura relevante para a reconstrução do tecido muscular. As construções de ácido poli L-láctico / ácido poli lático-co-glicólico incorporadas em células são implantadas ao redor da artéria e veia femoral do camundongo e mantidas in vivo por um período de uma ou duas semanas. O enxerto vascularizado é então transferido como um retalho em direção a um defeito de espessura total feito no abdome. Essa técnica substitui a necessidade de sacrifícios de tecido autólogo e pode permitir o uso de retalhos vascularizados projetados in vitro em muitas aplicações cirúrgicas.
Introdução
Defeitos da parede abdominal, muitas vezes surgem após trauma grave, o tratamento do câncer, queimaduras e remoção de malha infectado. Esses defeitos envolvem frequentemente perda de tecido significativa, exigindo procedimentos cirúrgicos complicados e apresentando um grande desafio para os cirurgiões plásticos de reconstrução 1-4. Pesquisadores de engenharia de tecidos que procuram novas fontes de tecidos artificiais têm explorado diferentes materiais, fontes de células e fatores de crescimento. Restaurações de sucesso de vários tecidos, tais como 5,6 traqueia, bexiga 7, 8, córnea, ossos e pele 9 10, ....
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Protocolo
Todos os estudos com animais foram aprovados pelo Comitê de Ética de Experimentação Animal do Technion. Para este procedimento, utilizaram-se ratinhos nus atímicos, para evitar a rejeição imunológica. Se utilizar outro tipo de mouse, os ratos devem ser raspada antes do procedimento cirúrgico e administração de ciclosporina (ou outro substituto anti-rejeição) é recomendado.
1. Preparação e andaime celular Embedding
- Prepare andaimes compostas de mistura 1: 1 de poli-L-láctico-ácido (PLLA) e poli láctico-co-glicólico-ácido (PLGA), da seguinte forma:
- Dissolve-se 500 mg de PLLA e 500 mg de PLGA em 10 mL de clorofórmio.
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Resultados
Vascularização do enxerto e perfusão in vivo
Os enxertos foram implantadas uma ou duas semanas, antes da sua transferência como abas axiais. Em um e duas semanas pós-implantação, a observação bruta da área do enxerto revelou enxertos de tecidos vascularizados e viáveis. Estes enxertos provou ser altamente vascularizado, tal como determinado por imunocoloração positiva de CD31 (Figura 1A), e altamente perfundidos, como evidenciado por injecção na veia da cauda de ult.......
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Discussão
Os avanços na engenharia de tecidos foram atingidos com uma crescente demanda por tecidos substitutos para a reconstrução de vários tipos de tecido. Uma variedade de sintéticos e biológicos 1,17,18 14-16 materiais, bem como métodos de fabricação foram avaliados quanto à sua capacidade para responder a estas exigências. No entanto, apesar dos progressos no tratamento clínico e em engenharia de tecidos, a restauração de defeitos da parede abdominal de espessura total continua a ser um desafio. Um tec.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi apoiada pelo FP7 European Research Council Grant 281501, ENGVASC.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| pequena tesoura reta fina | Ferramentas de Fine Science (FST) | 14090-09 | |
| tesoura de mola | Ferramentas de Ciência Fina (FST) | 15003-08 | |
| pinça reta com ponta fina | Ferramentas de Ciência Fina (FST) | 11251-20 | |
| pinça serrilhada | Porta-agulhas Fine Science Tools (FST) | 11050-10 | |
| Ferramentas Fine Science (FST) | 12500-12 | ||
| Cauterizador de pequenos vasos | Ferramentas de Ciência Fina (FST) | 18000-00 | |
| Duratears | Alcon | 5686 | |
| Sedaxylan | Euravet | DJ03 | |
| Clorketam 1000 | Vetoquinol | 4A0726B | |
| Buprenorfina | vetmarket | B15100 | |
| 4-0 suturas de seda | Suturas Assut | 647 | |
| 6-0 suturas de polipropileno | Suturas Assut | 9351F | |
| 8-0 suturas de seda | Suturas Assut | 684568 | |
| Seringa de insulina (agulha de 6 mm) | BD | 324911 | |
| Vevo 2100 sistema de ultrassom de alta resolução | VisualSonics inc. | ||
| Transdutor não linear MS250 | VisualSonics inc. | ||
| Agente de contraste não direcionado a micromarcadores | VisualSonics inc. | VS-11694 | |
| cateter de veia caudal | VisualSonics inc. | VS-11912 | |
| Vevo 2100 software | VisualSonics inc. | ||
| dextrano conjugado com isotiocianato de fluoresceína | Sigma | FD500S | |
| Matlab | Mathworks, MA, USA | ||
| Kimwipes | Kimtech | 34120 | |
| solução de desmascaramento de antígeno | Vector laboratories | H-3300 | |
| anti-CD31 anticorpo | Abcam | ab28364 | |
| biotinilado anti-coelho (secundário) anticorpo de cabra Vector | laboratories | BA-1000 | |
| estreptavidina-peroxidase | Jackson | 016-030-084 | |
| Solução de hamatoxilina de Mayer | Kit de substrato Sigma-Aldrich | MHS-16 | |
| aminoetilcarbazol (AEC) | Life technologies, Invitrogen | 00-2007 | |
| Vectamount | Vector laboratórios | H-5501 |
Referências
- Engelsman, A. F., van der Mei, H. C., Ploeg, R. J., Busscher, H. J. The phenomenon of infection with abdominal wall reconstruction. Biomaterials. 28 (14), 2314-2327 (2007).
- De Coppi, P., et al. Myoblast-acellular ....
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Reimpressões e permissões
