A engenharia de tecidos muitas vezes inclui expansão in vitro, a fim de criar auto-enxertos para regeneração de tecidos. Neste estudo, um método para a expansão do tecido, a regeneração, e a reconstrução in vivo, foi desenvolvida de modo a minimizar o processamento de materiais biológicos e as células fora do corpo.
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Artigo de método
O tecido triturado em Compressed Collagen: Um BioTransplant contendo celular para o reparo Reconstructive Single-encenado
Neste artigo
Resumo
Resumo
As técnicas convencionais de expansão celular e transplante de células autólogas para fins de engenharia de tecidos podem ser realizadas em instalações de cultura de células humanas especialmente equipadas. Esses métodos incluem o isolamento de células em suspensão de célula única e vários eventos trabalhosos e demorados antes do transplante de volta ao paciente. Estudos anteriores sugerem que o próprio corpo poderia ser usado como um biorreator para expansão celular e regeneração de tecidos, a fim de minimizar manipulações ex vivo de tecidos e células antes do transplante para o paciente. O objetivo deste estudo foi demonstrar um método para coleta de tecidos, isolamento de epitélio contínuo, picagem do epitélio em pequenos pedaços e incorporação em um biomaterial de três camadas. O biomaterial de três camadas serviu então como um veículo de entrega, para permitir o manuseio cirúrgico, a troca de nutrição durante o transplante e uma degradação controlada. O biomaterial consistia em duas camadas externas de colágeno e um núcleo de um polímero mecanicamente estável e lentamente degradável. O epitélio picado foi incorporado a uma das camadas de colágeno antes do transplante. Ao picar o tecido epitelial em pequenos pedaços, os pedaços puderam ser espalhados e, assim, a propagação das células foi estimulada. Após a tomada inicial dos transplantes, a expansão e reorganização celular ocorreriam e a matriz extracelular amadureceria para permitir o crescimento de capilares e nervos e posterior maturação da matriz extracelular. A técnica minimiza as manipulações ex vivo e permite a coleta de células, a preparação do autoenxerto e o transplante para o paciente como uma intervenção simples em um estágio. No futuro, a expansão do tecido poderá ser iniciada em torno de um molde 3D dentro do próprio corpo, de acordo com as necessidades específicas do paciente. Além disso, a técnica pode ser realizada em um ambiente cirúrgico comum sem a necessidade de instalações sofisticadas de cultura de células.
Introdução
A maioria dos estudos de engenharia de tecidos de transplante da pele e do tracto urogenital incluem colheitas de células autólogas a partir de tecido saudável e a expansão das células em instalações de cultura de células especialmente equipados 1,2.
Após a expansão das células, as células são geralmente armazenadas para utilização posterior quando o paciente está preparado para receber o auto-enxerto. congeladores de azoto permitir o armazenamento a longo prazo a baixas temperaturas de -150 ° C ou inferior. O processo de congelamento deve ser cuidadosa e controlada, a fim de não perder as células. Um risco de morte celular é a....
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Protocolo
Todos os protocolos de animais foram pré-aprovados pelo Comitê County a Estocolmo em animais e todos os procedimentos conformes com os regulamentos para o uso de animais, bem como leis federais relevantes.
1. Procedimentos de Animais
- Preparando o animal para a cirurgia
- Preparar a mesa cirúrgica com todos os materiais e instrumentos necessários para a operação em condições de esterilidade. Realizar a cirurgia exclusivamente sob condições estéreis, para reduzir o risco de infecção e optimizar as condições de sobrevivência em cirurgia.
- Jejuar o animal durante 12 horas antes da cirurgia e medir o seu peso. Admini....
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Resultados
Este estudo apresenta um método que mostra como produzir um biomaterial para transplante usando compressão de plástico de colágeno e tecido picada.
Mucosa da bexiga e da pele pode ser colhida e, em seguida, triturada mecanicamente em partículas pequenas (Figura 3). Por compressão de plástico, as partículas trituradas são incorporados dentro do andaime compósito composto por um polímero biodegradável colocado centralmente que é mecanicamente forte dentro de camadas exteriores.......
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Discussão
Este estudo apresenta uma abordagem easy-to-use para produzir manchas de parede da bexiga com tecido autólogo para o transplante na mesa cirúrgica. As manchas são formados pela combinação de um tricô polímero biodegradável no meio e colagénio com e sem tecido moído nas superfícies exteriores em combinação com compressão de plástico. Compressão plástica é um método previamente descrito por outros autores e pode ser definido como uma expulsão rápida do fluido a partir de géis de colagénio 12,13. O tecido tritur.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Os autores agradecem à Sociedade Sueca de Pesquisa Médica, à Fundação Promobilia, à Fundação Princesa Lovisa, à Fundação Maçônica para o Bem-Estar das Crianças, à Sociedade Sueca de Medicina, à Fundação Solstickan, ao Karolinska Institutet e à Câmara Municipal de Estocolmo pelo apoio financeiro.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cateter de silicone 10-French | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | ||
| DMEM 10x | Gibco | 31885-023 | Seção de compressão plástica 4 |
| placas de 24 poços | Falcon | 08-772-1 | Seção de compressão plástica 4 |
| 3',3',5-Triiodotironina | Sigma-Aldrich | IRMM469 | In vitro cultura; Seção 5 |
| 4% PFA | Labmed Solutions | 200-001-8 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| 70% etanol | Histolab | Imunocitoquímica; Seção 6 | |
| Kit ABC Elite: Kit de detecção de biotina-estreptavidina | Vector | PK6102 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Etanol absoluto | Histolab | 1399.01 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Adenina | Sigma-Aldrich | A8626 | In vitro cultura; Seção 5 |
| Atropina 25 μ g/kg | Temgesic, RB Pharmaceuticals, Grã-Bretanha | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Azaperone 2 mg/kg | Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Áustria | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Biossegurança Nível 2 capuz | Compressão plástica; Seção 4 | ||
| Solução de bloqueio: Soro normal da mesma espécie que o anticorpo secundário secundário foi gerado. | Vetor | A solução de bloqueio depende da origem do primeiro anticorpo | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Buprenorfina 45 μ g / kg | de Atropina, Mylan Inc, Canonsburg, PA | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Carprofeno 3  mg/kg | Rimadyl, Orion Pharma, Suécia | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Gluconato de clorexidina | Hibiscrub 40 mg/mL, Regent Medical, Inglaterra | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 Toxina | |
| da cólera | Sigma-Aldrich | C8052 | Cultura in vitro; Seção 5 |
| Frasco de Coplin: frasco de coloração para ebulição | Histolab | 6150 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Molde inoxidável (33 mm x 22 mm x 10 mm) compressão plástica feita sob medida | ; Seção 4 | ||
| DMEM | Gibco | 3188-5023 | Seção de compressão de plástico 4. Mantenha no gelo ao usá-lo em compressão plástica |
| Fator de crescimento epidérmico | Sigma-Aldrich | E9644 | In vitro cultura; Seção 5 |
| Ethilon (monofilamento não absorvível para suturas de pele) | Ethicon | Surgery, Seção 1 | |
| Soro fetal bovino (FBS) | Gibco | 10437-036 | Seção de compressão plástica 4 |
| Fórceps (Adison com dente) | Preparando o animal para cirurgia, Seção 1 | ||
| Gaze (Gazin Mullkompresse) | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | ||
| Ham's F12 | Gibco | 31765-027 | Seção de compressão plástica 4 |
| Hematoxilina | Histolab | 1820 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Câmara de umidade | DALAB | Imunocitoquímica; Seção 6 | |
| Hidrocortisona | Sigma-Aldrich | H0888 | In vitro cultura; Seção 5 |
| Solução de peróxido de hidrogênio 30% | Sigma-Aldrich | H1009 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Cultura de insulina | Sigma-Aldrich | I3536 | in vitro; Seção 5 |
| Isoflurano | Isoflurano, Baxter, Deerfield, IL | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Lidocaína 5 mg / ml | Xilocaína, AstraZeneca, Suécia | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Lucose 25 mg/ml | Baxter, Deerfield, IL | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Caneta marcadora caneta de papanicolau | Sigma-Aldrich | Z377821-1EA | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Medetomidina 25 μ g/kg | Domitor, Orion Pharma, Suécia | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Dispositivo de picagem | Applied Tissue Technologies LLC | Preparação de tecido picado, seção 2 | |
| Monocryl (monofilamento absorvível) | Ethicon | Surgery, Seção 1 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| NaOH 1 N | Merck Millipore | 106462 | Seção de compressão de plástico 4 e cultura de células |
| Malha de nylon, 110 μ Tamanho de poro de espessura M 0,04 compressão plástica do sqmm | ; Seção 4 | ||
| Oculentum simplex APL: pomada para proteção ocular | APL | Vnr 336164 | Surgery, Section 1 |
| PBS | Gibco | 14190-094 | Seção de compressão plástica 4 |
| Penicilina-Estreptomicina | Gibco | 15140-122 | Seção de compressão plástica 4 |
| Fenobarbitúrico 15 mg/kg | Pentobarbital, APL, Suécia | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| PCL Tecido | Compressão plástica; Seção 4 | ||
| Colágeno de cauda de rato | First LINK, Ltd, UK | 60-30-810 | Compressão de plástico seção 4, mantenha no gelo |
| Lâmina de bisturi - 15 | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | ||
| Tesoura de | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | ||
| Malha de aço inoxidável, 400 μ Compressão plástica grossa do | de M; Secção 4 | ||
| Luvas | esterilizadas Preparar o animal para a cirurgia, Secção 1 | ||
| Batas esterilizadas | Preparar o animal para a cirurgia, Secção 1 | ||
| estéreis | |||
| Sterilium | Bode Chemie HAMBURG | Preparar o animal para a cirurgia, Secção 1 | |
| Sutura Fio Ethilon | Preparar o animal para a cirurgia. cirurgia, Seção 1 | ||
| TE-solução (solução de desmascaramento de antígeno) consiste em 10 mM Tris e 1 mM EDTA, pH 9,0 | 10 mM Tris/1 mM EDTA, ajustar o pH para 9,0 | ||
| Hipoclorito de tiletamina 2,5 mg/kg | Preparação do animal para a cirurgia, Secção 1 | ||
| Transferrina | Sigma-Aldrich | T8158 | Cultura in vitro; Seção 5 |
| Base Trizma, H2NC | Sigma-Aldrich | T6066 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Kit Vector VIP: Kit de substrato de enzima peroxidase | Vector | SK4600 | Imunocitoquímica; Seção 6 |
| Vicryl (braded absorvível) | Cirurgia de Eticon | , Seção 1 | |
| Tampão Tris pH 7,6 (tampão de lavagem) | Solução TE: Faça 10x (0,5 M Tris, 1,5 M NaCl) misturando: 60,6 g Tris (Trizma Base, H2NC(CH2OH)3, M = 121,14 g / mol), adicione 800 ml de água destilada, ajuste o pH até 7,6, adicione 87,7 g de NaCl e encha até 1.000 ml com água destilada. Diluir a 1x com água destilada. | ||
| Resolução X-tra (solvente) | DALAB | 41-5213-810 | Imunocitoquímica; Seção 6. Uso sob hotte |
| Hipoclorito de zolazepam | Zoletil, Virbac, França | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Tiras de cera depilatória | Veet | Preparando o animal para a cirurgia, Seção 1 | |
| Pentobarbital sódico | Lundbeck | Terminação, Seção 3 |
Referências
- Rheinwald, J. G., Green, H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6, 331-343 (1975).
- Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. Engineering of multilayered uri....
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Reimpressões e permissões
