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Artigo de método

Motor e hipocampo aprendizagem espacial Dependente e Avaliação de Memória de Referência em um rato transgénico modelo da doença de Alzheimer com AVC

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DOI:

10.3791/53089

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22 de março de 2016

 ,  ,  ,  , 
1Anatomy and Cell Biology, Schulich School of Medicine and Dentistry, Western University

Neste artigo

Resumo

Para investigar a doença co-mórbida de Alzheimer (DA) ea condição acidente vascular cerebral em um novo modelo, três tarefas de comportamento estão descritos que avaliar tanto o controle motor e comportamentos cognitivos. Essas tarefas incluem a tarefa beam-pé, a tarefa cilindro e Morris labirinto de água.

Resumo

doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa debilitante que resulta em perda de memória e neurodegeneração. Enquanto a idade é um importante fator de risco para a DA, acidente vascular cerebral, também tem sido apontada como um fator de risco e um fator agravante. A co-morbidade do acidente vascular cerebral e AD resultados no controle motor relacionados com o acidente vascular cerebral piora e défices cognitivos relacionados com a AD quando comparado com cada condição sozinho. Para modelar a condição combinada de acidente vascular cerebral e AD, um novo modelo de rato transgénico de AD, com uma forma mutante da proteína precursora da amilóide (uma proteína chave envolvida no desenvolvimento de AD) incorporada no seu DNA, é dado um pequeno curso do estriado unilateral.

Para um modelo com a combinação de ambos acidente vascular cerebral e AD, testes comportamentais que avaliam o controle motor relacionados com o acidente vascular cerebral, locomoção e função cognitiva relacionada com a AD deve ser implementado. A tarefa cilindro envolve, um aparelho multiuso de custo eficiente que avalia o uso do motor forelimb espontânea. Nesta tarefa, um rato é colocado num dispositivo cilíndrico, onde o rato espontaneamente traseira e contacte a parede do cilindro com as suas patas dianteiras. Estes contactos são considerados de uso do motor dos membros anteriores e quantificados durante a análise de vídeo após o teste. Outra tarefa motora econômica implementada é a tarefa beam-pé, que avalia o controle do membro anterior, o controle dos membros posteriores e locomoção. Esta tarefa envolve uma caminhada de ratos através de uma viga de madeira que permite a avaliação do controle motor do membro através da análise das folhas de forelimb, deslizamentos dos membros posteriores e cai. Avaliação de aprendizagem e memória é completada com labirinto aquático de Morris para este paradigma comportamental. O protocolo começa com a aprendizagem espacial, em que o rato localiza uma plataforma escondida estacionária. Após a aprendizagem espacial, a plataforma é removida e tanto a curto prazo e da memória de referência espacial a longo prazo é avaliada. Todos os três destas tarefas são sensíveis às diferenças comportamentais e concluída no prazo de 28 dias para este modelo, tornando este parágrafotempo-eficiente digma e custo-eficiente.

Introdução

Doença de Alzheimer (AD) é a forma mais prevalente de demência na população idosa e uma doença neurodegenerativa debilitante. Histopatologicamente, AD apresenta-se como placas amilóides, emaranhados neurofibrilares e perda neuronal. As placas amilóides consistem principalmente de péptido beta-amilóide (Ap) que tenha sido produzida por meio de uma clivagem proteolítica alterada da proteína precursora de amilóide (APP) por β-secretase e enzimas y-secretase 1,2,3. O produto de clivagem, Aâ, depósitos no cérebro criação de placas amilóides patológicas e tem efeitos tóxicos no cérebro que pode levar a dificuldades de aprendizagem característicos e a perda de memória. Todos estes passos em conjunto são referidos como o "hipótese amilóide cascata" 3,4. Embora esta hipótese é importante quando se investiga AD, outras alterações celulares foram encontrados para preceder estas formações de placa que se desvia do caminho amilóide cascata originais. esses outrosalterações celulares são pensados ​​para contribuir para a perda de memória cedo, deficiências e outras disfunções cognitivas envolvidas na AD antes da formação de placas 3,5,6 aprendizagem.

Com AD tornando cada vez mais prevalente, fatores de risco para o desenvolvimento de AD estão se tornando um foco extremamente importante da pesquisa. Embora a idade é o principal fator de risco para formas esporádicas de AD, outros fatores de risco foram identificados, incluindo acidente vascular cerebral 7,8. Acidente vascular cerebral não só é um factor de risco, mas pode também exacerbar as demências já presentes. Por exemplo, clinicamente, a progressão da doença de Alzheimer foi mostrada para ser pior nos pacientes que tinham experimentado anteriormente derrame 9. Além disso, o aumento da expressão de APP e a acumulação de Ap tem sido encontrada em modelos animais experimentais de toxicidade Ap combinado com acidente vascular cerebral induzido 10,11. Uma vez que não é importante desta interacção entre acidente vascular cerebral e AD, é essencial que estas duas patologias ser mais pesquisadojuntos em modelos de co-mórbidas para melhor compreender a fisiopatologia e comportamentos implicado em ambas as condições.

Para investigar as condições co-mórbidas, um modelo adequado tiveram de ser desenvolvidos em que um acidente vascular cerebral poderia interagir com Ab para produzir patologia AD-like. Pela primeira vez, um rato transgénico APP21 que tem um gene de APP humana mutada incorporada no seu DNA foi usado para realizar um modelo apropriado de AD. As mutações são a missense dupla sueca e Indiana mutações única missense, que ambos têm sido implicados em formas familiares de AD 4,8,12. Na ausência de um insulto adicional, este modelo de rato idades sem o desenvolvimento das placas de Ap característicos ou neurofibrilares emaranhados 12. Por conseguinte, numa tentativa de induzir a patologia comportamental AD-like, um pequeno curso é introduzido no corpo estriado direito de imitar os pequenos derrames cerebrais subcorticais muitas vezes presentes em pacientes com demência 9. O acidente vascular cerebral no ra transgênica APP21t incorpora a condição de co-mórbidas e permite a investigação de diversos tipos de alterações comportamentais implicados em ambas as condições de doença. Em particular, esta indução de déficits AD-como patologia e cognitivas no rato adulto permite-nos investigar as primeiras alterações moleculares e cognitivos anteriores AD.

Como o objetivo é determinar os primeiros sinais de mudanças comportamentais e uma vez que ambos acidente vascular cerebral e AD têm patologias comportamentais muito distintas, ao estudar o modelo de co-mórbidas, tarefas de comportamento precisa avaliar uma variedade de fenótipos comportamentais. Há uma bateria de testes relativamente sensíveis que podem ser feitas para analisar o comportamento motor e cognitivo em modelos de roedores que envolvem uma variedade de paradigmas e equipamentos. Para analisar especificamente a função forelimb e motor dos membros posteriores, a tarefa tarefa cilindro e feixe-pé foram implementadas para detectar déficits motores e monitorar a locomoção neste modelo. Outras tarefas sensíveis destinados a avaliar especificamente fina fohabilidade relimb motor (ou seja, a tarefa escadaria e única tarefa atingindo pellet) exigem privação alimentar 11,13,14. Para evitar qualquer um dos efeitos conhecidos da privação alimentar sobre patologias de doença 15,16,17, esses testes foram considerados inadequados para este estudo. A tarefa cilindro avalia o uso de membros anteriores espontânea da ratazana durante a criação de um ambiente novo e pode detectar assimetria entre os membros anteriores em ratos com AVC unilateral 10,18. Uma grande vantagem para esta tarefa é que o aparelho pode ser utilizada para outras tarefas de comportamento, tais como o Porsolt forçado tarefa mergulho 19. Ao contrário do que a tarefa de cilindro, a tarefa de feixe-pé também permite a análise de membro posterior e pata dianteira de controlo do motor, além de locmotion 10,14. Feixe de passeio inclui um componente locomotor, um componente equilíbrio e colocação dos pés qualificado. Ambos os testes são custo-eficiente, simples e tempo-eficiente e elucidar os efeitos de acidente vascular cerebral e AD em d IFERENÇAS em funcionamento do membro.

Além de mudanças na função motora, AD envolve déficits de memória que podem apresentar em estágios iniciais da progressão da doença. Ao abordar patologias AD-like em um modelo de roedor, é fundamental que a aprendizagem dependente do hipocampo e memória é avaliada porque o hipocampo é uma estrutura do cérebro importante em grande parte afetada em 2 AD. O hipocampo é uma região do cérebro essencial para a aprendizagem espacial e a memória e a sua função pode ser testado usando vários paradigmas de labirinto em roedores. Uma das tarefas de labirinto mais amplamente usados ​​para modelos de roedores de diferentes doenças é o labirinto aquático de Morris 20. O labirinto de água de Morris utiliza pistas espaciais para auxiliar o rato em localizar uma plataforma oculta estacionária e testes de memória espacial de referência quando a plataforma é removida. Uma importante vantagem da configuração do labirinto de água é que é altamente adaptável dependendo da questão de pesquisa proposta 20.

tenda "> Pela primeira vez, as técnicas descritas foram usadas para avaliar a função motora e cognitiva num modelo de rato co-mórbida romance de acidente vascular cerebral e AD. envolvendo pequenos acidentes vasculares cerebrais num modelo de rato transgénico APP21. A co-morbidade foi conseguida por indução vasoconstrição dos vasos sanguíneos no corpo estriado para produzir um pequeno acidente vascular cerebral em APP21 ratos transgênicos. este modelo acidente vascular cerebral tem sido bem estabelecida como condição co-mórbidas em um modelo de rato alternativo de 11 AD. Avanço para este romance APP21 modelo de rato transgénico foi pretendido para produzir um modelo mais translationally valioso. Enquanto as tarefas comportamentais são descritos utilizando um modelo de acidente vascular cerebral e AD rato co-mórbidas, essas tarefas podem ser ainda aplicada a outros modelos de acidente vascular cerebral ou modelos de outras doenças neurológicas (ou seja, a doença de Parkinson). O general metodologia descrita será amplamente aplicável a estes outros estados de doença, mas os prazos de comportamento e paradigmas poderá implicar a alteração com base nos res propostaspergunta earch e modelo. Além de ser adaptável, as tarefas descritas são eficazes em demonstrar déficits menores, além de ser de custo e tempo-eficiente.

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Protocolo

O comitê de ética animal institucional adequado deve aprovar todos os procedimentos comportamentais antes de iniciar a experimentação. Todo o trabalho animal descrito aqui foi aprovada pela Western University Uso de Animais Subcomissão e segue o Canadian Council on Animal Care orientações. Estas experiências com animais foram realizadas durante a fase de luz.

1. Cilindro de Trabalho para Avaliação Membro Anterior Motor Gross

  1. Configuração de equipamento
    1. Adquirir um cilindro de Plexiglas com uma tampa perfurada, que vai acomodar o tamanho do rato utilizados para a experiência. O tamanho do cilindro não deve permitir que o rato para chegar ao topo quando criada e deve permitir a 2 cm, entre a parede e o nariz do rato e a base da cauda do rato. O tamanho padrão de um cilindro é de 23 cm de diâmetro e 40 cm de altura por um de 6 meses de idade (400-600 g) de ratos.
    2. Coloque um espelho com um ângulo de 45 ° abaixo do aparelho de cilindro com o cilindro senta-se em um PLExiglas ficar de pé ou alguma outra forma de apoio cerca de 30 cm acima do topo da tabela.
    3. Defina-se uma câmara de vídeo num tripé a uma distância apropriada para visualizar todo o diâmetro do cilindro no espelho sobre a câmara de vídeo.
    4. Vire iluminação para um ambiente mais escuro e jogar ruído branco no quarto (ou seja, de baixo volume, música subtil) para reduzir o efeito de ruídos altos repentinos. Isso deve ajudar a incentivar o movimento e evitar o congelamento devido a ruídos altos.
  2. Procedimento experimental
    1. Mova os ratos na sala experimental de 30 minutos antes do início do primeiro ensaio para aclimatar os ratos para a sala com música e iluminação dimmer.
    2. Escreve a informação correspondente animais e julgamento (ou seja, número de animais, o dia no cronograma e número de teste) em uma pequena placa branca. Coloque esta placa na frente do espelho.
    3. Pressione gravar na câmara de vídeo com a placa branca na frente do espelho, pegar o rato perto da base of a cauda, ​​colocar o rato dentro do cilindro e fixar a tampa. Suporte para o lado do cilindro para evitar a interferência com a gravação de vídeo.
    4. Remova a placa branca na frente do espelho e deixar o registro da câmera de vídeo o rato dentro do cilindro por 5 minutos (use um temporizador para gravar 5 min a partir de quando o quadro branco é removido). Este é um julgamento.
    5. Limpe o cilindro com toalha de papel e água depois de um julgamento.
    6. Repita os passos 1.2.2-1.2.5 mais duas vezes para obter um total de três ensaios. Não deve haver um tempo de 20-30 min inter-ensaio para diminuir a possibilidade de habituação ao cilindro. Durante este tempo, executar ensaios de cilindros para os outros ratos.
  3. Análise de vídeo
    1. Importar arquivos de câmeras de vídeo em programa de edição de vídeo (iMovie ou seja)
    2. Compilar os vídeos em clipes para cada tentativa. Silenciar o volume do vídeo e diminuir a velocidade do vídeo para 25% do original.
    3. Contar o número de contatos forelimbcom a parede do cilindro para o membro anterior esquerdo e direito. Para contatos simultâneos esquerda e direita, contar estes contactos membros anteriores como "ambos". Tenha em atenção que o vídeo é gravada através de um espelho, o que parece ser o membro anterior esquerdo no vídeo corresponde ao membro anterior direito do animal na realidade.
    4. Calcule o uso cento do membro anterior afetada (contralateral ao acidente vascular cerebral), utilizando a seguinte equação: [{(afetada contatos + ½ contactos bilaterais) / total de contatos número} x 100]. O desempenho de ambos os grupos de tipo selvagem e o grupo transgénico sem acidente vascular cerebral são considerados grupos de comparação para avaliar a apresentação dos problemas induzida por doença.

2. Feixe-walk-Tarefa de Avaliação Motora Grossa

  1. Configuração de equipamento
    1. Adquirir uma viga de madeira lisa selado que é de 2 cm de largura e cerca de 120 cm de comprimento (largura ideal para um 200-600 g de rato).
    2. Coloque duas mesas ou prateleiras unseus 100 cm. As superfícies de cada unidade deve ser cerca de 40 cm acima do solo.
    3. Fixar ambas as extremidades do feixe para a mesa ou estante superfície usando fita. Cerca de 1 m de comprimento da viga não suportado deve agora ser elevado 40 cm acima do solo.
    4. Defina-se uma câmara de vídeo em um suporte, a captura de todo o comprimento da viga. Para melhorar o contraste no vídeo, considerar a introdução de um fundo preto atrás do feixe ao usar ratos brancos.
  2. Procedimento experimental
    1. Mova os ratos na sala experimental de 30 minutos antes do início do primeiro ensaio para aclimatar os ratos para a sala com música e iluminação dimmer.
    2. Coloque gaiola ou enriquecimento ambiental tubos do rato a uma extremidade da viga e colocar o rato na outra extremidade da viga.
    3. Realizar algumas corridas não gravou dois dias antes de ensaios experimentais. Deixe o rato explorar a área e orientar o rato para o feixe, mantendo a base do rato'S cauda.
    4. Uma vez que o rato atravessou o feixe, mover a gaiola ou tubo para a outra extremidade da viga e de repetição. Quando o rato cruza o feixe livremente em qualquer direção, o treino é longo. Manter o número de formação é executado consistente entre todos os animais.
    5. Escreve a informação correspondente animais e julgamento (ou seja, número de animais, o dia no cronograma e número de teste) em uma pequena placa branca. Fita Este quadro branco para a parede atrás da viga.
    6. Coloque tubagem enriquecimento gaiola de origem ou o ambiente do rato a uma extremidade da viga.
    7. Pressione ficha na câmara de vídeo e escolher o rato-se pela base da cauda e o local na extremidade do feixe oposto à gaiola de origem ou da tubagem.
    8. Gravar a totalidade do processo, que termina quando o rato foi concluída com êxito que atravessa o comprimento total do feixe elevados. Se as pausas de rato a meio caminho ao longo da viga, o rato pescoço suavemente pela base da cauda ou tocar cauda do rato suavementepara promover o movimento ao longo da viga. Não empurre o rato para a frente de qualquer maneira.
    9. Re-fazer ensaios em que o rato vira de lado, enquanto na trave, pára repetidamente a pé ou anda de forma inconsistente. Se um rato cai e continua a ficar com o feixe, gentilmente colher-se o rato e colocá-lo de volta na trave na posição da queda e continuar o julgamento.
    10. Mova a gaiola ou tubo para a outra extremidade da viga, mudar o julgamento # no quadro branco e registrar o posterior julgamento.
    11. Repetir este procedimento até que um total de 6 ensaios foram concluídos, com 3 ensaios a ser gravada para cada direcção. Todos os 6 ensaios para um rato pode ser gravado antes de iniciar os ensaios para a próxima rato.
  3. Análise de vídeo
    1. Importar arquivos de câmera de vídeo no programa de edição de vídeo (iMovie ou seja).
    2. Compilar os vídeos em clipes para cada tentativa e silenciar o volume do vídeo. Analise cada quadro do vídeo clipe quadro a quadro.
    3. Contar o númerodos passos totais do rato leva a percorrer o comprimento total do feixe e o número total de membros posteriores esquerda e direita e deslizamentos forelimb eo número total de quedas. O desempenho de ambos os grupos de tipo selvagem e o grupo transgénico sem acidente vascular cerebral são considerados em comparação com o grupo de co-morbilidade para avaliar aparecimento de défices únicas para a condição de co-mórbida.

3. Morris Water Maze do Ordenamento Aprendizagem e de referência de memória hipocampo-dependentes

  1. Configuração de equipamento
    1. Garantir uma câmara de video colocado acima do centro de uma piscina circular (148 cm de diâmetro e 58 cm de profundidade). Alinhe os quatro quadrantes designados corretamente com o contorno da piscina no programa de software de rastreamento.
    2. Encher a piscina circular com água de aproximadamente 36 cm de profundidade. A água deve ser aquecida até à temperatura ambiente, preenchendo a piscina alguns dias antes do início do protocolo experimental.
    3. Adicionar preto un tinta acrílica non-toxictil a água é opaca ao usar ratos brancos. Use uma cor clara, como branco, para os ratos de cores mais escuras.
    4. Rodeiam a piscina com superfícies de parede em branco, incluindo divisórias, se necessário. Quando na piscina, o rato não deve ser capaz de ver os experimentadores.
    5. Corte 4 grandes pistas espaciais diferentes em forma de diferentes cores de cartolina e anexar uma forma na parede por norte designado, leste, sudeste e locais piscina sudoeste. Estas pistas deve ser ligeiramente maior do que a borda da piscina.
    6. Ligue um rádio em volume baixo no quadrante noroeste para evitar que o rato de ser distraído por ruídos altos inesperados durante o teste.
    7. Coloque uma plataforma circular (diâmetro de 11,5 centímetros, 2-3 cm abaixo da superfície do nível da água), no centro do quadrante alvo.
    8. Desligue principais luzes da sala e acender uma lâmpada de chão no lado oposto do divisor de quarto para a piscina para iluminar a área.
  2. Configuração do computador
    1. Use um programa de rastreamento que é projetado para tarefas de comportamento labirinto aquático de Morris e configurar o protocolo antes de iniciar experimentos. Um exemplo de um possível programa é fornecida na Figura 4.
    2. Situado a 4 dias consecutivos, com 4 ensaios de 90 segundos cada para o experimento de aprendizagem espacial.
    3. Definir 2 experiências separadas sonda de 30 s cada em 24 horas após o último teste de aprendizagem espacial e 1 semana após a primeira experiência sonda.
    4. Set cued ensaios de aprendizagem em 4 ensaios por dia durante 2 dias consecutivos a partir de 24 horas após a segunda experiência sonda. Cada ensaio deve ser de 60 seg total.
    5. Para cada fase, definir a ordem de teste de modo que não é de 20 minutos de intervalo inter-ensaio entre cada ensaio para um determinado animal. Outros animais podem ser executados durante este intervalo inter-julgamento, desde que cada animal mantém a 20 min de intervalo inter-julgamento.
    6. Certifique-se de que a posição da plataforma é para ser definido pelo experimentador e que todas as outras zonas é DEmultado pela posição da plataforma designada.
    7. Configurar o programa para iniciar manualmente e terminar cada tentativa.
  3. Experiência de Aprendizagem espacial
    1. Coloque a plataforma circular no quadrante sudoeste. Deve ser alinhada com a circular área designada "plataforma" no quadrante no programa de computador.
    2. Começam posições ao redor da piscina devem ser randomizados para cada rato. Representam todas as posições iniciais em cada grupo de tratamento. No rato começa a partir da posição a nordeste de todas as experiências de aprendizagem espacial no paradigma apresentados para permitir uma nova posição inicial durante o teste sonda.
    3. Segure o rato na base de sua cauda e gentilmente colocá-lo na água ao longo da parede da piscina na posição para início e se mover rapidamente fora da vista do rato.
    4. Ter o outro experimentador iniciar o software de rastreamento, logo que o rato está na água. Um temporizador deve começar a contar-se entre 0 sobre o programa de rastreamento.
    5. Se o rato localiza a plataforma, tem o outro experimentador interromper o ensaio no computador e deixar o rato na plataforma durante pelo menos 30 segundos antes de recuperá-los. Se o rato salta para fora da plataforma antes do julgamento é interrompido no computador, o julgamento continua.
    6. Se o rato não encontrar a plataforma no tempo de julgamento previsto, orientar o rato para a plataforma usando sua mão (ou fazendo com que o rato seguir sua mão ou orientar o rato pela base da cauda). Segurar o rato na plataforma durante 30 seg.
    7. Remover o rato a partir da piscina pela base da cauda no braço do experimentador que é coberta com uma toalha ou deixe o rato subir em uma superfície portátil.
    8. Repita os passos 3.3.3-3.3.7 para um total de 4 ensaios por rato. Deve haver um intervalo inter-julgamento de 20 min para cada rato.
    9. Devolver os ratos para sua gaiola sob uma lâmpada de calor para, pelo menos, 10 minutos após o julgamento do rato aprendizagem espacial final.
    10. Continue a exact mesmo protocolo de aprendizagem espacial para o dia 2 até ao dia 4 de aprendizagem espacial.
    11. No dia 04/02, não mantenha o rato sobre a plataforma por mais tempo. Permitir que o rato para sentar-se na plataforma sem assistência por 30 s com os experimentadores fora da vista. Isto pode ser feito durante os ensaios posteriores no dia 1 na ocasião.
  4. Probe Experiment
    1. Remover a plataforma a partir da piscina. Assegurar a posição da plataforma anterior permanece definido no computador (círculo no quadrante sudoeste).
    2. Coloque o rato na água ao longo da parede da piscina na posição nordeste e rapidamente se mover para fora da vista do rato. Utilização do novo nordeste posição inicial assegura que o rato recorda a posição independente de plataforma de posições iniciais previamente treinados.
    3. Ter o outro experimentador iniciar o software de rastreamento, logo que o rato está na água. Um temporizador deve começar a contar-se entre 0 sobre o software de rastreamento.
    4. Recuperar o rato a partir dosudoeste quadrante da piscina pela base da cauda e mantenha em um braço coberto de toalha ou deixe o rato subir em uma superfície portátil.
    5. Devolver os ratos para sua gaiola sob uma lâmpada de calor por pelo menos 10 minutos após o julgamento sonda de cada rato.
    6. Repita este experimento (passos 3.4.1-3.4.5) 1 semana mais tarde.
  5. Cued Experiência de Aprendizagem
    1. Use fita adesiva para prender a 4 cm de diâmetro sugestão esférica branca em uma posição que é de 8,5 cm de altura sobre a plataforma (altura total de cue é de 12,5 cm). A parte superior do taco esférica será de pelo menos 8,5 cm acima do nível da água.
    2. Remova as pistas espaciais das paredes ao redor da piscina.
    3. Randomizar posições da plataforma e iniciar posições para cada rato em cada grupo. Todas as posições da plataforma e de início deve ser representada para cada grupo de tratamento.
    4. Coloque plataforma na área da plataforma designada e definir no software de rastreamento.
    5. Coloque o rato na água ao longo da parede da piscina em tele designou a posição inicial e rapidamente se mover para fora da vista do rato.
    6. Ter o outro experimentador iniciar o software de rastreamento, logo que o rato está na água. Um temporizador deve começar a contar-se entre 0 sobre o software de rastreamento.
    7. Uma vez que o rato atinge a plataforma, tem o outro experimentador interromper o ensaio no computador. Se o rato salta para fora da plataforma, o julgamento continua. Antes de recuperar o rato, permitir que o rato para sentar-se na plataforma por 15 s.
    8. Recuperar o rato a partir da piscina pela base da cauda e mantenha em um braço coberto de toalha ou deixe o rato subir em uma superfície portátil.
    9. Verifique a posição da plataforma para a próxima rato e mover a plataforma para a área correspondente definido no software de rastreamento.
    10. Repita os passos 3.5.4-3.5.9 para os 3 ensaios seguintes. Deve haver um intervalo inter-julgamento de 15 min.
    11. Devolver os ratos para sua gaiola sob uma lâmpada de calor por pelo menos 10 minutos após fina de cada ratol cued julgamento de aprendizagem.
    12. Continue o mesmo protocolo para o dia 2 de aprendizagem cued.
  6. Análise de dados
    Nota: O tempo gasto em zonas, a distância percorrida em zonas, velocidade média, número de entradas em zonas e o tempo para a primeira entrada na zona que são frequentemente utilizados.
    1. Analisar o tempo e distância para alcançar a zona de plataforma e a velocidade média por dia de espacial e cued aprendizagem separadamente. Para experiências de sonda, analisar a latência para a primeira entrada na zona de destino como um tempo cru ou uma mudança por cento de sonda 1 para sondar 2.

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Resultados

As tarefas comportamentais descritos foram utilizados para demonstrar os efeitos do acidente vascular cerebral em um modelo de rato transgénico APP21 de doença de Alzheimer. A combinação de acidente vascular cerebral e o transgene APP21 deverá resultar em maior déficit motor nos membros afetados, bem como o aumento déficits de memória.

A tarefa cilindro avaliada função motora do membro anterior bruto e é representado como o us...

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Discussão

A combinação de acidente vascular cerebral e doença de Alzheimer resultados em patologias de comportamento muito distintos que podem afectar tanto a função motora e cognitiva, dependendo da gravidade de cada doença. Assim, é necessário fazer uso de uma variedade de tarefas comportamentais para determinar as contribuições individuais destas condições, bem como oferecer algumas informações sobre os efeitos combinados e potencialmente interactivos na condição de co-mórbida. Os dados apresentados demonstram três rentável, a...

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Divulgações

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

Este trabalho foi possível com financiamento dos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (CIHR) e os autores gostariam de agradecer ao CIHR por seu apoio financeiro.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
CilindroWestern UniversityPlexiglas Cilindro
Diâmetro do Cilindro: 23 cm
Altura do Cilindro: 40 cm
Altura da Plataforma: 30 cm
Comprimento do Espelho: 35 cm
Largura do Espelho: 26,5 cm		Este foi feito especificamente pela Western University Machine Services para nosso laboratório. Entre em contato com o fabricante escolhido para projetar este produto.
Câmera de Vídeo PortátilJVCGZ-E200
Tripéde Câmera de Vídeo SlikF163
AM/FM RádioRelógio SylvaniaSCR1388
Quadro BrancoWalmartLargura: 71.12 cm
Altura: 55.88 cm		Estes podem ser comprados em qualquer loja (ou seja, Walmart, livrarias universitárias)
Marcador de Apagar a SecoExpoExpo Apagar a Seco Original MarcadorEstes podem ser comprados em qualquer loja (ou seja, Walmart, livrarias universitárias)
Viga de MadeiraRonaPlywood
Largura: 2 cm
Comprimento: 100 cm
Fita de Laboratório de Uso Geral VWRVWR Intl.89097-920
iMovie '11Apple Inc.Versão 9.0.9 (1795)Esta é a versão usada neste manuscrito, mas qualquer outra versão do iMovie ou software de edição de vídeo pode ser usado.
Piscina Morris Water Maze com PlataformaStoelting Co.60136/60035Estes não são os produtos exatos usados no vídeo, mas são essencialmente idênticos.
Tacode-O taco de plataforma usado foi criado usando um pequeno suporte de metal e uma bola de espuma esférica branca. Eles provavelmente podem ser comprados em qualquer loja com materiais de reforma (ou seja, Walmart, Rona etc.)
Lâmpada de Chão Mainstays 71"WalmartHW-F0377SLV
ANY-Maze Software de Rastreamento ComportamentalStoelting Co.60000Existem pacotes ANY-maze® que incluem a câmera com ou sem computador e acessórios.
Câmera de VídeoCompacta LogitechV-U0023
LaptopHewlett-PackardHP Pavilion dv6 Notebook PCLaptop Especificações: APU AMD A6-3420M com Radeon HD Graphics 1.50 GHz, 6.00 GB RAM, sistema operacional de 64 bits.
Tinta Acrílica Não-tóxica AmericanaDecoArtDAO67-9Isso pode ser encomendado no site da DecoArt ou comprado na loja nos revendedores DecoArt.
CartazWalmartPA-1961
plataforma

Referências

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