Nanopartículas Lipídicas Sólidas (NLS) para intracelular Segmentação Aplicações

Resumo

Neste estudo, foi descrito um método para sintetizar populações ultrapequenas de nanopartículas biocompatíveis, bem como vários métodos in vitro para avaliar suas interações celulares.

Resumo

Os veículos de entrega baseados em nanopartículas têm se mostrado muito promissores para aplicações de direcionamento intracelular, fornecendo um mecanismo para alterar especificamente a sinalização celular e a expressão gênica. Em uma investigação anterior, foi demonstrada a síntese de nanopartículas lipídicas sólidas ultrapequenas (SLNs) para aplicações tópicas de administração de medicamentos e detecção de biomarcadores. Os SLNs são um exemplo bem estudado de um sistema de entrega de nanopartículas que surgiu como um veículo promissor de entrega de medicamentos. Neste estudo, os SLNs foram carregados com um corante fluorescente e usados como modelo para investigar as interações partícula-célula. O método de temperatura de inversão de fase (PIT) foi utilizado para a síntese de populações ultrapequenas de nanopartículas biocompatíveis. Um ensaio de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenilfeniltetrazólio (MTT) foi utilizado para estabelecer níveis de dosagem apropriados antes dos estudos de interação nanopartícula-célula. Além disso, fibroblastos dérmicos humanos primários e células dendríticas de camundongos foram expostos a SLN carregados com corante ao longo do tempo e as interações com relação à toxicidade e absorção de partículas foram caracterizadas usando microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. Este estudo demonstrou que SLNs ultrapequenos, como um sistema de entrega de nanopartículas, são adequados para o direcionamento intracelular de diferentes tipos de células.

Introdução

Veículos de entrega baseado em nanopartículas têm mostrado uma grande promessa para aplicações dirigidas intracelulares, fornecendo um mecanismo para alterar especificamente sinalização celular e expressão gênica. Estes veículos podem ser carregados com medicamentos, proteínas, ácidos nucleicos e concebidos para influenciar as respostas celulares e conseguir um efeito desejado em tecidos-alvo. Muitos tipos de nanocarriers têm sido exploradas para benefício terapêutico e de diagnóstico, incluindo lipidos, polímeros, silício e materiais magnéticos. Estes sistemas são atraentes devido ao seu potencial para a entrega da droga localizada, aumento da concentração terapêuti....

Protocolo

1. Processamento de SLNs

1. Síntese de SLNs
   Nota: Use o método PIT ^1,17,20 para preparar os sub-20 SLNs ^NM 1.
   1. Utilizar técnicas assépticas, biorreagentes ou reagentes de grau de cultura de células, e materiais estéreis (isto é, pipetas, espátulas, ampolas, etc.).
   2. Usar uma cabine de segurança biológica para a síntese de NLS (Figura 2).
   3. Combinar 0,6 mg de corante fluorescente (Vermelho do Nilo (NIR), a concentração de NiR é de aproximadamente 0,3 mg / ml) e 0,10 g de heneicosano (lípido, 5% p / p de concentração de lípido) para um frasco (15 ml), o co-fundido a 90 ° C, ....

Resultados

O método PIT foi utilizado para sintetizar os NLS e a temperatura de inversão de fase foi determinada utilizando um banho de água. As amostras foram aquecidas lentamente e agitado suavemente até que a solução apareceu clara. A temperatura de inversão de fase para as SLNs feitas usando heneicosano lipídica é de 45 ° C. A Tabela 1 sumariza o tamanho de partícula, polidispersão, ponto de fusão e do calor latente de fusão para os NLS. Os NLS sintetizados utilizando as condições de processamento acima descri.......

Discussão

Neste estudo, a síntese de NLS e a sua aplicabilidade para aplicações destinadas intracelulares foram exploradas. Estas nanopartículas biocompatíveis têm mostrado promissores como veículos de entrega para várias aplicações, incluindo a entrega de drogas, o silenciamento do gene, e tecnologias de vacina ^25-30. Ultra-pequenas SLNs foram sintetizados usando um processo fácil, e as suas interacções com células epiteliais primárias e células imunitárias primárias foram exploradas. SLNs foram concebidos para inclui.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Vermelho Nilo (NiR)	Sigma	19123	BioReagent, adequado para fluorescência, ≥ 98.0%
Heneicosane	Aldrich	286052	98%
Brij O10	Sigma	P6136	Brij 97, C18-1E10, Polioxietileno (10) éter oleílico
Água	Sigma	W3500	Filtrado estéril, BioReagente, adequado para cultura de células
Filtro de seringa 0.2 µ m Supor Membrana de Baixa Ligação a Proteínas	Ciências da	PN4612	Não Pirogênico
Nanotrac Ultra	Número de série Microtrac	U1985IS	Instrumento
Calorímetro Exploratório Diferencial	Mettlet-Toledo		Instument
Fibroblastos humanos primários	Life Technologies	C-004-5C	Neonatal (HDFn)
Medium 106	Life Technologies	M-106-500	Um meio líquido estéril para a cultura de fibroblastos dérmicos humanos.
Kit de Suplemento de Crescimento de Soro Baixo (Kit LSGS)	Life Technologies	S-003-K	Todos os componentes do Kit completo de
Ensaio de Proliferação de Células LSGS MTT	Trevigen	4890-025-K	Kit sensível para a medição da proliferação celular com base na redução do sal de tetrazólio, brometo de 3-[4,5-dimetiltiazol-2- il]-2,5-difenil-tetrazólio (MTT)
Leitor de microplacas Safire2	Tecan	----	Instrumento
Fosfato tampolado salino	Sigma	P5493	Para biologia molecular
Recombinante murino GM-CSF	Peprotech	315-03	>97%, por SDS-PAGE em condições redutoras e visualizado por coloração de prata.
IL-4 murina recombinante;	Peprotech	214-14	>97%, por SDS-PAGE em condições redutoras e visualizado por coloração de prata.

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