A Cancer Cell Spheroid Ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3D

Resumo

Este método avalia a invasão de células cancerígenas de esferóides em uma matriz 3D circundante. Os esferoides são gerados através do método de cultura de gota suspensa e, em seguida, incorporados em uma matriz composta de materiais de membrana basal e colágeno tipo I. A invasão dos esferóides é posteriormente monitorada.

Resumo

Acredita-se que a natureza invasiva das linhagens de células cancerígenas se correlacione com seu potencial metastático. A maioria dos ensaios tradicionais, no entanto, não examina essas características invasivas em um ambiente tridimensional e os dados resultantes sofrem de aplicabilidade biológica reduzida. Aqui é apresentada uma abordagem para visualizar a capacidade invasiva das linhagens celulares em um ambiente fisiologicamente relevante. O ensaio de invasão de esferóides de células cancerígenas primeiro utiliza a gravidade para gerar esferoides dentro de gotas de meio que ficam penduradas na tampa de uma placa de cultura de células. Em seguida, esses esferoides são incorporados em uma matriz 3D que consiste em uma mistura de materiais de membrana basal e colágeno tipo I. A saída de células cancerígenas dos esferoides para a matriz circundante é então monitorada ao longo do tempo. O método descrito aqui pode ser modificado para examinar a invasão após cocultura de diferentes tipos celulares, inclusão de drogas/inibidores ou alterações nos constituintes da matriz extracelular (MEC).

Introdução

Está provado que a motilidade célula cancerosa é preditiva do potencial metastático, uma vez que tal comportamento facilita a invasão através da membrana basal e da entrada no sistema circulatório ^1. Mais investigação sobre a motilidade tem-se centrado na forma como as células se comportam de uma configuração bidimensional (2D), embora se tornando-se amplamente reconhecido que o movimento das células em uma matriz tridimensional (3D) é mais representativo de como estas mesmas células vão realmente ² comportar in vivo. Sistemas de cultura 3D são cada vez mais usados ​​para estudar comportamentos celulares que vão desde a morfologia celul....

Protocolo

1. Geração de esferóides

1. Prepare a suspensão de células individuais para pendurar culturas gota a separar culturas aderentes de células de cancro de ~ 70% de confluência utilizando uma lavagem com PBS, seguido por exposição a uma solução tripsina-EDTA 0,05%.
   1. Neutraliza-se a solução de tripsina com meio de cultura de células e contagem das células, utilizando-se uma alíquota da suspensão de células. Nota: O meio de cultura de células específico dependerá da linha celular a ser testada. Seguir as recomendações da ATCC media, onde o meio de cultura celular é normalmente de DMEM + 10% de FBS. Mais informação pode ser encontrada na Tabela Materiais.

Resultados

Usando o ensaio de invasão esferóide (figura 1), um painel de linhas celulares de cancro foi testado quanto à sua capacidade para formar esferóides, bem como para a quantidade de egresso de células expostas após o implante numa matriz 3D que consiste em materiais de membrana basal e colagénio tipo I (Tabela 1). Estes resultados demonstram que nem toda linha celular de cancro criará esferóides bem formadas, onde as linhas de células que possuem uma morfologia epitelial in vitro,.......

Discussão

Este estudo foi avaliado o desempenho de um painel de linhas celulares de cancro em um ensaio de invasão esferóide (Tabela 1). De um modo geral, descobrimos que a formação do esferóide é aumentada em mais as linhas de células epiteliais de aspecto, em que a presença de junções célula-célula promove a formação de uma arquitectura do tipo esferóide. Linhas celulares conhecidas que foram submetidos a uma transição epitelial-mesenquimal, tais como MDA-MB-231 não formar esferóides na cultura de gota suspensa.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Matrigel Fator de Crescimento Reduzido	Corning	CB-40234
Colágeno Tipo I, Cauda de Rato, 100 mg	Millipore	08-115
DMEM	Life Technologies	11995-065
RPMI 1640 Médio	Life Technologies	11875-093
PBS	Life Technologies	10010-023
0.05% Tripsina-EDTA	Life Technologies	25300-054
Soro Fetal Bovino, Inativado por Calor	Omega Scientific	FB-12
100 mm Pratos tratados com TC	Corning Incorporated	430167
24 poços	NEST Biotecnologia	702001
Olympus IX-71 Microscópio Invertido
As linhagens celulares foram mantidas em DMEM + 10% FBS, com a expectativa de células BT-474 e LNCaP, que foram mantidas em RPMI + 10% FBS.