Artigo de método

Long-Term Cateterismo do tronco linfa intestinal e Recolha de linfa no Neonatais Pigs

DOI:

10.3791/53457

⸱

5 de março de 2016

 ,  ,  ,  , 
1Department of Agricultural, Food and Nutritional Science, University of Alberta, 2Department of Surgery, University of Alberta

Neste artigo

Resumo

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Apresentamos um procedimento cirúrgico para cateterizar o tronco linfático intestinal em porcos neonatais para coletar grandes quantidades de componentes do metabolismo lipídico da linfa eferente.

Resumo

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O cateterismo do tronco linfático intestinal em porcos neonatais é uma técnica que permite a coleta a longo prazo de grandes quantidades de linfa eferente intestinal (central). É importante ressaltar que a coleta de linfa central do intestino permite que os pesquisadores estudem os mecanismos e os constituintes lipídicos associados ao metabolismo lipídico, inflamação intestinal e metástase do câncer, bem como células envolvidas na função imunológica e imunovigilância. Uma abordagem cirúrgica da linha média ventral permite excelente exposição cirúrgica ao abdome craniano e acesso relativamente fácil ao vaso do tronco linfático intestinal que fica próximo ao pâncreas e ao segmento ventral direito da veia porta abaixo do aspecto visceral do lobo direito do fígado. O vaso é meticulosamente dissecado e liberado da fáscia circundante e, em seguida, dilatado com suturas, permitindo a inserção e posterior fixação do cateter no vaso. O cateter é exteriorizado e aproximadamente 1 L/24 horas de linfa é coletado durante um período de 7 dias. Embora essa técnica permita a coleta de grandes quantidades de linfa central por um longo período de tempo, o sucesso depende de uma dissecção cirúrgica cuidadosa, manuseio de tecido e muita atenção à técnica cirúrgica adequada. Isso é particularmente importante em cirurgias em animais jovens, pois os vasos linfáticos podem se romper facilmente, potencialmente levando ao fracasso cirúrgico e experimental. O vídeo demonstra uma excelente técnica cirúrgica para a coleta de linfa intestinal.

Introdução

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O sistema linfático é uma área pouco estudada da fisiologia. Modelos pré-clínicos de cateterismo linfático ocorrer em diferentes espécies animais e 1-8 são utilizados pelas indústrias farmacêuticas e instituições de investigação para investigar mecanismos envolvidos em lípidos 8-12 e 13-15 metabolismo da droga, metástase de câncer 16 com tratamento experimental 17, 18 e a função imunológica -26. Este estudo explora o uso de cateterismo intestinal tronco linfático em um modelo de porco doméstico para medir componentes do metabolismo de lipoproteínas. metabolismo das lipoproteínas está envolvi....

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Protocolo

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Todos os procedimentos em animais experimentais descritas, tanto no vídeo e manuscrito foram aprovados pelo Comitê Cuidado e Uso Institucional Animal e seguiu as orientações estabelecidas pelo Conselho Canadense de Animal Care.

1. anestesia cirúrgica e preparo cirúrgico do Pigs Neonatais

  1. Em uma antecâmara separada, premedicate 25 kg porcos perto da base do pescoço, com um cocktail de drogas sedativo-anestésico intramuscular contendo: azaperona (0,3 mg / kg), cloridrato de cetamina (10 mg / kg), a dexmedetomidina (15 ug / kg).
    Nota: Adicionar buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) no coquetel de drogas pré-anestésica para maio....

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Resultados

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cateterismo linfática do tronco linfático intestinal de suínos neonatal permite a coleta de cerca de 1 L / 24 hr da linfa centro durante um período de 7 dias. A linfa recolhida neste experiências continha componentes do metabolismo de lípidos, proteínas ou seja total de linfa, apoB48 lipoproteína, triglicéridos, proteína total, e colesterol. Tabela 1 destaca valores representativos destes componentes lipídicos de amostras linfáticos agrupados de três porcos. Notavelmente, o fluxo de linf.......

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Discussão

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Coleta de linfa intestinal é um excelente método para investigar mecanismos envolvidos na lipídico 8-12 e 13-15 de drogas metabolismo, a metástase do câncer 16,17, o tráfico de celular e função imunológica 18-26, em vários modelos animais experimentais. Com efeito, a capacidade de colher grandes quantidades de um ou outro periférico (aferente) e central (eferente e grandes vasos do tronco) linfa durante um período prolongado tem sido particularmente importante para compreender.......

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Divulgações

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Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

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O trabalho foi apoiado em parte pelo financiamento da Agência de Pecuária e Carne de Alberta e pela concessão de Descoberta do Conselho de Ciências Naturais e Pesquisa para S. D. Proctor.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Lâmina de laringoscópio MillerWelch Allyn68044182 mm de comprimento
Consultor Surgivet: Monitor de sinais vitaisSurgivetV9203
Sonda de temperatura retalSurgivetV3417
Gerador de eletrocirurgia monopolarValley Lab
Tesoura MetzenbaumFine Science14518-18
Retrator TuffierStevens162-11-676
Pinça MosquitoStevens162-7-10
Kelly pinça curvada (14cm)Stevens162-7-38
Pinça de tecido AllisStevens162-7-38
Pinça curativo-olho (10,2cm)Stevens162-18-780
Fórceps curativo-Adison (12,1cm)Stevens162-17-2510
Chaves de AgulhaStevens162-V98-42
Tesoura de írisFine science14058-11
Bomba de circulação de águaJorvetJ-783X
Maxitherm-Vinyl blanketJorvetJ-784C
Q tip aplicadoresFisher Scientific22-037-960
Cateterismo  tubulação (4,06 OD X 2,31 ID)Braintree Scientific Inc.MRE-160Tubo de implantação de micro-renatano
2-0 sutura de sedaEthiconLA556
2-0 sutura de poliglactinaEthiconJ443H2-0 vicryl
Jaqueta de animal grandeLomir Biomedical Inc.SSJ2YC
Frascos de lavagem de polipropilenoFisher Scientific03-409-22C500 ml
Penicilina-estreptomicinaSigma AldrichD4333
EDTASigma Aldrich60-00-4
Anfotericina BSigma AldrichA2411
AzaperoneElanco SaúdeStresnil
Cloridrato de DexmedetomidinaZoetis6295Dexdomitor
IsofluranoAbbott Animal  Saúde05260-5cetamina IsoFlo
Zoetis2626Cloridrato
bupenorfinaChampion Alstoe SaúdeDIN:02347510
6 mm Tubo endotraquealJorvetJ-165d
10% Spray de lidocaínaAstraZenecaDIN:02003767
4% Clorexidina esfoliação cirúrgicaPartnar Animal HealthPCH-011Diluído: solução a 2,0%
cirúrgico 3M 3MHealth Care1040
SDS page gelInvitrogenEA0375BOX3-8% tris acetato
Membrana de fluoreto de polivinilidenoMilliporeIPVH000100,45 μ m tamanho de poro
ApoB anticorpo EMD MilliporeAB742diluição 1:4000
Burro anti-cabra IgG-HRPSanta Cruz BiotechnologySc-2304
ECL Prime Western BlottingReagent GE Healthcare LifeSciencesRPN2232     
Kit de TriglicerídeosWako Pure Chemicals998-40391/994-40491
Kit de Colesterol TotalWako Pure Chemicals439-17501
Proteína Total  Perfurar23225Ensaio de ácido bicinconínico
Animal Cloridrato de de Ketaset Animal Campo

Referências

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  1. Lindsay, F. E. F. The cisterna chyli as a source of lymph samples in the cat and dog. Res. Vet. Sci. 17, 256-258 (1974).
  2. Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism. Curr. Protoc. Mous....

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