Este novo modelo de transplante de membro posterior ortotópico em ratos, aplicando uma técnica manguito não sutura para a anastomose super-microvascular, fornece uma ferramenta poderosa para in vivo pesquisa imunológica mecanicista relacionadas com alotransplante composta vascularizado (VCA).
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Ortotópico Hind Limb Transplantation no mouse
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os sistemas de modelos animais in vivo e, em particular, os modelos de camundongos, evoluíram para ferramentas científicas poderosas e versáteis, indispensáveis à pesquisa básica e translacional no campo da medicina de transplante. Uma vasta gama de reagentes está disponível exclusivamente neste cenário, incluindo anticorpos mono e policlonais para aplicações diagnósticas e intervencionistas. Além disso, um grande número de cepas genotipadas, endogâmicas, transgênicas e nocautes permitem uma investigação detalhada das contribuições individuais dos componentes humorais e celulares para a complexa interação de uma resposta imune e tornam o camundongo o padrão-ouro para a pesquisa imunológica.
O Alotransplante Composto Vascularizado (VCA) delineia um novo campo de transplante usando aloenxertos para substituir "igual por igual" em pacientes que sofrem perda de tecido traumática ou congênita. Este protocolo metodológico cirúrgico mostra o uso de uma técnica de manguito sem sutura para anastomose supermicrovascular em um modelo ortotópico de transplante de membros posteriores de camundongos. O modelo permite especificamente a comparação entre paradigmas estabelecidos no transplante de órgãos sólidos com uma nova forma de transplantes que consiste em vários componentes de tecido diferentes. Excepcionalmente, este modelo permite o transplante de um compartimento e nicho vascularizados viáveis da medula óssea que têm o potencial de exercer um efeito benéfico no equilíbrio da aceitação e rejeição imunológica. Essa técnica fornece uma ferramenta para investigar o reconhecimento de aloantígenos e a rejeição e aceitação do aloenxerto, além de permitir a realização de estudos de regeneração funcional do nervo para avançar ainda mais neste novo campo do transplante.
Introdução
O final dos anos noventa anunciou os dias pioneiros do transplante reconstrutivo com o primeiro transplante de mão bem-sucedido realizado na França em 1998. Desde então, o uso de AVCs para reconstrução de defeitos teciduais devastadores tem sido empregado com sucesso em um amplo espectro de pacientes. Até o momento, o mundo conta com 76 receptores de 112 extremidades superiores, bem como 31 faces 1-3. Além disso, vários outros tipos de AVCs, como parede abdominal 4, laringe 5, traqueia 6, articulações vascularizadas 7 e até pênis 8 foram realizados. Além disso, o nascimento vivo de um bebê foi relatado ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Todos os experimentos foram conduzidos de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do Instituto Nacional de Saúde (NIH) e foram aprovados pela Comissão de Johns Hopkins University animal Cuidado e Uso (JHUACUC). Os procedimentos específicos foram realizados sob a MO13M108 protocolo ACUC aprovado.
Operação 1. Donor
- Administrar analgesia no ponto de tempo adequado para cada formulação farmacológica antes da cirurgia. De acordo com a cuidar dos animais aprovados e uso de uso de protocolo 0,1 mg / kg de peso corporal por via subcutânea de buprenorfina 1 hora antes da incisão na pele.
- Sedar o doador com isoflurano aplic....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Executando alotransplante compósito vascularizada num modelo de ratinho utilizando uma técnica não-sutura braçadeira permite atingir uma excelente e de longa sobrevivência do enxerto prazo e animal, tal como mostrado na Figura 1. Além disso, representa um método confiável para a obtenção de resultados reprodutíveis de rejeição de aloenxertos gradual no compósito vascularizado alotransplante como documentado por as imagens mostradas na Fi.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Vascularizado Composite Alotransplante, como membro superior e transplante de rosto para reconstrução de defeitos de tecidos devastadores, tem evoluído como uma opção de tratamento válida para pacientes não alterada para procedimentos reconstrutivos convencionais. Os avanços técnicos no campo da microcirurgia reconstrutiva, bem como uma vasta experiência com potente terapêuticas imunossupressoras e imunomoduladoras em transplante de órgãos sólidos, agora permite a sobrevivência do enxerto a longo prazo nesta população d.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores declaram que não têm interesse financeiro conflitante.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo Exército, Marinha, NIH, Força Aérea, VA e Assuntos de Saúde para apoiar o esforço afirm II, sob concessão No. W81XWH-13-2-0053. O Medical Research Aquisição Atividade Exército dos EUA, 820 Chandler Street, Fort Detrick MD 21702-5014 é o escritório de aquisição de adjudicação e administração. Opiniões, interpretações, conclusões e recomendações são as do autor e não são endossados pelo Departamento de Defesa.
Os autores gostariam de agradecer Jessica Izzi, DVM, Caroline Garrett, DVM e Julie Watson, DVM pelo seu excelente apoio veterinário durante este estudo.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sutura, 6-0 Nylon | MWI | 31849 | |
| Sutura, 6-0 Polysorb | MWI | 72667 | |
| Sutura, 10-0 Nylon | Aero Surgical | TK-107038 | |
| Tubo de Poliimida, Tamanho 25 | Vention Medical | 141-0023 | |
| Tubo de Poliimida, Tamanho 27 | Vention Medical | 141-0015 | |
| Braçadeiras Microvasculares (Únicas) | Synovis | 00396 | |
| Pinças Microvasculares (Duplas) | Synovis | 00414 | |
| Micro-Tesoura | Synovis | SAS-18 | |
| Micro-Fórceps | Synovis | FRS-15 RM-8 | |
| Micro-Dilatadores | Synovis | FRS-15 RM-8d.1 | |
| Micro-Agulha | Synovis | C-14 | |
| Aplicador de Micro-Clamp | Synovis | CAF-4 | |
| Agulha de Micro-Lavagem | Hamilton | 10MM, 30°, 33G | |
| Solução de Ringers com lactato | Fisher Scientific | NC9968051 | |
| Buprenorfina | Número DEA necessário; Obtido na farmácia hospitalar. | ||
| Enrofloxacina; Baytril | Bayer Health Care | 186599 | |
| Heparina | Obtido na farmácia hospitalar |
Referências
- Khalifian, S., et al. Facial transplantation: the first 9 years. Lancet. , (2014).
- Petruzzo, P., Dubernard, J. M. The International Registry on Hand and Composite Tissue allotransplantation. Clin. Transpl. , 247-253 (2011).
- Shores, J. T., Brandacher, G., Lee, W. A.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
