A proteína c-Fos Detecção imuno: Uma ferramenta útil como um marcador de vias centrais envolvidos em respostas fisiológicas específicas<em&gt; In Vivo</em&gt; e<em&gt; Ex Vivo</em

Anne-Sophie Perrin-Terrin; Florine Jeton; Aurelien Pichon; Alain Frugière; Jean-Paul Richalet; Laurence Bodineau; Nicolas Voituron

doi:10.3791/53613

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Artigo de método

A proteína c-Fos Detecção imuno: Uma ferramenta útil como um marcador de vias centrais envolvidos em respostas fisiológicas específicas

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DOI:

10.3791/53613

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25 de abril de 2016

Anne-Sophie Perrin-Terrin¹^,² , Florine Jeton¹^,³ , Aurelien Pichon¹^,³^,⁴ , Alain Frugière² , Jean-Paul Richalet¹^,³ , Laurence Bodineau² , Nicolas Voituron¹^,³

¹Sorbonne Paris Cité, Laboratory “Hypoxia & Lung” EA2363, University Paris 13, ²UPMC Univ Paris 06, INSERM, UMR_S1158 Neurophysiologie Respiratoire Expérimentale et Clinique, Sorbonne Universités, ³Laboratory of Excellence GR-Ex, ⁴Laboratory MOVE (EA 6314), University of Poitiers

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo baseado na detecção imunohistológica da proteína c-FOS, uma técnica clássica usada para a identificação de populações neuronais envolvidas em respostas fisiológicas específicas in vivo e ex vivo.

Resumo

Muitos estudos buscam identificar e mapear as regiões cerebrais envolvidas na regulamentação fisiológicas específicas. As c-fos proto-oncogene, um gene precoce imediato, é expresso em neurónios em resposta a vários estímulos. O produto proteico pode ser facilmente detectada com técnicas de imuno-histoquímica que levam à utilização de detecção de c-fos para mapear grupos de neurónios que exibem alterações na sua actividade. Neste artigo, nós nos concentramos na identificação de populações de tronco cerebral neuronal envolvidos na adaptação ventilatória à hipoxia ou hipercapnia. Duas abordagens foram descritas para identificar populações neuronais envolvidos in vivo em animais e ex vivo em preparações do tronco cerebral desaferentada. In vivo, os animais foram expostos a misturas de gases hipercápnicos ou hipóxicos. Ex vivo, preparações desaferentada foram superfused com hipóxica ou fluido cerebrospinal artificial hipercápnica. Em ambos os casos, tanto em animais de controlo in vivo ou ex preparações in vivo foram mantidas sob condições de normóxia e normocápnicos. A comparação destas duas abordagens permite a determinação da origem da activação neuronal ou seja, periférica e / ou central. In vivo e ex vivo, tronco cerebral foram recolhidas, fixadas e cortado em secções. Uma vez que as secções foram preparados, a detecção imuno-histoquímica da proteína de c-fos foi feito a fim de identificar os grupos de tronco cerebral de células activadas por estímulos de hipoxia ou hipercapnia. As células marcadas foram contadas em estruturas respiratórios no tronco cerebral. Em comparação com a condição de controle, hipoxia ou hipercapnia aumentou o número de c-fos células marcadas em vários locais do tronco cerebral específicas que são, portanto, constitutiva dos percursos neuronais envolvidas na adaptação do impulso respiratório central.

Introdução

O gene c-fos foi identificado pela primeira vez no início de 1980 ^{a 1,2} e o seu produto foi caracterizado em 1984 como uma proteína nuclear que tem propriedades do gene activador de ^3,4. Participa em mecanismos de longo prazo associados com estimulação neuronal. Com efeito, as mudanças na actividade neuronal levar ao segundo mensageiro cascatas de sinalização que induzem a expressão do gene precoce imediato c-fos, que induz a produção do factor de transcrição de c-fos. O último inicia a expressão de genes tardios e assim participa em respostas adaptativas do sistema nervoso para muitos tipos diferentes de estímulos ^4.