A ativação imune materna (MIA) é um modelo para um fator de risco ambiental de autismo e esquizofrenia. O objetivo deste artigo é fornecer um procedimento passo a passo de como induzir MIA em camundongos prenhes, a fim de aumentar a reprodutibilidade deste modelo.
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Artigo de método
Indução de Maternal Immune Activation em Ratos na Fase Mid-gestação com Viral Mimic poli (I: C)
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O modelo de ativação imune materna (MIA) é cada vez mais apreciado como um modelo de roedor para o fator de risco ambiental de vários transtornos psiquiátricos. Numerosos estudos demonstraram que o modelo MIA é capaz de mostrar validade de face, construto e preditiva que são relevantes para o autismo e a esquizofrenia. Para modelar MIA, os investigadores costumam usar poliinosínico: ácido policitidílico (poli (I: C)) para ativar o sistema imunológico em roedores prenhes. Geralmente, a prole de uma mãe imune ativada exibe anormalidades comportamentais e alterações fisiológicas associadas ao autismo e à esquizofrenia. No entanto, a injeção de poli (I: C) com diferentes dosagens e em diferentes momentos pode levar a resultados diferentes, perturbando o desenvolvimento do cérebro em diferentes estágios. Aqui, fornecemos um método detalhado de indução de MIA por injeção intraperitoneal (i.p.) de 20 mg / kg poli (I: C) no meio da gestação embrionária 12,5 dias (E12.5). Este método demonstrou induzir uma resposta inflamatória aguda no eixo materno-placentário-fetal, o que acaba resultando em perturbações cerebrais e fenótipos comportamentais associados ao autismo e à esquizofrenia.
Introdução
O conceito de ativação imune materna (MIA) tem origem nos estudos epidemiológicos sobre a associação da infecção materna com autismo e esquizofrenia 1. Devido à ausência de agentes patogénicos virais detectáveis se replicar na placenta ou do cérebro fetal após a infecção viral materna 2,3, o efeito da infecção sobre a descendência é a hipótese de ser causadas pela activação do sistema imune materno, em vez do que os próprios agentes patogénicos .
Para elucidar a relação de causa e efeito entre MIA e distúrbios psiquiátricos, injecção de quimicamente sintetizados, viral mímico dupla polyinosinic ARN de cadeia: ácido....
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Protocolo
Todos os protocolos foram realizados sob a aprovação do California Institute of Comité Cuidados e Uso de Animais Institucional Tecnologia (IACUC).
1. Preparação para Pairs cronometrado-acasalamento
- Use pelo menos 6 barragens para experimentos comportamentais e 3 para análise da expressão gênica.
NOTA: Use o dobro do número de ratos fêmeas estimados, já que apenas cerca de 50% dos ratos será conectado a partir da cronometrado-acasalamento. - Use ratos fêmea com nenhum gravidez antes e, 8-16 semanas de idade.
NOTA: os ratos fêmeas que tenham exposição sexual antes de camundongos machos, mas não foram grávida....
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Resultados
A injecção de 20 mg / kg de poli (I: C) em E12.5 pode evocar uma resposta inflamatória aguda no eixo materno-fetal e placentário-precipitar um efeito crónico para o desenvolvimento do cérebro e fenótipos comportamentais 12,13. Os níveis elevados de uma citocina pró-inflamatória, interleucina (IL) -6, é um indicador fiável da resposta inflamatória aguda após MIA. O tempo de pico para a expressão do gene IL6 na placenta e no cérebro fetal é de 3 horas pós-poli (I:.......
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Discussão
indução MIA em diferentes janelas de tempo perturba diferentes eventos de desenvolvimento cerebral em roedores e, consequentemente, leva a anomalias comportamentais diferentes e neuropatologias na prole. Aqui, descrevemos um protocolo para induzir MIA em camundongos com poli (I: C) injecção a E12.5. Este método de indução MIA leva a comportamental, neurológica, imunológico, e anomalias gastrointestinais associados com o autismo e esquizofrenia na prole 8,10,11,16. É importante notar que, porque MIA é um facto.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Nós gostaríamos de homenagear o falecido Dr. Paul H. Patterson por suas contribuições para o progresso do modelo MIA, autismo e pesquisa da esquizofrenia. Nós reconhecemos Sarkis K. Mazmanian por seu grande apoio a este protocolo; Ruben M. Bayon, Yvette Garcia-Flores, Karen C. Lencioni, e Leslie A. Neumann de assistência administrativa; Ali Khoshnan e Jan C. Ko para a assistência sobre as filmagens; Elaine Y. Hsiao e Natalia Malkova para os seus conselhos na indução MIA; Jeffrey S. Cochrane, Joaquin Gutierrez, Kwan F. Lee, Jaime Rodriguez, Lorena C. Sandoval, e Natalie A. Verduzco para a sua criação de animais especialista. Este trabalho foi financiado pelo NIH Award Conte Center (NIH 5P....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Poliinosínico– sal de potássio ácido policitidílico | SIGMA | P9582 | |
| 0,9% cloreto de sódio INJ. USP | HOSPIRA | NDC 0409-4888-10 | |
| MONOJECT insuline siringagem 3/10 ml 29 G x 1/2" | COVIDIEN | 8881600145 | |
| tubos cônicos de tampa de rosca de 50 ml | USA SCIENTIFIC | 1500-1211 | |
| Nanodrop 1000 espectrofotômetro | THERMO SCIENTIFIC | 1000 | Estereomicroscópio |
| Opcional | Wild Heerbrugg | M5A | Fórceps |
| Dumont #5 Opcional Tamanho da Ponta Inox .10 X .06 mm | Roboz | RS-5045 | Reagente de |
| estabilização de RNA RNAlater | Qiagen | 76104 | Reagente TRIzol opcional |
| Life Technologies | 15596-026 | opcional | |
| RQ1 Rnase-free DNase | Promega | M610A | Kit opcional |
| de síntese de cDNA iScript | Bio-Rad | 170-8891 | |
| Mix master universal SYBR verde FastStart opcional com ROX | Roche | 4913922001 | PCR |
| em tempo real | ABI | 7300 | Primer opcional |
| : Il6 forward | Life Technologies | TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC | Primer opcional |
| : Il6 Reverse | Life Technologies | TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC | Primer opcional |
| : beta-actina forward | Life Technologies | AGAGGGAAATCGTGCGTGAC | Opcional |
| Primer: beta-actina Reverse | Life Technologies | CAATAGTGATGACCTGGCCGT | |
| Placa de reação óptica MicroAmp opcional de 96 poços | Life Technologies | 4306737 | Optionl |
| Filme adesivo óptico MicroAmp | Life Technologies | 4311971 | Optionl |
| EthoVision | Noldus | EthoVision | Optionl |
| SR-LAB aparelho (PPI) | San Diego Instruments | Mármores de Optionl de SR-LAB | |
| PENN-PLAX | Mármores azuis das pedras de gema | Tecnologias | |
| 21600-069 da vida das tecnologias 21600-069 | fosfato-Buffered Saline | Optionl | |
| Optionl Paraformaldeído | MACRON | 2621-59 | Optionl |
| Vibratome | Leica | VT1000 S | Optionl |
| Azida de sódio | Sigma | S2002 | Optionl |
| Triton x-100 | Sigma | X100 | Optionl |
| Solução de peróxido de hidrogênio | Sigma | 18312 | Optionl |
| Goat serum | Vector Laboratories | S-1000 | Optionl |
| Rabbit anti-calbindina anticorpo | Abcam | ab11426 | Optionl |
| Biotinlyated goat anti-rabbit IgG | Vector Laboratories | BA-1000 | Optionl |
| VECTASTAIN ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | Optionl |
Referências
- Brown, A. S. Epidemiologic studies of exposure to prenatal infection and risk of schizophrenia and autism. Dev Neurobiol. 72 (10), 1272-1276 (2012).
- Fatemi, S. H., et al.
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Reimpressões e permissões
