Aqui nós descrevemos o procedimento detalhado de isquemia e reperfusão em ratos que resulta em lesão reprodutível sem mortalidade para incentivar a padronização da técnica em todo o campo. Este modelo de lesão por isquemia-reperfusão intestinal pode ser utilizada para estudar os mecanismos celulares e moleculares da lesão e da regeneração.
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Artigo de método
Modelo murino de isquemia-reperfusão
Neste artigo
Resumo
Resumo
isquemia intestinal é uma condição de risco de vida associada com uma ampla gama de condições clínicas, incluindo a aterosclerose, trombose, hipotensão, enterocolite necrotizante, transplante do intestino, trauma e inflamação crónica. lesão isquemia-reperfusão (IR) é uma consequência da isquemia mesentérica aguda, causada por fluxo inadequado de sangue através dos vasos mesentéricos, resultando em danos intestinal. A reperfusão após isquemia pode agravar os danos do intestino. Os mecanismos de lesão IR são complexos e pouco conhecidos. Portanto, modelos animais experimentais pequenas são críticas para a compreensão da patofisiologia da lesão de IR e o desenvolvimento de novas terapias.
Aqui nós descrevemos um modelo de rato de lesão IR intestinal aguda que fornece lesão reprodutível do intestino delgado sem mortalidade. Isto é conseguido através da indução de isquemia na região do íleo distai por temporalmente ocludinag ramos colaterais periféricos e terminais da artéria mesentérica superior por 60 min usando clipes microvasculares. A reperfusão durante 1 hora, ou 2 horas após a lesão em resultados lesão reprodutível do intestino examinado por análise histológica. posição apropriada dos clipes microvasculares é crítica para o processo. Por isso, o clipe de vídeo fornece uma descrição detalhada visuais passo-a-passo desta técnica. Este modelo de lesão intestinal de IR podem ser utilizados para estudar os mecanismos celulares e moleculares da lesão e da regeneração.
Introdução
O intestino é muito sensível à interrupção do fluxo sanguíneo que provoca isquemia e epitelial danos. A reperfusão após isquemia fornece a re-oxigenação do tecido, e pode promover ainda mais a patologia. Portanto, a lesão por isquemia e reperfusão intestinal está associada com uma vasta gama de patologias, incluindo enterocolite necrotizante, a rejeição de aloenxertos em transplantes do intestino delgado, complicações de cirurgia abdominal aórtica do aneurisma, bypass cardiopulmonar, e 1,2 inflamatória doença do intestino. Lesão intestinal IR, isquemia mesentérica especialmente grave, é uma doença potencialmente fatal, resultando em morbidade e mortalidade....
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Protocolo
Os estudos em animais foram realizados de acordo com o Instituto Nacional de Saúde e orientações foram aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee da Trudeau Institute. 8-12 semanas de idade C57BL / 6 murganhos foram utilizados para o estudo.
1. Preparação para a cirurgia
- Preparar e esterilizar instrumentos cirúrgicos.
- Prepare sistema de anestesia com base em isoflurano com cone do nariz, e uma almofada aquecida. Certifique-se de almofada aquecida não está superaquecido (<39 ºC).
- Certifique-se de que a eliminação de gás isofluorano recipiente é posicionado correctamente para garantir as portas....
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Resultados
Nós optimizada do protocolo experimental de cirurgia de IV para se obter lesão induzida IR reprodutível do íleo em ratos. Os resultados representativos são demonstradas nesta secção.
A Figura 1 mostra exemplos de posição clips microvasculares para induzir isquemia do íleo. setas pretas mostram a posição dos principais clipes de oclusão primeiros ramos da ordem de artéria mesentérica superior. setas verdes most.......
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Discussão
O desenvolvimento de modelos de rato de lesão IR intestinal têm melhorado muito a compreensão dos mecanismos de lesão tecidual e ajudado no desenvolvimento de potenciais estratégias terapêuticas para minimizar danos nos tecidos 7,9,11,34. Os passos críticos deste protocolo é o posicionamento adequado dos clipes microvasculares, timing correto da isquemia e histológica adequada avaliação da lesão IR.
A duração da isquemia é crítico para a subsequente lesão do epitélio. O tempo típi.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver conflito de interesses
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo russo Science Foundation, conceder nenhuma. 14-50-00060 e LLC RUSCHEMBIO. Este trabalho também foi apoiado pela Fundação de Crohn e Colite da América conceder 294083 (para AVT), e pelo NIH concessão RO1 DK47700 (para CJ).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Almofada aquecida | Sunbeam | E12107-819 | Alternativa: Braintree Scientific almofada aquecida |
| Máquina de anestesia de pesquisa de mesa | Vasco | UCAP 0001-0000171 | Alternativa: Parkland Scientific, |
| V3000PS Cone de nariz | Parkland Scientific | ARES500 | |
| Vasilha de limpeza e cartucho de reposição | Parkland Scientific | 80000, 80120 | |
| Câmara de Indução | Surgivet | V711802 | |
| Isoflurano | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-10 | Substância controlada, entre em contato com a máquina |
| de cortar animais | Oster | Oster Golden A5 078005-050-003 | |
| Pomada oftálmica | Webster | 8804604 | |
| Buprenorfina | McKesson | 562766 | Substância controlada, entre em contato com IACUC |
| Ketaset (Cetamina HCl) | Pfizer | NADA 45-290 | Substância controlada, entre em contato com IACUC |
| Dicas de algodão | Produtos médicos puritanos | 806-WC | Autoclave antes de usar |
| Produtos Betadine | Purdue | 67618-150-17 | iodopovidona a 10% |
| Aspen | 46066-807-60 | Ajuste à temperatura ambiente antes de usar | |
| Termômetro IR para roedores | BIOSEB | BIO-IRB153 | |
| Micro clipes vasculares, 70 g | Roboz Surgical | RS5424, RS5435 | Alternativa: WPI 14121, para oclusão SMA |
| Micro clipes vasculares, 40 g | Roboz Surgical | RS6472 | Alternativa:WPI 14120, para oclusão de vasos colaterais |
| Pinça de aplicação de clipe | World Precision Instruments | 14189 | Alternativa: Roboz #RS-5410 ou #RS-5440 |
| Gill's 3 hematoxilina | Thermo Scientific | 14-390-17 | |
| Grampos cirúrgicos, Reflex 9 mm | Cell Point Scientific | 201-1000 | |
| Aplicador de autoclip | Beckton Almofada de espuma Byopsy Dickinson | 427630 | |
| de tecido Simport | M476-1 | ||
| Fisher | Healthcare | 15182701A | Histosette II combinação de tampa e base |
| 10% de formalina tamponada Fisher | Scientific | 245-684 | |
| Tesoura de íris cirúrgica | World Precision Instruments | 501263-G SC | Alternativa: Roboz RS6816 |
| Tesoura de operação | World Precision Instruments | 501219-G | Alternativa: Pinça de curativo Roboz RS6814 |
| Roboz Surgical | RS-5228, RS-8122 | Alternativa: World Precision Instruments 1519-G | |
| Heparina, livre de endotoxinas, 300 unidades USP/frasco, 50 mg | Pinça de | 2106 | |
| Reflex | Roboz Surgical | RS-9263 | Alternativa: World Precision Instruments: 500347 |
| Mouses C57BL/6J mouses | Jackson Laboratory | Stock No 0664 | |
| Curativos não aderentes Telfa, 3 x 4, estéreis | Pipetas de transferência Coviden | 1050 | |
| Fisherbrand | Fischer Scientific | 13-711-5AM | Use pipetas para adicionar solução salina gota a gota |
Referências
- Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nat Med. 17, 1391-1401 (2011).
- Lenaerts, K., et al. New insights in intestinal ischemia-reperfusion injury: implications for intestinal transplantation. <....
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Reimpressões e permissões
