Comportamentos olfativos ensaiadas pelo monitoramento do computador de Drosophila Em um olfatômetro de quatro quadrantes

Resumo

Descrevemos aqui uma configuração comportamental e método de análise de dados para testar as respostas olfativas de até 100 moscas do vinagre (Drosophila melanogaster). Este sistema pode ser usado com estímulos olfativos únicos ou múltiplos e adaptável para ativação optogenética ou silenciamento de subconjuntos neuronais.

Resumo

Um dos principais desafios em neurobiologia é entender como os circuitos neurais funcionam para orientar comportamentos adequados com animais. Drosophila melanogaster é um excelente sistema modelo para tais investigações devido aos seus comportamentos complexos, técnicas genéticas poderosas e sistema nervoso compacto. Ensaios comportamentais laboratoriais têm sido muito utilizados com Drosophila para simular propriedades do ambiente natural e estudar os mecanismos neurais subjacentes aos comportamentos correspondentes (por exemplo fototaxia, quimiotaxia, a aprendizagem sensorial e memória) ^1-3. Com a recente disponibilidade de grandes coleções de linhas de Drosophila transgênicas que rotulam subconjuntos neurais específicos, ensaios comportamentais têm assumido um papel de destaque para conectar neurônios com comportamentos ^4-11. paradigmas versáteis e reprodutíveis, em conjunto com as rotinas computacionais subjacentes para análise de dados, são indispensáveis ​​para testes rápidos de linhas de voar candidatos com vários genotypes. Particularmente úteis são as configurações que são flexíveis no número de animais testados, a duração das experiências e a natureza dos estímulos apresentados. O ensaio de escolha também deve gerar dados reprodutível, que é fácil de obter e analisar. Aqui, apresentamos uma descrição detalhada de um sistema e protocolo para ensaiar respostas comportamentais de Drosophila voa em uma grande arena de quatro campos. A configuração é usado aqui para ensaiar respostas de moscas para um único estímulo olfativo; No entanto, o mesmo arranjo pode ser modificado para testar múltiplos olfactivo, estímulos visuais ou optogenetic, ou uma combinação destes. A configuração olfatômetro registra a atividade de populações de moscas que respondem aos odores e métodos analíticos computacionais são aplicadas para quantificar os comportamentos da mosca. Os dados coletados são analisados ​​para obter uma rápida leitura fora de uma corrida experimental, que é essencial para a coleta de dados eficiente e a otimização das condições experimentais.

Introdução

A capacidade de adaptação e respondem ao ambiente externo é crítica para a sobrevivência de todos os animais. Um animal precisa para evitar perigos, procurar comida e encontrar companheiros, e aprender com experiências anteriores. sistemas sensoriais funcionar para receber uma variedade de estímulos visuais, tais como, química e mecanosensorial, e envia esses sinais para o sistema nervoso central a ser interpretada e descodificado. O cérebro, em seguida, direciona comportamentos motores apropriadas com base no ambiente percebido, como a busca de alimento ou escapar de um predador. Entender como sistemas sensoriais detectar o mundo externo, e como o cérebro decodifica e dirige decisões, é um grande desafio em neurobiologia.

Drosophila melanogaster é um sistema poderoso modelo para investigar como neural comportamentos circuitos de guia. Além de ser simples e barata de manter, Drosophila apresentam muitos comportamentos diversos e complexos estereotipada, mas fazê-lo com uma compact sistema nervoso de cerca de 100.000 neurônios. Existem técnicas genéticas poderosas para manipular o genoma de Drosophila, e milhares de linhas transgénicas foram geradas que seletivamente e reprodutível rotular os mesmos subconjuntos de neurônios ^10-13. Estas linhas transgénicas podem ser usadas para manipular selectivamente a actividade dos neurónios marcados (activar ou inibir), e estas manipulações podem ser utilizados para investigar como neural comportamentos funções de guia.

Vários ensaios comportamentais têm sido desenvolvidos para estudar vários comportamentos de Drosophila. Drosophila, como muitos animais, use seu sentido de cheiro para guiar muitas escolhas comportamentais, tais como encontrar comida, encontrar companheiros e evitar perigos. Olfato é, portanto, um bom sistema sensorial para investigar como os estímulos externos são detectados e interpretados pelo sistema nervoso de um animal para orientar as escolhas apropriadas. Como tal, uma série de ensaios foram desenvolvidos para Investigating larval e comportamentos olfativos adultos. Tradicionalmente, os comportamentos olfactivos em Drosophila foram ensaiadas por um paradigma de labirinto em T de dois escolha, que pode ser utilizado para ensaiar inata e comportamentos aprendidos olfactivos ^3. Neste ensaio, cerca de 50 moscas são dado uma escolha entre dois tubos: um tubo contém o odor em questão e o outro contém um odorante de controlo (normalmente o solvente odor). As moscas são dadas um determinado período de tempo para fazer uma escolha, e, em seguida, o número de moscas que estão nas diferentes câmaras são contados. Embora o labirinto em T é um ensaio simples para muitas experiências, há várias limitações. Por exemplo, comportamentos olfativos são medidos em apenas um ponto no tempo, e diferentes escolhas feitas antes deste ponto de tempo são descartados. Da mesma forma, os comportamentos individuais das moscas dentro da população são negligenciadas. Além disso, o labirinto em T requer a contagem manual das moscas, que pode introduzir erros. Finalmente, uma vez que existem apenas duas opções de medição, estereduz o poder estatístico muitas vezes necessária para detectar mudanças comportamentais sutis. Uma alternativa para um dois-escolha T-maze é um de quatro quadrantes (quatro campos) olfatômetro ^14-18. Neste ensaio, os animais explorar uma arena em que cada um dos quatro cantos da arena é preenchido com uma fonte potencial de ar odorizado. A arena tem uma forma de estrela enrugada para maximizar a formação de quatro quadrantes de odor experimentalmente definidos. Se o odor é fornecido em um dos cantos em seguida, é contida apenas em que um quadrante. Os comportamentos dos animais pode ser rastreado como eles entram e saem do quadrante odor, e facilmente em comparação com o seu comportamento nos três quadrantes de controle. Assim, o ensaio olfatômetro de quatro quadrantes registros de resposta comportamental espacial e temporal aos estímulos odor mais de uma grande arena experimental.

O olfatômetro de quatro quadrantes foi desenvolvido pela primeira vez por Pettersson et al. ¹⁵ e Vet et al. ¹⁷ para investigar o olrespostas comportamentais fábrica de Hymenoptera parasítica indivíduo. Faucher et al. ¹⁸ e Semmelhack e Wang ¹⁶ adaptada a configuração para monitorar as respostas olfativas de Drosophila individual. O olfactómetro de quatro quadrantes é igualmente sensível às respostas atractivas e repulsivas, permitindo uma vasta gama de condições de ensaio e odorantes. Software de rastreamento fly escrita por encomenda, desenvolvido por Alex Katsov ¹⁹ e atualmente mantido por Julian Brown (detalhado em Materiais), apresentou vantagens adicionais para implementações mais recentes do olfatômetro de quatro quadrantes ^14,20-23. É agora possível testar até 100 moscas simultaneamente em alta resolução espacial (27,5 pixels / cm) e temporais (30 quadros por segundo) de resolução, que permite extrair vários parâmetros, tais como posição, velocidade e aceleração de moscas em qualquer ponto do tempo. Isso permite que as investigações sobre a dinâmica das respostas comportamentais das moscas aos odores ²⁰ . Deve notar-se, no entanto, que a identidade de moscas individuais dentro da população durante todo o período de seguimento não é mantido. Em vez disso, cada faixa mosca é registrado por até duas faixas mosca não se cruzam. Em que ponto, novas faixas são atribuídos após as moscas divergem. Ao incorporar outro software de captura de vídeo (detalhado na Tabela de Materiais), a mesma configuração permite períodos de monitoramento flexível e pode ser usado para controlar moscas por até 24 horas, tomando imagens a uma taxa de quadros mais baixa. Esta opção foi utilizada para estudar os comportamentos que põem ovos de moscas e comparar suas posições corporais com as preferências oviposição ^14. O olfactómetro de quatro campos podem também ser utilizados para estudar as respostas para multimodal (por exemplo, olfativas e visuais) estímulos, ou para combinar optogenetic ⁹ ou ²¹ termogênico estimulação com apresentações de estímulos sensoriais. Além disso, a resolução temporal alta permite que a extracção de trajectórias for cada mosca individual no conjunto de dados ensemble. Portanto, o método permite investigação sobre comportamentos da população olfativos-guiada e também interações sociais individuais. Os dados gerados por este ensaio são robustos e altamente reprodutível, que permite a utilização do olfactómetro de quatro campos para telas comportamentais.

Descrevemos aqui o conjunto de instalação para um olfatômetro de quatro quadrantes. Demonstramos ainda mais a sua utilização no ensaio de atração olfativa em resposta ao vinagre de maçã e repulsão em resposta ao propionato de etilo altamente concentrado. Finalmente, descreve-se e proporcionar o Exemplo de código para a análise dos dados de controlo de mosca gravados.

Protocolo

1. Setup Assembléia

1. Fabricação na arena em forma de estrela (19,5 cm por 19,5 cm por 0,7 cm) de politetrafluoretileno (PTFE), de acordo com o desenho (Materiais Suplementares, SupplementalSketch_StarShapedArena.pdf) fornecidos. A arena podem ser fabricados por uma instalação de um costume ou comercial.
2. Adquirir duas placas de vidro (20,25 cm por 20,25 cm de altura com a espessura de 2 mm), e um furo (~ 0,7 cm de diâmetro) precisamente no centro de uma das placas de vidro, utilizando uma broca diamantada.
3. Fabricar uma caixa de comportamento à prova de luz para a arena comportamental. fabricar também uma caixa de câmera à prova de luz para a câmera de vídeo CCD infra-vermelho de acordo com os desenhos fornecidos (Materiais Suplementares, SupplementalSketch_LightTightBox.pdf). As caixas podem ser fabricados por um uma instalação personalizada comercial ou.
4. Montar o aparelho de ar condicionado na parede posterior e as matrizes de LED nas paredes laterais da caixa de comportamento. Coloque a sonda de temperaturana caixa de comportamento através de um orifício lateral para feedback de temperatura em tempo real e ajuste (ver Figuras 1 e 2 para detalhes).
5. Anexar o filtro IR e polarizador circular para a câmera, e montar o conjunto na caixa de câmera. A caixa de comportamento e caixa de câmera são separados por uma janela de vidro para melhor controle de temperatura da caixa de comportamento (ver Figuras 1 e 2 para detalhes).
6. Ligue a câmera CCD infravermelho a um adaptador de câmera. Ligue o adaptador de câmera para um conversor USB. Ligue o conversor USB a uma porta USB do computador para aquisição de dados.
7. Instalar o driver para o conversor de vídeo no computador de acordo com as instruções do fabricante. Opcionalmente, instale o software de processamento de imagem fornecida pelo fabricante do conversor de vídeo USB para acessar uma ampla gama de configurações de câmera e parâmetros de aquisição.
8. Ligue o aparelho de ar condicionado (por meio de "output"Na parte de trás do controlador de temperatura) e a sonda de temperatura (por meio de" termopar "na parte de trás do controlador de temperatura) para o controlador de temperatura. Colocar o sensor dentro da caixa de comportamento.
   Nota: O sistema de controle da temperatura no nosso esquema é capaz de manter a temperatura da caixa de entre 18 ° C e 30 ° C. Temperaturas ambientes mais elevadas ou mais baixas podem ser úteis para termogênico ^(ts dTrpA1, TRPM8 ou shibire) experimentos para manipular a actividade neuronal ou inibir a transmissão sináptica. Para a maioria das experiências, a temperatura é mantida a 25 ° C.
9. Monte o sistema de entrega de odor nas etapas seguintes (ver Figura 1B para esquemas detalhados e acessórios de conexão):
   1. Usar o regulador de pressão de ar para controlar a entrada de ar do sistema de ar condicionado central. Conectar um filtro de ar de carbono (cheio com carvão vegetal) para o regulador de pressão para purificar o ar a partir do centro de umsistema de IV.
   2. Monte o sistema de controle de fluxo que consiste em múltiplos canais regulados por tubos do medidor de vazão de alta resolução.
   3. Ligue a saída do filtro de ar de carbono para os tubos do caudalímetro através de um colector tal como mostrado na Figura 1B e 2F. Direcionar a saída dos tubos do medidor de vazão por meio de válvulas solenóide de 3 vias controlados eletronicamente para regular se o ar limpo deixando os medidores de vazão é expelido para a sala ou entrou em câmaras de odor feitas sob medida ^24.
   4. Instalar o controlador da válvula de solenóide de acordo com o manual do fabricante.
10. Instalar o medidor de fluxo de ar electrónico, ligando-o a um dispositivo de aquisição de dados (DAQ) e uma fonte de alimentação de acordo com o manual do fabricante. Instalar o software de interface DAQ para verificar débitos iguais em cada quadrante da arena antes de cada experimento.

2. Olfativo Estímulos Preparação

1. Prepare 5 odorcâmaras de formigas ²⁴ que consistem em um recipiente de plástico exterior, vidro de embalagem interior, uma PTFE inserção tampa feito por encomenda, tampa do recipiente original com parte central removida e duas válvulas unidirecionais.
   Nota: Um anel em torno da tampa de PTFE pode ser usado para evitar fuga de ar da câmara de odores durante a perfusão de odor. Veja a Figura 1 para esquemática e a Figura 2 para fotos das câmaras.
2. Use quatro câmaras olfativos para controlos do solvente, e uma câmara para um odorante teste. Encher os recipientes de vidro com 1000 uL de diluição solvente ou odorante (odorantes de teste + solventes apropriados, misturar bem antes de experiências), colocar o recipiente de vidro no interior da câmara de plástico correspondente (não derramar o líquido para dentro da câmara de plástico) e aperte a tampa . Certifique-se de usar sempre uma câmara limpa para o odorante de teste e controlos do solvente.
   Nota: atração olfativo pode ser desencadeada por 1/16 de diluição de vinagre de maçã (5% de acidez) em water. Em contraste, o comportamento de repulsão olfactiva pode ser estudada utilizando uma diluição de 10% de propionato de etilo em óleo mineral. estímulos de controle nestes casos são câmaras de odor com óleo mineral puro.

3. Preparação Fly

1. Traseira voa em meio fubá padrão. Coloque 30 do sexo masculino e 30 moscas parentais feminina em uma garrafa padrão, e deixá-los põem ovos durante 5 dias a 25 ° C ou à temperatura ambiente.
2. Para cada experiência, recolher recém eclosed (<1 dia de idade) 25 do sexo masculino e 25 do sexo feminino voa sob breves CO ₂ anestesia.
3. Manter moscas num frasco com meio de mosca padrão durante 2-4 dias.
4. 40-42 h antes da experiência, transferir as moscas sem CO ₂ anestesia   para um frasco com ~ 10 ml de gel de agarose 1%. Isto irá manter as moscas umidificadas sem alimentos, o que ajuda a aumentar a sua actividade locomotora.
   Nota: Mais de 90% das moscas deve sobreviver à inanição. Alguns genótipos são menos curartua e não pode fazê-lo através de uma fome de 40 horas. Nesses casos, períodos mais curtos, tais como 24-28 horas são aceitáveis, mas deve ser mantido o mesmo para todas as condições experimentais e repete.

4. Respostas comportamentais aos atrativos e repelente de Fragrâncias

1. Ligue o controlador de temperatura e configurá-lo para 25 ° C.
2. Ligar as câmaras olfactivos (Fragrância de controlo e de teste) por inserção do tubo para a saída da câmara de odorante e ao premir-para-ligar montagem na caixa do comportamento.
3. Verifique a taxa de fluxo em cada quadrante usando o medidor de fluxo de ar para se certificar de que a corrente de ar e controle de odores é igual a 100 ml / min.
4. Limpar a arena PTFE mosca e as placas de vidro com etanol 70% 2-3 vezes e permitir-lhes totalmente ar seco (~ 3-4 min).
5. Cole as placas de vidro para com grampos na arena.
6. Transferência voa sem CO ₂ em anestesia através do orifício de uma das placas de vidro na arena. à réer a transferência, colocar uma malha circular no furo para impedir que as moscas de escapar.
   Nota: CO ₂ anestesia foi mostrada para afectar o comportamento de Drosophila ²⁵ e não deve ser usada dentro de 24 horas de uma experiência de comportamento.
7. Coloque com moscas dentro da câmara à prova de luz da arena, conecte as correntes de ar quatro de controle, ligando o tubo ligado ao push-to acessório de conexão na caixa de comportamento para os cantos de arena, feche a porta da câmara e espere 10- 15 min para permitir que as moscas se aclimatar ao novo ambiente. Se possível, desligue as luzes na sala onde os experimentos são realizados, para evitar possível vazamento mínima luz que pode influenciar o resultado experimental.
8. Executar um experimento de controle 5-10 min, em que as moscas são expostos a correntes de ar 4 controle.
9. Analisar os dados imediatamente (ver secção A análise dos dados abaixo) para se certificar de que as moscas são distribuídos uniformemente na arena, e Índice da atração está pertoa 0. Este passo é essencial, uma vez que verifica se não existem fontes não controladas de preferências e aversões dentro da arena (por exemplo, luz vazamento do exterior, distribuição de temperatura desigual, arena irregular, contaminação odor, etc.). Se as moscas são distribuídos de forma desigual ou a sua actividade locomotora é baixo, descartar as moscas, limpar a arena de novo (passo 4.4) e utilizar um novo lote de moscas para repetir a experiência.
10. Ligue a câmara de teste odorante à configuração ligando as 3-way válvulas ou re-conectar os tubos conectores.
11. Execute experimento de teste para 5-10 min e analisar os dados como discutido na seção 5 abaixo (veja também a referência 14 e Figura 3). Gravações mais longos do que 20 minutos pode resultar em arquivos de dados que podem ser difíceis de processo computacionalmente. Se gravações mais experimentais são desejados, parar rapidamente e re-iniciar o programa de rastreamento. Isso resulta em um ~ 10 seg lacuna entre as gravações experimentais.
12. discarmoscas d.
13. Limpos arena e vidro placas com 70% de etanol (passo 4.4), e substituir os tubos conectores dentro do compartimento à prova de luz. Para agilizar experimentos, uma nova arena limpo pode ser usado, ea arena sujo limpo durante a realização de ensaios experimentais.
14. Executar outra experiência com um novo lote de moscas, se necessário. Se vários experimentos são executados no mesmo dia, tomar extremo cuidado para garantir que nenhum odorante é deixado no sistema a partir de um teste anterior. Isto não é normalmente um problema com baixas concentrações de odorantes ou com CO _2, mas pode ser necessário para estímulos altamente concentradas até um intervalo de 24 horas entre as execuções experimentais. Além disso, todos os tubos depois de os tubos de escoamento pode ser substituído se a contaminação odorante é suspeito durante as experiências de controlo. Sempre deixar o ar seco em entre as experiências para lavar continuamente o sistema

Análise 5. Os dados

Nota: A mosca sugeriu softwar aquisição de rastreamentoe (detalhado em Materiais), as faixas moscas em tempo real durante a aquisição, e salva o carimbo de tempo e coordenadas de todas as moscas detectados em formato * .dat. Nós desenvolvemos uma Matlab rotina feitos por medida para converter os dados para um formato Matlab, e para analisar os dados. exemplos de código são fornecidos em Materiais suplementares, mas os detalhes da implementação dependerá do software utilizado para a aquisição de dados.

1. Carregar os dados brutos. Criar uma máscara espacial que segue os contornos da arena e aplicar a máscara para os dados em bruto para remover todos os pontos de dados que caem fora da arena uma vez que representam ruído (Figura 4A, Recurso Código MaskSpatialFiltering.m, Score.m, DrawCircularMask. m).
2. Remove todos os pontos de dados que se movem a uma velocidade inferior a 0,163 cm / s durante mais de 3s, como estes dados é provável que seja o ruído gerado por moscas ou não em movimento (Figura 4B, Recurso Código TemporalFiltering.m).
3. Visualize dados restantespontos de plotagem-los todos de uma vez ou como trajetórias individuais (Figura 3, Código Complementar SingleTrajectoryViewer.m).
   Nota: A localização das fronteiras odor nos quatro campos provavelmente depende de um número de fatores, como as características de cada odorante e as taxas de fluxo de ar que está sendo usado. Por exemplo, odorants altamente voláteis provavelmente vai encher o quadrante odor mais completa do que odorants menos voláteis. Assim, é provável que cada odorante podem apresentar ligeiramente diferentes limites de odor. A utilização de um detector de fotoionização para medir limites de odores pode ser problemático, uma vez que utiliza uma amostra de ar de vácuo a partir de um determinado ponto, e assim interrompe a concentração odorante naquele ponto. No entanto, os limites de odores pode ser rapidamente calculada com base em dados do comportamento da mosca. Por exemplo, um limite de odor à base de pistas mosca acumulados em resposta a diferentes odores pode ser claramente observado nas Figuras 3C e 3D.
4. Calcular um índice atracção para determinar se experiências de controlo gerar nenhuma resposta preferência, e também para aceder a resposta a um odorante (ou optogenetic ⁹⁾ estímulo. Para calcular uma atração Index (AI), use o último 5 min de um controle ou gravação de teste. Para se obter uma medida de atracção que se situa entre 1 (atracção absoluta) e -1 (repulsão absoluta), a seguinte fórmula é utilizada para calcular o AI:
   
   onde _{o teste} N é o número de pontos de dados no quadrante de teste, _controlo N é o número médio de pontos de dados nas três quadrantes de controlo. Esta medida é intuitivo como nenhuma preferência seria indicado por valores próximos de zero. No entanto, ele não indica correctamente a proporção do número total de moscas que se encontram no quadrante odorante. Para obter esta medida, um Índice Percentagem (IP) podem ser utilizados:
   onde _{o teste} N é o número de pontos de dados no quadrante de teste, e N _total é o número total de pontos de dados em todos os quatro quadrantes. Esta fórmula prevê uma medida que cai entre 0 e 1, com 0,25 correspondente a nenhuma preferência comportamental (Figura 3E e 4C, Recurso Código AttractionIndex.m).
5. Executar 5-10 repetições de cada condição experimental, usando um novo grupo de moscas para cada repetição. Comparar os índices de atração entre as condições ou contra controlos utilizando o teste de Kolmogorov-Smirnov não paramétrico (Figura 3F, função kstest2 em Matlab).

Resultados

Os olfatômetro registros e ensaio quatro quadrantes analisa as atividades de passeio de muitas moscas sobre um grande espaço comportamental. Odorantes pode ser introduzido nas correntes de ar que entra com uma, duas, três, ou todos os quatro quadrantes. Na ausência de odores, as moscas irá mover-se livremente entre todos os quatro quadrantes. Este comportamento é crucial para observar uma vez que indica que polarizações un-intencional não têm sido introduzidos no ensaio. Estes desvios po...

Discussão

O olfactómetro de quatro campos descrito aqui é um sistema comportamental versátil para estudar as respostas olfativas de populações grandes de tipo selvagem e mutante de Drosophila moscas. Cada experiência leva ~ 1 hr (incluindo instalação, ensaios experimentais, e limpeza) e 4-6 experimentos podem ser realizados rotineiramente a cada dia. Um ensaio típico usando 40-50 moscas durante 5 minutos gera aproximadamente 450.000 rastreados pontos de dados para análise. A configuração descrita, também podem ser utiliz...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Sistema de entrega de ar			(Quantidade necessária)
Tubulação e conectores
Coletores Termoplásticos NPT(F)	Cole-Parmer, IL, EUA	R-31522-31	1
Bico redutor hexagonal (1/4MNPT->1/8MNPT)	McMaster-Carr, IL, EUA	5232T314	1
Tubulação ( ID: 1/8)	McMaster-Carr, IL, EUA	5108K43	Tubulação de 50 pés
(ID: 1/16)	McMaster-Carr, IL, EUA	52355K41	de 100 pés
	McMaster-Carr, IL, EUA	5117K71	1 pacote
de conexões de tubo push-to-connect	McMaster-Carr, IL, EUA	5779K102	4
conexões de tubo farpado (1 / 4MNPT->1 / 8BF)	McMaster-Carr, IL, EUA	5463K439	1 pacote (10)
Conexões de Tubo Farpado (1/8MNPT->1/8BF)	McMaster-Carr, IL, EUA	5463K438	2 pacotes (10)
Conexões de Tubo Farpado (1/8MNPT->1/16BF)	McMaster-Carr, IL, EUA	5463K4	2 pack (10)
Conexões de Tubo Farpado (1/4MNPT->1/4BF)	McMaster-Carr, IL, USA	5670K84	1
Plug de cabeça hexagonal	McMaster-Carr, IL, USA	48335K152	1
Regulador de pressão de ar, filtro de ar e medidores de vazão			(Quantidade necessária)
Unidade de secagem de gás labatorial	W A HAMMOND DRIERITE CO LTD, OH, EUA	Modelo: L68-NP-303; estoque #26840	1
Quadros multitubos para tubos de fluxo de 150 mm	Cole-Parmer, IL, EUA	R03215-30	1
Quadros multitubos para tubos de fluxo de 150 mm	Cole-Parmer, IL, EUA	R03215-76	1
tubos de fluxo de 150 mm	Cole-Parmer, IL, EUA	R-03217-15	9
Cartucho de válvula	Cole-Parmer, IL, EUA	R-03218-72	9
Regulador de ar de precisão	McMaster-Carr, IL, EUA	6162K13	1
Válvulas solenoidais	Automate Scientific, Berkeley, CA	02-10i	4
Controlador de válvula solenóide	ValveLink 8.2, Automate Scientific, Berkeley, CA	01-18	1
Medidor de vazão eletrônico	Honeywell	AWM3100V	1
DAQ (NI USB-6009, National Instruments) e a	National Instruments	NI USB-6009	1
Fonte de alimentação	Extech Instruments	382200	1
Câmaras de
Polipropileno Boca larga Jar 2 oz; 60 ml	Nalgene	562118-0002	São necessários pelo menos 5 por experimento, mas uma câmara separada é necessária para cada diluição de cada odorante. Disponível na Container Store, parte #635114)
Câmara de odor de vidro, 0.25 oz	Garrafa Sunburst	LB4B	Pelo menos 5 são necessários por experimento
Válvula "In" para câmara de odor	Smart Products, Inc., CA, USA	214224PB-0011S000-4074	1 dessas peças é usada por câmara de odor, mas elas precisam ser substituídas com frequência
Válvula de "saída" para câmara de odor	Smart Products, Inc., CA, USA	224214PB-0011S000-4074	1 dessas peças é usada por câmara de odor, mas elas precisam ser substituídas frequentemente
Anel O	RT Dygert International, MN, EUA	AS568-029 Buna-N O-R	1 pacote (100)
Fly arena, câmera e caixas de comportamento			(Quantidade necessária)
Comportamento e material da caixa da câmera	Plásticos Interstate, CA, EUA	ABS extrudado preto (https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php)	1803 polegadas
quadradasTeflon para arena de mosca e inserções de câmara de odor, 3/8" de espessura, 12" x 12"	McMaster-Carr, IL, EUA	8545K27	1
Placas de vidro, 1/8" de espessura, 9" x 9"	McMaster-Carr, IL, EUA	8476K191	algarismo
Controlador termoelétrico de ação dupla	WAtronix Inc, CA, USA	DA12V-K-0	1
matriz de LED IR	Advanced Illumination, Rochester, VT, USA	AL4554-88024, PS24-TL	2 matrizes de LED e uma fonte de alimentação
Unidade de ar condicionado	Melcor Store	MAA280T-12	1
Sistema de imagem			(Quantidade necessária)
Cosmicar/Pentax C21211TH (12,5 mm F/1.4) Lente C-mount	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, EUA	KP	1
CCXC-12P05N Cabo de interconexão	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, EUA	SOCCXC12P05N	1
Adaptador de câmera DC-700	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, EUA		1
P+B 40,5 093 Filtro IR	B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, NY, EUA	65-072442	1
TiFFEN 40,5 mm Polarizador circular	Amazon		1
Câmera de vídeo IR	Industrial Vision Source, FL, EUA	Sony XC-EI50 (SY-XC-E150)	1
Conversor de vídeo USB	The Imagingsource, NC, EUA	DFG/USB2-It	1
iFlySpy2 (software de rastreamento de moscas)	Julian Brown, Stanford, Calfornia: julianrbrown@gmail.com	iFlySpy2	1
IC Capture 2.2 software	The Imagingsource, NC, EUA (http://www.theimagingsource.com/en_US/products/software/iccapture/)
Diversos			(Quantidade necessária)
Ferramenta rotativa Dremel	Dremel, Racine, WI, USA	Dremel 8000-03	1
Brocas revestidas de diamante para corte de vidro	Disponível em vários fornecedores; MSC Industrial Supply Co, Melville, NY	90606328	1