Ferramentas para diagnosticar má absorção de ácidos biliares e medir o transporte de ácidos biliares in vivo são limitadas. Uma abordagem inovadora de animais vivos é descrito que utiliza protões combinado (1 H), além de flúor (19 F) ressonância magnética; esta nova metodologia tem potencial de translação para o rastreio de má absorção de ácidos biliares, na prática clínica.
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Artigo de método
Utilizando os ácidos biliares e multi-fluorados
Neste artigo
Resumo
Resumo
Junto com seu papel tradicional como detergentes que facilitam a absorção de gordura, literatura emergente indica que os ácidos biliares são moléculas sinalizadoras potentes que afetam vários órgãos; modulam a motilidade intestinal e produção hormonal, e alterar o tom vascular, o metabolismo da glicose, metabolismo lipídico e utilização de energia. Alterações em ácidos biliares fecais podem alterar a microbiota intestinal e promover o cólon patologia incluindo diarreia cholerrheic e cancro do cólon. reguladores-chave da composição de ácidos biliares fecal são a pequena intestinal apical dependente de sódio Bile Ácido Transporter (ASBT) e de crescimento de fibroblastos fator-19 (FGF19). Reduzida expressão e função de ASBT diminui o ácido biliar intestinal up-take. Além disso, os dados in vitro sugerem que alguns medicamentos aprovados pela FDA inibir a função ASBT. liberação FGF19 deficiente aumenta a síntese de ácido biliar hepática e liberação para o intestino para níveis que sobrecarregam ASBT. De qualquer disfunção ou ASBT deficiência aumenta FGF19 fácidos biliares e ECAL pode causar diarreia crónica e promover a neoplasia do cólon. Lamentavelmente, ferramentas para medir má absorção de ácidos biliares e as ações de drogas no transporte dos ácidos biliares in vivo são limitadas. Para compreender as acções complexos dos ácidos biliares, são necessárias técnicas que permitem a monitorização simultânea de ácidos biliares no intestino e tecidos metabólicos. Isso nos levou a conceber um método inovador para medir o transporte de ácidos biliares de animais vivos usando uma combinação de protões (1H) e flúor (19 F) imagens de ressonância magnética (MRI). Marcadores novos para flúor (19F) à base de ressonância magnética animal vivo foram criadas e testadas, tanto in vitro como in vivo. Pontos fortes desta abordagem incluem a falta de exposição à radiação e potencial translacional ionizante para a investigação e prática clínica.
Introdução
Juntamente com o seu papel clássico como detergentes que facilitam a absorção de gordura no intestino, ácidos biliares têm emergido como moléculas de sinalização potentes que afectam vários órgãos para além dos associados com a sua circulação entero-hepática 1,2. Além de controlar o seu próprio metabolismo, ácidos biliares modular vários aspectos da fisiologia gastrointestinal (por exemplo, motilidade intestinal e produção da hormona incretina, fisiologia cólon e suscetibilidade ao câncer) e ter efeitos sistémicos sobre o tônus vascular, glicose e metabolismo lipídico, e utilização de energia. Embora alguns destes efeitos são mediados no intestino....
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Protocolo
O protocolo seguinte adere às diretrizes aprovadas pelo Comitê Institucional de Animal Care and Use (IACUC) da Universidade de Maryland School of Medicine (IACUC Protocolo # 0415011, aprovado 18 de junho de 2015).
1. Ratos Gavaging com 19 F-Rotulado Bile Acids
- Ratinhos gavagem com 150 mg / kg de peso corporal 19 ácidos biliares F-rotulados. Encher uma seringa de 1 ml ao volume necessário com 19 solução mãe de ácido biliar F marcado com [ácido eólico-trifluoro-acetil lisina (CA-Lys-TFA; em 1: 1 de polietileno glicol 400: fosfato de Dulbecco solução salina tamponada) ou cholylsarcosine- trifluoro-N-metil-acetamida (CA....
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Resultados
O uso de MFBA para in vivo ressonância magnética para "ver" o transporte de ácido biliar em tempo real tem um grande potencial tanto para pesquisa e uso clínico. Além disso, os métodos descritos aqui para a ressecção da vesícula biliar e a análise bioquímica do seu conteúdo, utilizando a cromatografia líquida e espectrometria de massa de fornecer um meio de confirmar os resultados de imagiologia. No entanto, a eficácia destes métodos requer uma dosagem precisa, o tempo.......
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Discussão
A síntese de CA-Lys-TFA e CA-Sar-TFMA e a análise in vitro de seu transporte utilizando células de rim canino Madin-Darby transfectadas de forma estável que expressam ASBT e células embrionárias de rim humano que expressam o polipéptido de sódio / taurocolato de co-transporte (NTCP) são detalhadas noutro local 13,14. Aqui, o foco é a administração oral de MFBA por sonda aos animais vivos, seguido de colheita da vesícula biliar, fígado e sangue para análise do teor MFBA, e, nomeadamente, imagiologia M.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelos Institutos Nacionais de Saúde, Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e Renais (números de subvenção R21 DK093406 e T32 DK067872 para JP.R.) e um prémio de mérito VA (número de concessão 1BX002129 para JP.R.).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Triturador de tecidos de vidro Duall tamanho-21 | Kimble Chase Life Science, Vineland, NJ | 885351-0022 | |
| Bruker BioSpec 70/30USR Avance III 7T furo horizontal MR Scanner | Bruker Biospin MRI GmbH, Alemanha | Use o software complementar Paravision versão 5.1 (consulte a etapa 3.5) | |
| Bruker 40 mm 19F/1H bobina de volume linerar de dupla sintonia | Bruker Biospin MRI GmbH, Alemanha | Use o software complementar Paravision Versão 5.1 (consulte a etapa 3.5) | |
| Sistema Waters Acquity UPLC com Detector Quadrupolo | Waters Corporation, Milford, MA | ||
| Waters Acquity UPLC híbrido em ponte de etileno C8 1.7 μ m coluna de 2,1 x 50 mm | Waters Corporation, Milford, MA | ||
| Agulha de gavagem | Braintree Scientific, INC. | N-010 | 20 G-1.5" curvado 2.25 mm bola |
| 2 Aço Inoxidável Hemostáticos | VWR | 10755-018 | 4 e 5 polegadas, cetamina direta |
| MWI Veterinary Supply | 501090 | Cetamina zetamina 100 mg/ml | |
| Xylazine | Akorn, Inc. | de 20 mg/ml | |
| Abbott AbbocathTM-T.I.V. G720-A01 4535-42 | 24-G x 0,75" |
Referências
- Thomas, C., Pellicciari, R., Pruzanski, M., Auwerx, J., Schoonjans, K. Targeting bile-acid signalling for metabolic diseases. Nat Rev Drug Discov. 7, 678-693 (2008).
- Vallim, T. Q., Edwards, P. A. Bile acids have the gall to function as hormones. Cell Metab. 10, 162-164 (2009).
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Reimpressões e permissões
