Um Modelo aguda da retina para a Avaliação sanguíneos da retina barreira Descumprimento e potenciais fármacos para o tratamento

Resumo

Um baixo custo, o sistema easy-to-use e poderoso é estabelecida para avaliar potenciais tratamentos que possam amenizar violação sangue barreira retina induzida pela histamina. vazamento dos vasos sanguíneos, a ativação de células Müller e a continuidade dos processos neuronais são utilizados para avaliar a resposta a danos e sua reversão com uma droga potencial, lipoxina A4.

Resumo

Um sistema modelo poderoso, fácil de usar e de baixo custo é estabelecido para avaliar possíveis tratamentos que possam melhorar a violação da barreira retiniana sanguínea. Um fator inflamatório, a histamina, demonstrou comprometer a integridade dos vasos na retina cultivada por meio da coloração positiva de IgG fora dos vasos sanguíneos. Os efeitos da própria histamina e dos medicamentos candidatos a tratamentos potenciais, como a lipoxina A4, são avaliados usando três parâmetros: vazamento de vasos sanguíneos via imunomarcação de IgG, ativação de células de Müller via coloração GFAP e alteração nos dendritos neuronais por meio de coloração para MAP2. Além disso, a organização em camadas da retina permite uma análise detalhada dos processos de Müller e das células ganglionares, como mudanças na largura e continuidade. Embora os dados apresentados sejam com cultura de retina suína, o sistema é aplicável a várias espécies. Assim, o modelo fornece uma ferramenta confiável para investigar os efeitos iniciais do comprometimento da integridade dos vasos retinianos em diferentes tipos de células e também para avaliar potenciais candidatos a medicamentos para tratamento.

Introdução

Um crescente corpo de evidências suportam a existência de barreira retiniana sanguínea (BRB) ^1-5 e a sua semelhança com a barreira hemato-encefálica (BHE) ^6,7. Compromisso da BHE foi firmemente ligado causalmente ou como um marcador diagnóstico para doenças neurodegenerativas crónicas tais como a doença de Alzheimer (AD) e ^8,9 agudas condições tais como delírio ^10. percepções mecanicistas para estas patologias e descobertas para alvos potenciais da droga são geralmente prejudicada pela acessibilidade e rede limitada complexidade do cérebro. Alternativas tais como imagiologia in vivo ^11, cérebro cultura o....

Protocolo

Todos os protocolos foram realizados em conformidade com as políticas do Comitê animal Institucional Cuidado e Uso quando aplicável.

1. Preparação

1. Preparar os meios de estabilização com 75% de Dulbecco Modified Eagle Médium (DMEM), 25% de Hanks Solução Salina Equilibrada (SSHE). Misture bem, alíquota e armazenar a -20 ° C até à sua utilização.
2. Prepara-se o tampão fosfato salino (PBS) e esterilizar em autoclave. Guardar a solução à temperatura ambiente. Aquece-se a PBS para 37 ° C antes da experiência (5 ml por poço).
3. Preparar 10%, 20% e 30% de sacarose em PBS. Filtrar todas as soluções individualmente mais s....

Resultados

Apresentamos, um sistema de baixo custo em tempo eficiente e fácil de usar para avaliar potenciais tratamentos que podem proteger contra a violação BRB induzida pela histamina. IgG é limitada dentro dos vasos na retina controle (Figura 1A), mas vaza dos vasos sanguíneos após a exposição de histamina (Figura 1B), confirmando que o modelo seja estabelecida com sucesso.

LXA4 foi escolhido para de.......

Discussão

Neste relatório, apresentamos um poderoso modelo retiniano agudo ex vivo de disfunção BRB usando a retina suína. Este sistema modelo não requer instrumentos especiais e pode ser facilmente adaptado na maioria das configurações de laboratório. No entanto, para obter um resultado bem-sucedido, várias etapas requerem muita atenção. Após a obtenção dos globos oculares da fonte, estes devem ser mantidos a 4 °C ou congelados e processados o mais rapidamente possível. Quando o efeito de um tratamento está sendo analisa.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
DMEM	Life Technologies	11965-092
HBSS	Life Technologies	14170-112
Sucrose	J.T.Baker	4072-05
Histamina		H7125-1G
	Invitrogen
PFA	Microscopia Eletrônica Sciences	15710
Meio de Congelamento	Triangle Biomedical Sciences	TFM-5
Soro de Cabra Normal	Rockland	D104-00-0050
Triton X-100	Sigma	T8787
GFAP Anticorpo	Millipore	AB5804
MAP2 Anticorpo	EMD Millipore	MAB3418
FITC conjugado Burro anti-coelho IgG	Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.	711-095-152
Cy3 Burro conjugado anti-rato IgG	Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.	715-165-150
meio de montagem contendo DAPI	Vector Laboratories, Inc.	H-1200
	Nikon	Eclipse Ti microscópio
ImageJ	National Institutes of Health	1.45s

Penicilina-Estreptomicina  Sigma Microscópio Confocal a Laser