Métodos de estudo de lipídios Alterações nos neutrófilos ea subsequente formação de neutrófilos Extracelular Traps

Graham Brogden; Ariane Neumann; Diab M. Husein; Friederike Reuner; Hassan Y. Naim; Maren von Köckritz-Blickwede

doi:10.3791/54667

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Artigo de método

Métodos de estudo de lipídios Alterações nos neutrófilos ea subsequente formação de neutrófilos Extracelular Traps

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DOI:

10.3791/54667

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29 de março de 2017

Graham Brogden^*¹^,² , Ariane Neumann^*¹^,³ , Diab M. Husein¹ , Friederike Reuner¹^,⁴ , Hassan Y. Naim¹ , Maren von Köckritz-Blickwede¹^,⁴

¹Department of Physiological Chemistry, University of Veterinary Medicine Hannover, ²Fish Disease Research Unit, University of Veterinary Medicine, ³Department of Clinical Sciences, Biomedical Center, Lund University, ⁴Research Center for Emerging Infections and Zoonoses (RIZ), University of Veterinary Medicine Hannover

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Lipídios são conhecidos por desempenhar um papel importante nas funções celulares. Aqui, descrevemos um método para determinar a composição lipídica de neutrófilos, com ênfase sobre o nível de colesterol, usando tanto HPTLC e HPLC para obter uma melhor compreensão dos mecanismos subjacentes da formação armadilha extracelular de neutrófilos.

Resumo

análise de lípidos realizada por cromatografia em camada fina de elevado rendimento (HPTLC) é um método relativamente simples e de baixo custo para analisar uma larga gama de lipidos. A função dos lípidos (por exemplo, em interacções hospedeiro-patogénio ou entrada de acolhimento) tem sido relatada a desempenhar um papel crucial em processos celulares. Aqui, mostramos um método para determinar a composição lipídica, com um foco no nível de colesterol de neutrófilos derivados do sangue primárias, por HPTLC em comparação com cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). O objectivo foi o de investigar o papel das alterações de lípido / colesterol na formação de armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETS). libertação líquida é conhecido como um mecanismo de defesa do hospedeiro para evitar a propagação de agentes patogénicos no interior do hospedeiro. Portanto, os neutrófilos humanos derivadas do sangue foram tratadas com metil-β-ciclodextrina (MβCD) para induzir alterações lipídicas nas células. Usando HPTLC e HPLC, que demonstraram que o tratamento MβCD das células leva a lipídicoalterações associadas com uma redução significativa no teor de colesterol da célula. Ao mesmo tempo, o tratamento MβCD dos neutrófilos levou à formação de redes, como mostrado por microscopia de imunofluorescência. Em resumo, aqui se apresenta um método detalhado para estudar alterações lipídicas em neutrófilos e a formação de redes.

Introdução

Os lípidos foram mostrados para desempenhar um papel importante na homeostase celular, morte celular, as interacções hospedeiro-patogénio, e libertação de citoquinas ^1. Ao longo do tempo, o interesse eo conhecimento sobre o impacto dos lipídios na interação patógeno-hospedeiro ou inflamação têm aumentado, e várias publicações confirmam o papel central de certos lipídios, especialmente o colesterol esteróide, em respostas celulares. O tratamento farmacológico com estatinas, que são utilizados como inibidores da biossíntese do colesterol através do bloqueio 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima-A-redutase (HMG-CoA-redutase), podem actuar como....