Um protocolo otimizado para a radiomarcação eficiente de nanopartículas de ouro usando um 125 Marcado com Eu Azida grupo prostético

Summary

Um procedimento pormenorizado para a síntese de uma azida marcado com ^125I e a radiomarcação de dibenzocyclooctyne (DBCO) -Grupo-conjugados, nanopartículas de ouro de 13 nm de tamanho, utilizando uma reacção de clique sem cobre é descrito.

Abstract

Aqui, demonstramos um protocolo detalhado para a radiossíntese de um grupo protético de azida marcado com ¹²⁵I e sua aplicação à radiomarcação eficiente de nanopartículas de ouro funcionalizadas pelo grupo DBCO usando uma reação de clique sem cobre. A radioiodação do precursor estanilado (2) foi realizada usando [¹²⁵I]NaI e cloramina T como oxidante à temperatura ambiente por 15 min. Após a purificação por HPLC do produto bruto, a azida purificada marcada com ¹²⁵I (1) foi obtida com alto rendimento radioquímico (75 ± 10%, n = 8) e excelente pureza radioquímica (>99%). Para a síntese de nanopartículas de ouro de 13 nm radiomarcadas, as nanopartículas de ouro funcionalizadas com DBCO (3) foram preparadas usando um polímero de polietilenoglicol tiolado. Uma reação de clique sem cobre entre 1 e 3 deu as ¹²⁵nanopartículas de ouro marcadas com I (4) com mais de 95% de rendimento radioquímico, conforme determinado por cromatografia em camada radiofina (radio-TLC). Esses resultados indicam claramente que o presente método de radiomarcação usando uma reação de clique sem cobre promovida por cepa será útil para a radiomarcação eficiente e conveniente de nanomateriais contendo o grupo DBCO.

Introduction

A reação de clique sem cobre promovida por cepa entre azidas e ciclooctinas tem sido amplamente aplicada à marcação bio-ortogonal eficiente de uma ampla gama de biomoléculas, nanomateriais e sujeitos vivos^1-7. Devido à excelente especificidade do local e à rápida taxa de reação dessa reação de conjugação, ela também tem sido usada para sintetizar traçadores radiomarcados. Alguns ¹⁸grupos protéticos de azida ou DBCO marcados com F foram preparados para marcação in vitro de vários tipos de câncer direcionados a peptídeos e anticorpos, bem como para imagens pré-direcionadas in vivo de tumores^8-13. Além desses exemplos, a....

Protocol

Cuidado: A forma oxidada de iodo radioativo é bastante volátil e devem ser manuseados com escudos de chumbo adequados e frascos de chumbo. Todos os passos radioquímica deve ser levada a cabo em uma capa filtrou-carvão bem ventilado, e os procedimentos experimentais devem ser monitorizadas por meio de dispositivos de detecção de radioactividade.

1. Preparação dos produtos químicos e o cartucho de fase reversa para a síntese da azida ¹²⁵ I-rotulados

1. Preparação de reagentes em solução
   1. Dissolve-se 1 mg de azida do precursor (2) em 150 ul de etanol absoluto (Figura 1).
      NOTA: U....

Results

A reacção de radioiodação do precursor estanilado (2) foi realizado utilizando 150 MBq de ^[125I] NaI, ácido acético, e cloramina T à temperatura ambiente durante 15 min para proporcionar o produto marcado radioactivamente (1). Depois de purificação por HPLC preparativa da mistura em bruto, o produto desejado foi obtido com 75 ± 10% (n = 8) de rendimento radioquímico. HPLC analica revelou que a pureza radioquímica do produto marcado com ^12.......

Discussion

Em geral, o rendimento radioquímico observada da azida ¹²⁵ purificada marcada com I (1) foi de 75 ± 10% (n = 8). A marcação radioactiva foi feita com 50-150 MBq de radioactividade, e os resultados são bastante consistente radioquímica. Se ^[125I] NaI (T _1/2 = 59,4 d) que foram submetidos a decaimento radioactivo durante mais de um mês foi utilizado na reacção de radioiodação, observou-se o rendimento radioquímico de 1 a ser ligeiramente reduzida .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cloramina T trihidratada	Sigma	402869
[125I]NaI in aq. NaOH	Perkin-Elmer	NEZ033A010MC
Metabissulfito de sódio	Sigma	S9000
Ácido fórmico	Sigma	251364
Sep-Pak tC18 plus cartucho	Waters	WAT036800
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Acetona	Sigma	650501
Etanol	Sigma	459844
Gold(III) cloreto trihidratado	Sigma	520918
Tween 20	Sigma	P1379
DBCO PEG SH (MW 5.000)	NANOCS	PG2-DBTH-5k
TLC gel de sílica 60 F254	Merck
HPLC analítica	Agilent	1290 Infinity	Número do modelo
HPLC preparativa	Agilent	1260 Infinity	Número
do modelo Coluna analítica de fase reversa C18	Agilent	Zorbax Eclipse XDB-C18
Coluna preparativa de fase reversa C18	Agilent	PrepHT XDB-C18
Scanner TLC de rádio	Bioscan	AR-2000	Número do modelo
Calibrador de dose de radioisótopo	Capintec, Inc	Calibrador de dose CRC -25R	Número do modelo