Um procedimento pormenorizado para a síntese de uma azida marcado com 125I e a radiomarcação de dibenzocyclooctyne (DBCO) -Grupo-conjugados, nanopartículas de ouro de 13 nm de tamanho, utilizando uma reacção de clique sem cobre é descrito.
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Artigo de método
Um protocolo otimizado para a radiomarcação eficiente de nanopartículas de ouro usando um
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Resumo
Resumo
Aqui, demonstramos um protocolo detalhado para a radiossíntese de um grupo protético de azida marcado com 125I e sua aplicação à radiomarcação eficiente de nanopartículas de ouro funcionalizadas pelo grupo DBCO usando uma reação de clique sem cobre. A radioiodação do precursor estanilado (2) foi realizada usando [125I]NaI e cloramina T como oxidante à temperatura ambiente por 15 min. Após a purificação por HPLC do produto bruto, a azida purificada marcada com 125I (1) foi obtida com alto rendimento radioquímico (75 ± 10%, n = 8) e excelente pureza radioquímica (>99%). Para a síntese de nanopartículas de ouro de 13 nm radiomarcadas, as nanopartículas de ouro funcionalizadas com DBCO (3) foram preparadas usando um polímero de polietilenoglicol tiolado. Uma reação de clique sem cobre entre 1 e 3 deu as 125nanopartículas de ouro marcadas com I (4) com mais de 95% de rendimento radioquímico, conforme determinado por cromatografia em camada radiofina (radio-TLC). Esses resultados indicam claramente que o presente método de radiomarcação usando uma reação de clique sem cobre promovida por cepa será útil para a radiomarcação eficiente e conveniente de nanomateriais contendo o grupo DBCO.
Introdução
A reação de clique sem cobre promovida por cepa entre azidas e ciclooctinas tem sido amplamente aplicada à marcação bio-ortogonal eficiente de uma ampla gama de biomoléculas, nanomateriais e sujeitos vivos1-7. Devido à excelente especificidade do local e à rápida taxa de reação dessa reação de conjugação, ela também tem sido usada para sintetizar traçadores radiomarcados. Alguns 18grupos protéticos de azida ou DBCO marcados com F foram preparados para marcação in vitro de vários tipos de câncer direcionados a peptídeos e anticorpos, bem como para imagens pré-direcionadas in vivo de tumores8-13. Além desses exemplos, a....
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Protocolo
Cuidado: A forma oxidada de iodo radioativo é bastante volátil e devem ser manuseados com escudos de chumbo adequados e frascos de chumbo. Todos os passos radioquímica deve ser levada a cabo em uma capa filtrou-carvão bem ventilado, e os procedimentos experimentais devem ser monitorizadas por meio de dispositivos de detecção de radioactividade.
1. Preparação dos produtos químicos e o cartucho de fase reversa para a síntese da azida 125 I-rotulados
- Preparação de reagentes em solução
- Dissolve-se 1 mg de azida do precursor (2) em 150 ul de etanol absoluto (Figura 1).
NOTA: U....
- Dissolve-se 1 mg de azida do precursor (2) em 150 ul de etanol absoluto (Figura 1).
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Resultados
A reacção de radioiodação do precursor estanilado (2) foi realizado utilizando 150 MBq de [125I] NaI, ácido acético, e cloramina T à temperatura ambiente durante 15 min para proporcionar o produto marcado radioactivamente (1). Depois de purificação por HPLC preparativa da mistura em bruto, o produto desejado foi obtido com 75 ± 10% (n = 8) de rendimento radioquímico. HPLC analica revelou que a pureza radioquímica do produto marcado com 12.......
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Discussão
Em geral, o rendimento radioquímico observada da azida 125 purificada marcada com I (1) foi de 75 ± 10% (n = 8). A marcação radioactiva foi feita com 50-150 MBq de radioactividade, e os resultados são bastante consistente radioquímica. Se [125I] NaI (T 1/2 = 59,4 d) que foram submetidos a decaimento radioactivo durante mais de um mês foi utilizado na reacção de radioiodação, observou-se o rendimento radioquímico de 1 a ser ligeiramente reduzida .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por doações da Fundação Nacional de Pesquisa da Coreia, financiada pelo governo da República da Coreia, (Grant nos. 2012M2B2B1055245 e 2012M2A2A6011335) e pelo RI-Biomics Center do Instituto de Pesquisa de Energia Atômica da Coreia.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cloramina T trihidratada | Sigma | 402869 | |
| [125I]NaI in aq. NaOH | Perkin-Elmer | NEZ033A010MC | |
| Metabissulfito de sódio | Sigma | S9000 | |
| Ácido fórmico | Sigma | 251364 | |
| Sep-Pak tC18 plus cartucho | Waters | WAT036800 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Acetona | Sigma | 650501 | |
| Etanol | Sigma | 459844 | |
| Gold(III) cloreto trihidratado | Sigma | 520918 | |
| Tween 20 | Sigma | P1379 | |
| DBCO PEG SH (MW 5.000) | NANOCS | PG2-DBTH-5k | |
| TLC gel de sílica 60 F254 | Merck | ||
| HPLC analítica | Agilent | 1290 Infinity | Número do modelo |
| HPLC preparativa | Agilent | 1260 Infinity | Número |
| do modelo Coluna analítica de fase reversa C18 | Agilent | Zorbax Eclipse XDB-C18 | |
| Coluna preparativa de fase reversa C18 | Agilent | PrepHT XDB-C18 | |
| Scanner TLC de rádio | Bioscan | AR-2000 | Número do modelo |
| Calibrador de dose de radioisótopo | Capintec, Inc | Calibrador de dose CRC -25R | Número do modelo |
Referências
- Jewett, J. C., Bertozzi, C. R. Cu-free Click Cycloaddition Reactions in Chemical Biology. Chem. Soc. Rev. 39, 1272-1279 (2010).
- Debets, M. F., et al. Bioconjugation with Strained Alkenes and Alkyne. Acc. Chem. Res. 44, 805-815 (2011).
- Sletten, E. M., Bertozzi, ....
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Reimpressões e permissões
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